Ⅰ型胶原支架材料与人脂肪干细胞体外生物相容性研究

目的 观察人脂肪干细胞与I型胶原支架材料的生物相容性,为脂肪组织工程选择适宜的种子细胞载体.方法 将人脂肪干细胞与Ⅰ型胶原支架体外培养复合,采用倒置相差显微镜和扫描电镜,观察细胞在支架上黏附、生长及增殖情况并计算细胞黏附率,XTT比色法检测细胞增殖率.结果 脂肪干细胞能良好的在支架上黏附、生长和增殖.结论 Ⅰ型胶原支架材料具有良好的细胞相容性,可作为脂肪组织工程的种子细胞载体.     

基因工程促进脂肪干细胞成骨分化的研究进展

<正>大节段骨缺损是骨科、整形外科的常见疾病,严重影响患者的外形和功能。目前临床上常用自体骨移植修复,但这种方法存在着供区骨组织有限、易坏死等缺点。在过去的几十年中,骨组织再生、干细胞移植等方法为修复大量骨组织缺失提供了新的策略。脂肪干细胞(ASCs)是来自脂肪的多能干细胞,可以通过处理诱导分化为成骨细胞,实现骨再生,具有巨大的临床应用潜力。多年来,随着基因工程技术的不断发展,出现了许多对ASCs进行基因修饰以促进其成骨的方法,     

组织工程化皮瓣的构建

摘要：目的应用脂肪组织来源干细胞（ASCs）在体外构建组织工程脂肪并与已构建的复合皮组装培育,试构建出含脂肪层的组
织工程化皮瓣。方法（1）构建组织工程脂肪从脂肪组织中分离培养ASCs并进行三系分化诱导鉴定。ASCs与胶原凝胶混合并
进行体外成脂诱导,诱导15 d后分别进行倒置显微镜、油红O染色及HE染色观察。（2）构建复合皮从包皮组织中分离培养表皮
细胞（Kc）和成纤维细胞（Fb）。Fb与胶原凝胶混合后培养5 d,将Kc接种到含有Fb的凝胶表面,在液面下培养4 d后移至气-液
界面继续培养10 d形成复合皮。（3）构建含皮下脂肪组织的3层结构的皮肤复合组织将培养的复合皮与脂肪组织按正常皮肤结
构顺序组装后继续培养3 d并行HE染色观察。结果（1）ASCs具有成脂、成软骨和成骨分化能力。ASCs凝胶复合物体外成脂
诱导15 d后,可见细胞内充满圆形脂滴,呈单房或多房形,油红O染色及HE染色均显示为成熟脂滴。（2）经过气-液界面培养后,
Kc成层分化,形成基底上层。（3）组装培育后的皮肤复合组织分3层,表层Kc成层分化并形成基底上层;中层和底层连接处细胞
聚集;成脂分化的ASCs位于底层。结论分别应用Kc、Fb和ASCs三种细胞,在体外构建出组织工程化脂肪和复合皮,且按序组
装培育,可构建出组织工程化皮瓣。
     

缺氧对成熟脂肪细胞去分化影响的实验研究

目的 研究缺氧环境下成熟脂肪细胞体外培养的形态学变化,探讨缺氧环境对成熟脂肪细胞去分化的影响.方法 从成人吸脂术后抽吸物提取脂肪组织来源的干细胞,诱导为成熟脂肪细胞,在缺血缺氧的环境下培养.观察各时间段细胞的形态变化.结果 由脂肪组织来源的干细胞诱导而成的成熟脂肪细胞,在缺氧环境培养数日后,细胞从圆形变为可持续分裂的成纤维细胞状细胞.结论 成熟的脂肪细胞在一定条件下可以去分化为成纤维细胞状细胞.     

I 型胶原支架材料与人脂肪干细胞体外生物相容性研究

目的观察人脂肪干细胞与I型胶原支架材料的生物相容性,为脂肪组织工程选择适宜的种子细胞载体。方法将人脂肪干细胞与I型胶原支架体外培养复合,采用倒置相差显微镜和扫描电镜,观察细胞在支架上黏附、生长及增殖情况并计算细胞黏附率,XTT比色法检测细胞增殖率。结果脂肪干细胞能良好的在支架上黏附、生长和增殖。结论I型胶原支架材料具有良好的细胞相容性,可作为脂肪组织工程的种子细胞载体。     

促进脂肪移植的最佳SVFs浓度的实验研究

目的 探讨应用自人脂肪组织新鲜分离的不同浓度的血管基质层细胞( stromal vasvular fraction cells,SVFs)辅助脂肪移植,从而提高移植物的存活率的方法.方法 脂肪组织来自临床行吸脂术者,提取SVFs,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与浓度为①5×105个/ml(A组);②1 × 106个/ml(B组);③2×106个/ml(C组)的SVFs混合,另设对照组为完全培养基+单纯脂肪颗粒(D组),随机注射移植于6只裸鼠背部皮下.术后3个月观察移植物情况:①湿重.②切片HE 染色计数血管密度.③方网测试系统“点计数”法检测存活脂肪细胞计数以及纤维坏死组织计数.结果 ①湿重:A组(60.000±6.325) mg,B组(81.670±7.528) mg,C组(68.330±7.528) mg,D 组(48.330±7.528) mg,B组脂肪存活率均高于A、C、D组(P<0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).②血管密度:A、B、C组血管密度均高于D组,且B组明显高于其他3组(P＜0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).③点计数:B组存活脂肪细胞计数均高于A、C、D组(P＜0.05),纤维组织计数均低于D组(P ＜0.05),A、C2组之间比较差异均无统计学意义(P＞　0.05).结论 来源于人自体SVFs复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,其中1×106个/ml数量级的SVFs移植脂肪的存活率最高,更适合用于脂肪移植,具有广阔的临床应用前景.     

