关节镜治疗膝关节骨性关节炎的疗效观察

目的观察关节镜下清理术对膝关节骨性关节炎治疗的效果.方法回顾分析膝关节镜下清理术治疗膝关节骨性关节炎206例(231个膝关节),包括对术前X线检查分度、术中根据 Ogilive-Harris标准的软骨退变分度、术前、术后一周及术后3个月依据 Lysholm膝关节功能评分进行评价.结果 X线分度和软骨退变程度与Lysholm膝关节功能评分无线性相关关系,术后3个月通过股四头肌功能锻炼,较术后一周的治疗效果有所提高.结论关节镜下清理术治疗骨性膝关节炎的疗效较确切; X线分度和软骨退变程度与Lysholm膝关节功能评分无线性相关关系,术后3个月通过股四头肌功能锻炼,较术后一周的治疗效果有所提高.     

经皮踝外侧韧带复合体重建治疗慢性踝外侧不稳

[目的]探讨经皮功能重建踝关节外侧韧带复合体治疗慢性踝关节不稳的临床疗效。[方法]2014年1月~2018年2月,符合纳入标准的47例慢性踝关节不稳患者随机分为两组,其中,切开组23例采用常规切开术式重建距腓前韧带(ATFL)和跟腓韧带(CFL),经皮组24例采用超声定位,经皮建立骨隧道重建ATFL和CFL。比较两组间手术时间、围术期并发症、踝背伸-跖屈活动度(ROM)、AOFAS评分、VAS评分,应力位影像测量距骨前移度和倾斜度。[结果]术中切开组2例出现腓浅神经损伤。经皮组手术时间、切口总长度显著小于切开组,差异有统计学意义(P<0.001)。切开组术后4例切口边缘处坏死,而经皮组1例切口渗液。两组患者随访26~30个月,平均(27.39±2.51)个月。术后6个月时,经皮组ROM显著大于切开组(P<0.05)。随时间推移两组患者AOFAS评分均显著增加,而VAS评分显著减少(P<0.001),但是两组相同时间点AOFAS评分和VAS评分的差异均无统计学意义(P>0.05)。应力位X线测量方面,术后两组患者距骨前移距度和距骨倾斜角均较术前显著减少(P<0.001)。但是两组相同时间点在距骨前移距度和距骨倾斜角的差异均无统计学意义(P>0.05)。[结论]经皮踝关节外侧韧带复合体重建治疗慢性踝关节不稳的效果与常规开放手术相当,但具有手术时间短、创伤小、并发症少的优点。     

腺病毒载体Ad-BDNF-EGFP构建及其在神经干细胞中的表达

摘要 目的 研究腺病毒载体Ad-BDNF -EGFP的构建及在神经干细胞（NSCs）中的表达。方法 通过RT-PCR从在大鼠的海马中获得BDNF基因,通过基因克隆以及HEK293包装,获得了含增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组腺病毒表达载体pAd-BDNF-EGFP,将其感染原代培养的神经干细胞,观察EGFP及BDNF两种基因的表达,镜下测定转染率,并检测RT-PCR产物,证实BDNF的存在。转染后的神经干细胞经G418筛选,抗性细胞传代扩增后获得成功转染BDNF基因的NSCs克隆。结果 荧光显微镜下可见感染后的NSCs表达EGFP而发出绿色荧光;通过RT-PCR证明感染后的NSCs具有表达BDNF的能力;用ELISA鉴定细胞上清中分泌的BDNF, 72h的含量达到最高值,为12.78ng/ml;证明通过构建病毒的感染可以使神经干细胞获得分泌BDNF的能力,且EGFP基因可作为神经干细胞移植研究中良好的示踪剂。结论 腺病毒病毒介导EGFP基因及BDNF基因在大鼠胚胎神经干细胞中成功表达,为应用以神经干细胞直接作为基因靶细胞,介导基因治疗中枢神经系统疾病莫定了基础。     

