济南地区婴幼儿腹泻病杯状病毒的流行特征

目的 阐明山东济南地区婴幼儿腹泻中杯状病毒感染的流行状况及其特征。方法 收集济南市儿童医院婴幼儿病毒性腹泻粪便标本，使用杯状病毒特异性引物对标本进行RT—PCR检测。将杯状病毒阳性PCR产物纯化后，进行克隆和序列分析，使用BioEdit和MEGA软件与GenBank中的参考株进行核苷酸序列同源性分析并绘制系统进化树。结果在212例病毒性腹泻标本中，杯状病毒RT—PCR阳性62例，检出率为29．25％。经序列分析，所有杯状病毒均为诺如病毒基因组Ⅱ型。结论杯状病毒是山东地区婴幼儿腹泻病的主要病原之一，目前以诺如病毒基因组Ⅱ型毒株流行为主。     

以人甲胎蛋白启动子控制表达HIV-1vpr基因的重组腺病毒诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡作用的研究

目的研究人甲胎蛋白(AFP)启动子控制表达HIV-1 vpr基因的重组腺病毒对AFP(+)肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡的作用,评估以该策略利用vpr进行肿瘤特异性基因治疗的可行性.方法将以AFP启动子控制HIV-1vpr表达的重组腺病毒rvAdAFP-vpr和空白载体rvAd-null分别感染AFP(+)的肝癌细胞BEL-7402和AFP(-)的肝癌细胞SMMC-7721,利用流式细胞仪检测Vpr的特异性表达和细胞周期分布,用细胞荧光染色和线粒体膜电位检测等方法观察细胞凋亡.结果与对照病毒rvAd-null相比,重组腺病毒rvAdAFP-vpr只在AFP(+)肝癌细胞中表达HIV-1Vpr,并诱导肝癌细胞的细胞周期G2期阻滞和细胞凋亡,而在AFP(-)肝癌细胞中不明显表达Vpr,不能显著诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡.结论重组腺病毒rvAdAFP-vpr对于Vpr的表达是AFP表达特异性的,可有效诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡,有望用于AFP(+)肝癌的基因治疗研究.     

关节镜下Broström-Gould术治疗慢性踝关节外侧不稳

目的探讨关节镜下Brostr?m-Gould术治疗慢性踝关节外侧不稳的疗效。方法回顾性分析2017年3月-2019年1月该院23例慢性踝关节外侧不稳患者的临床资料,患者均采用关节镜下Brostr?mGould术修复踝关节外侧副韧带。其中,男14例,女9例,年龄19～48岁,平均24.7岁,术前行MRI扫描和应力X线检查,术后U形石膏固定踝关节于中立位,2周后更换功能靴并开始功能锻炼,术后第6周在护踝保护下负重行走。采用美国足踝外科协会(AOFAS)评分标准及视觉模拟评分法(VAS)评估疗效。结果术后随访13～28个月(平均19.5个月),AOFAS评分从术前(52.8±14.3)分(27～65分)增加到末次随访(91.2±6.4)分(78～100分),术前术后比较,差异有统计学意义(P 0.01);术前VAS评分(6.9±1.7)分,明显高于末次随访时(1.4±0.8)分,术前术后比较,差异有统计学意义(P 0.01)。所有病例均无伤口感染,1例患者出现了腓浅神经损伤的症状,经口服甲钴胺胶囊10周和物理治疗,3个月后恢复。所有病例至末次随访时均未观察到踝关节不稳定征象。结论全关节镜下Brostr?m-Gould术治疗慢性踝关节外侧不稳,近期疗效满意。     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白特异性单克隆抗体(McAb)，为SARS的快速诊断及致病机制的研究提供实验材料。方法 用纯化的重组SARS-CoVN蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合和亚克隆后获得分泌针对N蛋白的杂交瘤细胞株，用Western blot和间接免疫荧光法检测这些细胞株分泌的单克隆抗体特异性，并将N蛋白分3段表达初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。结果 通过细胞融合和3轮克隆化，筛选出分泌抗N蛋白的6个杂交瘤细胞株。Western blot及免疫荧光显示，获得的McAb可与SARS-CoVN蛋白及SARS-CoV发生特异性反应，有4个细胞株分泌的抗体的识别位点位于N蛋白N端，2个位于C端。结论 获得了SARS-CoV特异性单克隆抗体并进行了初步定位，可用于SARS的早期诊断及致病机制研究。     