小鼠超声雾化吸入结核分枝杆菌噬菌体D29生物安全性的初步研究

目的探讨小鼠超声雾化吸入结核分枝杆菌噬菌体D29的生物安全性,及噬菌体D29在小鼠肺组织中的活性变化规律,旨在为临床治疗肺结核提供一新途径。方法 8只小鼠分成两组,实验组4只超声雾化吸入分枝杆菌噬菌体D29,对照组4只超声雾化吸入空白培养基,观察不同时间肺的组织学改变,并检测不同时间肺组织冲洗液中噬菌体D29的活性。结果小鼠超声雾化吸入噬菌体D29后1、2、3、24h与对照组比较,肺组织结构正常,无任何炎症性改变,肺组织冲洗液中噬菌体D29活性1h后开始急剧下降,24h后无活性。结论小鼠超声雾化吸入噬菌体D29具有较高的生物安全性,噬菌体D29在小鼠肺内的存活具有高度时间依赖性。     

高成脂脂肪干细胞系的分子克隆筛选

目的 探讨并筛选具备高成脂能力的脂肪干细胞系表面标志、可应用于脂肪组织工程的种子细胞,以提高组织工程化脂肪的构建效率.方法 胶原酶消化人脂肪组织,获得脂肪干细胞,培养扩增后成脂诱导,收集诱导成熟的脂肪细胞,天花板贴壁培养得到去分化脂肪细胞.比较去分化脂肪细胞与人脂肪干细胞的增殖能力,成脂分化能力及表面抗原表达的变化.结果 去分化脂肪细胞与脂肪干细胞的形态和增殖能力相似;去分化脂肪细胞的成脂分化能力高于脂肪干细胞;两种细胞表面抗原的表达大致相同,但去分化脂肪细胞的CD54的阳性表达高于脂肪干细胞.结论 CD54的表达可能与去分化脂肪细胞的高成脂分化能力密切相关,可能是高成脂系干细胞的特异性表面抗原标志.     

不同细胞促进脂肪移植存活的实验研究

摘要：目的探讨应用自人脂肪组织来源的不同细胞辅助脂肪移植,寻找促进移植物存活率的最佳种子细胞的有效方法,为干细
胞进一步运用于临床提供实验依据。方法从临床抽脂病人获取脂肪组织并提炼细胞,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与以下
细胞进行混合处理：（1）低氧脂肪来源间充质干细胞（A组）;（2）脂肪来源间充质干细胞（B组）;（3）血管基质层细胞（SVFs）（C
组）;（4）加完全培养基的单纯脂肪颗粒为对照组（D组）脂肪颗粒与相应细胞混合后,注射移植于6只裸鼠背部皮下。术后3个月
观察移植物情况,通过组织学、HE染色等方法进行分析。结果A~D组湿重分别为（61.67±8.165）、（91.67±1.472）、（96.67±
5.164）和（40.83±4.916）mg,A、B、C组脂肪存活率均高于D组（P<0.05）,B、C两组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）且都高
于A组。A、B、C组血管密度均高于组D,且C组明显高于其他3组（P<0.05）。A、B、C组存活脂肪细胞计数均高于D 组,且B、C
组最高（P<0.05）,纤维组织计数均低于D组（P<0.05）。结论来源于人自体干细胞复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的
成活率,其中血管基质层细胞及脂肪来源间充质干细胞移植脂肪的存活率最高。
     

去分化脂肪细胞与脂肪来源干细胞体内成脂能力比较的初步研究

目的 通过比较去分化脂肪细胞(dedifferentiated adipocytes,DA)与脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)在体内的成脂分化能力,为脂肪组织工程筛选出成脂效率高的种子细胞.方法 取健康女性脂肪抽吸术的抽吸物,使用酶消化法获取成熟脂肪细胞及脂肪来源干细胞,采用天花板贴壁法培养成熟脂肪细胞使其去分化,获取去分化脂肪细胞,各取第3代细胞进行实验.将两种细胞分别与纤维蛋白胶(fibrin glue,FG)支架体外混合培养,光镜及扫描电镜检测细胞与支架的相容性;DiI荧光染料标记细胞,将DiI标记过的细胞支架复合物(DA-FG组,去分化脂肪细胞-支架,n=8;ASCs-FG组,脂肪来源干细胞-支架,n=8)以及空白支架(空白FG组,n=8)注射于裸鼠皮下.术后8周将新生组织取出,进行大体观察和湿重测定,HE染色、H染色和油红"O"染色后进行组织学观察、纤维化比率测定以鉴定新生物的性质、来源.结果 成熟脂肪细胞经天花板贴壁法培养后变为长梭形成纤维细胞状,即去分化脂肪细胞,脂肪来源干细胞呈长梭形.细胞-支架复合物体外培养3 d后光镜及扫描电镜检测发现细胞在支架上生长良好.术后8周DA-FG、ASCs-FG组裸鼠背部皮下均有新生组织块形成,经检测后证实其为成熟脂肪块并来源于植入的种子细胞,DA-FG组新生物平均湿重大于ASCs-FG组,平均纤维化比率则低于ASCs-FG组;空白FG组无新生组织形成,支架被降解吸收.结论 去分化脂肪细胞与脂肪来源干细胞均可作为种子细胞在裸鼠皮下构建出脂肪组织,较之脂肪来源干细胞,去分化脂肪细胞构建出的组织块具有湿重大,纤维化比率低的优点.