腺病毒载体Ad-BDNF-EGFP的构建和在神经干细胞中的表达

目的研究腺病毒载体Ad-BDNF-EGFP的构建及其在神经干细胞(NSCs)中的表达。方法通过RT-PCR从大鼠海马中获得BDNF基因,通过基因克隆、HEK293包装,获得含增强绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体pAd-BDNF-EGFP,将其感染原代培养的神经干细胞,观察EGFP及BDNF2种基因的表达,镜下测定转染率,并检测RT-PCR产物,证实BDNF的存在。转染后的神经干细胞经G418筛选,抗性细胞传代扩增后获得成功转染BDNF基因的NSCs克隆。结果荧光显微镜下可见感染后的NSCs表达EGFP而发出绿色荧光;通过RT-PCR证明感染后的NSCs具有表达BDNF的能力;用ELISA鉴定细胞上清中分泌的BDNF,72h的含量达到最高值,为12.78ng/mL;证明通过构建病毒的感染可以使神经干细胞获得分泌BDNF的能力,且EGFP基因可作为神经干细胞移植研究中良好的示踪剂。结论腺病毒病毒介导EGFP基因及BDNF基因在大鼠胚胎神经干细胞中成功表达,为应用以神经干细胞直接作为基因靶细胞,介导基因治疗中枢神经系统疾病奠定了基础。     

口腔鳞状细胞癌中PD-L1的表达与P16、HPV感染以及淋巴结转移关系分析

目的观察口腔鳞状细胞癌中程序性死亡分子-L1配体(PD-L1)的表达与乳头瘤病毒-16 (P16)、人乳头瘤病毒(HPV)感染以及淋巴结转移关系,初步探讨PD-L1在口腔鳞状细胞癌病情发展中的作用。方法以本院2017年6月至2018年6月期间收集到的口腔鳞状细胞癌组织蜡块为研究标本,行采用免疫组化染色法检测组织标本PD-L1、P16及HPV表达情况。观察PD-L1、P16、HPV的表达情况,并采用Spearman等级相关性分析法分析PD-L1与P16、HPV感染以及淋巴结转移关系的相关性。结果 51例口腔鳞状细胞癌组织中,PD-L1呈阳性表达44例(86.27%),PD-L1呈阴性表达7例(13.72%),P16呈阳性表达22例(43.14%),P16呈阴性表达29例(56.86%)。口腔鳞状细胞癌组织中的PD-L1表达与P16表达呈负相关(rs=-0.819,P=0.000),与淋巴结转移分期之间呈负相关(rs=-0.736,P=0.000),与HPV感染呈正相关(rs=0.653,P=0.000)。结论 PD-L1在口腔鳞状细胞癌组织中呈高度表达,且与口腔鳞状细胞癌病情发展标志物P16、HPV密切相关,同时在淋巴结转移中也具有促进作用,因此,深入研究PD-L1在口腔鳞状细胞癌病情发展的作用,有助于口腔鳞状细胞癌免疫疗法的完善。     

PRP和HA治疗膝关节早期骨关节炎的临床疗效观察

目的:比较关节腔内注射富血小板血浆(PRP)和透明质酸钠(HA)治疗Ⅰ～Ⅲ期膝关节骨性关节炎的临床疗效。方法:选择86例Keligren Lawrence分级(K-L分级)为Ⅰ～Ⅲ期的膝骨关节炎患者,采用随机数字表法将其分为HA组45例和PRP组41例。两组患者分别采用关节镜探查清理后,关节腔内注射2.5 mL HA和3 mL PRP进行治疗。患者在治疗前和完成全部注射后的1、3、6、12个月均进行检查并记录美国西部Ontario与Mc Master大学骨关节炎指数(WOMAC)评分。比较两组治疗效果以及不同时间点的疗效。结果:治疗后,两组患者WOMAC评分较治疗前均明显降低(P<0.05);治疗后1、3个月,两组WOMAC评分无统计学差异(P>0.05);治疗后6个月和12个月,PRP组WOMAC评分明显低于治疗后1个月和3个月时(P<0.05),且PRP组WOMAC评分明显低于HA组(P<0.05)。结论:关节内注射PRP治疗膝关节软骨退行性病变安全有效,可缓解疼痛,改善患者肢体功能,提高患者治疗后长期疗效及其生活质量。     