小鼠轮状病毒EW株VP7基因的克隆及其在重组腺病毒中的表达

目的：构建表达小鼠轮状病毒(EDIM)EW株VP7基因的重组腺病毒，以在小鼠模型上研究轮状病毒的免疫保护机制。方法：用RT-PCR方法扩增EDIM VP7全长cDNA并进行基因序列分析，将所得的VP7基因片段插入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV，获得重组质粒pShuttleCMV-EVP7，将该质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183获得重组腺病毒质粒pAdCMV-EVP7，将该质粒线性化后转染293细胞包装重组腺病毒rvAdEVP7。以rvAdEVP7感染293细胞，并分别应用电子显微镜、PCR、RT-PCR和Western blot等方法观察rvAdEVP7的形态、VP7基因整合、遗传稳定性、VP7基因在细胞内转录及表达等有关生物学特性。结果：获得了小鼠轮状病毒的全长cDNA，重组腺病毒rvAdEVP7具有典型的腺病毒形态，PCR、RT-PCR和Western blot等分子生物学方法分析显示：rvAdEVP7中确有特异性的VP7基因稳定整合；有较好的遗传稳定性；感染293细胞后能有效转录；可表达轮状病毒主要结构蛋白VP7。结论：成功构建含VP7基因的重组腺病毒rvAdEVP7，为进一步研究轮状病毒的免疫保护机制打下了基础。     

7型腺病毒疫苗株基因克隆及其右侧末端Sma ⅠH片段的核苷酸序列分析

目的获得７型腺病毒（Ａｄ７）载体构建的基本元件，为构建Ａｄ７载体及阐明其基因组一级结构打下基础。方法用改良Ｈｉｒｔｓ法提取Ａｄ７ＤＮＡ，酶切后克隆于质粒载体，克隆了ＸｈｏⅠＡ＋Ｄ片段（１７０－７６５ｍｕ）、Ｄ片段（１７０－２２９ｍｕ）、Ｅ片段（１０８－１４１ｍｕ）、Ｆ＋Ｇ片段（１４１－１７０ｍｕ）、Ｇ片段（１５８－１７０），用ＥｃｏＲⅠ＋ＸｈｏⅠ双酶切，克隆了７６５－８７ｍｕ，用ＳａｍⅠ＋ＥｃｏＲⅠ双酶切，克隆了８７０－９７４ｍｕ。用腺病毒ＤＮＡ做为模板测定了Ａｄ７疫苗株右侧末端ＳｍａⅠＨ片段（９７４－１００ｍｕ）核酸苷序列，根据所测序列设计引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）获得右侧末端，并对其再次测序证实。结果建立了Ａｄ７疫苗株部分基因文库（１０８－１００ｍｕ），完成Ａｄ７疫苗株ＳｍａⅠＨ片段核苷酸序列。结论这一结果为阐明Ａｄ７基因组一级结构及构建Ａｄ７载体奠定了基础。     

《公共卫生信息系统指标代码体系与数据结构》标准的制定与应用

介绍了北京市公共卫生信息系统指标代码体系与数据结构建设步骤、设计与分类、标准编写依据、标准应用效果等方面的问题。通过制定、发布和实施公共卫生信息系统地方标准，统一了各业务系统的基本信息项定义，规范了公共卫生领域内信息系统交换标准。并解决了各信息系统间数据不能直接交换和共享的问题。     

昆虫细胞偏爱密码子优化的HPV16L1基因在昆虫和哺乳动物细胞中的表达

目的获得有效表达人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1基因的重组杆状病毒和腺病毒，为研究HPV的免疫保护机制提供材料。方法按照昆虫细胞密码子偏爱优化并合成HPV16LI基因，利用Bac—to-Bac昆虫表达系统获得表达HPV16L1基因的重组杆状病毒，利用AdEasy腺病毒载体系统获得表达HPV16L1基因的重组腺病毒载体。通过间接免疫荧光和Westernblot对HPV16L1基因表达进行鉴定，利用负染电子显微镜观察病毒样颗粒（VLP）的形成。结果获得了稳定表达HPV16L1蛋白的重组杆状病毒和重组腺病毒载体，在Sf9细胞和293细胞中可有效表达能被抗HPV16L1单克隆抗体识别的L1蛋白，分子质量单位为56ku，在Sf9细胞中可观察到VLP的形成。结论按照昆虫细胞密码子偏爱进行优化的HPV16L1基因，在昆虫细胞和哺乳动物细胞内均可有效表达。