E-钙粘附素/β-连环素复合体对孕鼠神经干细胞迁移和归巢的影响

[目的]干细胞的微环境是影响干细跑行为的关键因素之一,微环境中的粘附分子E-钙粘附素是其重要组成部分,在微环境中扮演重要角色,它功能的发挥离不开β-连环素,常作为一种复合体研究他们的功能。本课题采用实时定量PCR技术测量神经干细胞在原代和传代4⁶代后E-钙粘附素和β-连环素的表达量是否有所变化,同时在蛋白表达水平借助流式细胞技术测量β-连环素相应的表达变化,进而判断这两种粘附分子在神经干细胞的传代过程中有何影响,为神经干细胞的迁移、植入的研究打下基础。[方法]孕鼠神经干细胞若干,为了说明前后实验细胞均为神经干细胞,本实验在取得细胞之时,立刻取少量神经干细胞行特异性Nestin染色,证明其并未分化。取一部分进行实时定量PCR检测E-钙粘附素和β-连环素的含量,毕竟这是在RNA水平借助实时定量PCR来测量的,为了佐证本结论,在蛋白水平借助流式细胞计数测量β-连环素的含量变化,β-连环素是一种胞浆蛋白,在细胞核内也有少量的表达,且核内核外保持一种动态的平衡,β-连环素处于E-钙粘附素/β-连环素复合体的核心部位,它表达的变化也间接体现了E-钙粘附素/β-连环素复合体的变化。剩余的继续培养,保持传代不分化,传代46代后E-钙粘附素和β-连环素的表达量是否有所变化,同时在蛋白表达水平借助流式细胞技术测量β-连环素相应的表达变化,进而判断这两种粘附分子在神经干细胞的传代过程中有何影响,为神经干细胞的迁移、植入的研究打下基础。[方法]孕鼠神经干细胞若干,为了说明前后实验细胞均为神经干细胞,本实验在取得细胞之时,立刻取少量神经干细胞行特异性Nestin染色,证明其并未分化。取一部分进行实时定量PCR检测E-钙粘附素和β-连环素的含量,毕竟这是在RNA水平借助实时定量PCR来测量的,为了佐证本结论,在蛋白水平借助流式细胞计数测量β-连环素的含量变化,β-连环素是一种胞浆蛋白,在细胞核内也有少量的表达,且核内核外保持一种动态的平衡,β-连环素处于E-钙粘附素/β-连环素复合体的核心部位,它表达的变化也间接体现了E-钙粘附素/β-连环素复合体的变化。剩余的继续培养,保持传代不分化,传代4⁶代,即2周左右,再一次重复前面的操作,统计前后的结果有无差别。[结果]原代及传代培养形成的克隆球进行神经干细胞特异性抗体巢蛋白(Nestin)免疫荧光染色时发绿色荧光,呈阳性反应。应用实时定量PCR技术发现神经干细胞传46代,即2周左右,再一次重复前面的操作,统计前后的结果有无差别。[结果]原代及传代培养形成的克隆球进行神经干细胞特异性抗体巢蛋白(Nestin)免疫荧光染色时发绿色荧光,呈阳性反应。应用实时定量PCR技术发现神经干细胞传4⁶代后,E-钙粘附素和β-连环素的含量明显增多,且差别具有统计学意义(P<0.05);相应的流式细胞技术测量β-cat的含量变化,发现β-连环素的含量也明显增多,且差别同样具有统计学意义(P<0.01)。[结论]试验中神经干细胞在传代的过程中,不论是在RNA层面还是在蛋白层面,粘附分子的表达均有提高,作者认为E-钙粘附素/β-连环素复合体的含量变化对神经干细跑传代中保持神经干细胞的稳定性起着一定作用,为进一步研究神经干细胞粘附分子对神经干细胞的迁移、增殖、分化、归巢和成熟的研究以及后续的临床应用提供了实验数据。     

E-钙粘附素的研究进展

E-钙粘附素(E-Cadherin,E-cad)是粘附分子中钙离子依赖的细胞粘附素家族(Ca2+-dependent cell adhesion molecule family)中的一员,对维持正常上皮细胞形态和结构完整性起着重要作用.本文就E-cad的结构、功能、调控等方面作一综述.