颈椎前路手术早期并发症的原因分析及护理干预

颈椎前路手术的解剖比较复杂,术野较小且比邻重要器官,难度大,早期并发症发生率为13%～30%[1]。我科2003-01～2005-12共施行颈椎前路手术83例,术后发生并发症11例,发生率为13.2%。现将有关并发症的原因分析及护理总结如下。1临床资料本组男54例,女29例,年龄29～63岁,平均45.6岁。其中颈椎间盘突出15例,颈椎病42例,颈椎骨折与脱位26例。采用椎体次切或椎间盘摘除取髂骨植骨、钢板内固定71例,椎体次切肽网植入钢板内固定12例。手术均痊愈出院。2并发症的原因分析及护理干预2.1喉上神经损伤喉上神经与甲状腺上动脉、静脉伴行,横向走行于静动脉…     

嵌合腺病毒体外对人白血病细胞U937的感染及生长抑制作用

目的研究嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP对人白血病细胞U937的感染及生长抑制作用。方法以空载体腺病毒Ad5GFP作为对照,将嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP感染人白血病细胞株U937,通过荧光倒置显微镜、流式细胞术和透射电镜分析病毒对U937细胞的感染性和复制活性;应用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析细胞的增殖反映该病毒对细胞的杀伤作用;通过AnnexinV-APC/7-AAD双染流式细胞术分析早期细胞凋亡率,并采用免疫印迹法检测凋亡相关蛋白多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的裂解。结果嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP能感染人白血病细胞株U937,并能在其中复制产生大量子代病毒;该嵌合腺病毒对U937细胞株的感染效率、生长抑制率均高于空载体腺病毒Ad5GFP,差异有统计学意义(P<0.05);嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP诱导U937细胞发生凋亡的细胞比例较空载体腺病毒Ad5GFP高,差异有统计学意义(P<0.05),并且检测到随时间逐渐增加的PARP裂解蛋白。结论嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP可有效感染人白血病细胞株U937,并能在其中复制,能显著抑制人白血病细胞株U937生长并诱导其凋亡。     

柯萨奇病毒A组16型病毒样颗粒免疫原性的初步研究

目的 研究柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus A16,CA16）病毒样颗粒（Virus-like particles,VLPs）的免疫原性.方法 利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统共表达3CD及P1蛋白,制备CA16病毒样颗粒,通过SDS-PAGE及透射电镜等方法对VLPs进行鉴定,以氢氧化铝佐剂免疫ICR小鼠,并对乳鼠经颅腔攻毒.对病毒样颗粒疫苗的免疫原性及保护效果进行评价.结果 将重组CA163CD及P1蛋白的杆状病毒转染SF9细胞,可以产生类似CA16病毒颗粒的大小为27 ～ 30 nm的VLPs.小鼠免疫试验结果显示CA16 VLPs可以刺激产生较高水平的抗CA16病毒的特异性IgG抗体及中和抗体,乳鼠攻毒试验结果显示,母传抗体保护率高达90％.结论 CA16 VLPs可以刺激小鼠产生较高水平的体液免疫反应,并且母传抗体可以保护乳鼠抵御经颅腔的病毒攻击.     

昆虫细胞偏爱密码子优化的HPV16L1基因在昆虫和哺乳动物细胞中的表达

目的获得有效表达人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1基因的重组杆状病毒和腺病毒，为研究HPV的免疫保护机制提供材料。方法按照昆虫细胞密码子偏爱优化并合成HPV16LI基因，利用Bac—to-Bac昆虫表达系统获得表达HPV16L1基因的重组杆状病毒，利用AdEasy腺病毒载体系统获得表达HPV16L1基因的重组腺病毒载体。通过间接免疫荧光和Westernblot对HPV16L1基因表达进行鉴定，利用负染电子显微镜观察病毒样颗粒（VLP）的形成。结果获得了稳定表达HPV16L1蛋白的重组杆状病毒和重组腺病毒载体，在Sf9细胞和293细胞中可有效表达能被抗HPV16L1单克隆抗体识别的L1蛋白，分子质量单位为56ku，在Sf9细胞中可观察到VLP的形成。结论按照昆虫细胞密码子偏爱进行优化的HPV16L1基因，在昆虫细胞和哺乳动物细胞内均可有效表达。     

一株蝙蝠轮状病毒的分离和基因组分析

目的 了解云南地区蝙蝠轮状病毒的基因组特征和进化关系,并分离病毒。方法 采集84只云南地区蝙蝠,经解剖后收集肠道组织,混合为3个样本库后进行高通量测序。病毒全基因组扩增采用RT-PCR和RACE方法,使用RVA自动分型工具进行分型。采用MA104细胞分离培养病毒株。结果 高通量测序结果显示1个样本库中存在A组轮状病毒相关的序列。随后成功分离该蝙蝠轮状病毒并扩增获得全长或接近全长的11条基因组序列。基因组分型结果显示该病毒株属于G3-P[3]-I8-R3-C3-M3-A9-N3-T3-E3-H6基因型,命名为CHYNC82。序列分析表明,CHYNC82的4条基因片段(VP1、NSP2、NSP3和NSP4)与蝙蝠病毒株MYAS33和MSLH14亲缘关系近且进化树聚为一支;VP2与人09US7118株和猿猴TUCH株进化距离最近,处于同一进化树枝;VP6和NSP1与已知病毒同源性较低,但与蝙蝠和人来源轮状病毒具有共同进化起源;而剩余4条基因片段(VP7、VP4、VP3和NSP5)与人类病毒株包括CMH222株和MS2015-1-0001株具有最高同源性,且处于同一进化树枝。结论 推测CHYN...     

颈椎前路手术早期并发症的原因分析及护理干预

颈椎前路手术时因局部解剖比较复杂,术野较小且比邻重要器官,因此难度大,早期并发症多,发生率为13%~30%[1]。我科自2003年1月~2005年12月共施行颈椎前路手术83例,术后发生并发症11例,发生率为13.2%。现将有关并发症的原因分析及护理总结如下。1临床资料本组83例:男54例,女29例;     

尼帕病毒N基因核酸检测方法对假病毒阳性标准品的制备及鉴定

  目的  针对致死率极高的尼帕病毒,制备安全、稳定的含有尼帕病毒N基因片段的重组假病毒颗粒阳性标准品。  方法  人工合成含有尼帕病毒N基因片段的核苷酸序列并导入CD513B慢病毒载体,与包装质粒同时转染HEK293T细胞,超速离心浓缩纯化,电镜观察假病毒颗粒形态,感染实验验证假病毒功能,并进行线性、稳定性和均一性检测。  结果  包装并纯化后的假病毒颗粒浓度较高,直径在100～200 nm,可见明显的G蛋白刺突,感染实验绿色荧光蛋白信号强且不同温度下储存稳定性良好,均一性检测变异系数小于1%。   结论  成功构建含有尼帕病毒N基因片段的假病毒颗粒,可作为阳性对照品在尼帕病毒核酸提取和检测过程中实现全程质量控制。     

假复型技术在Aβ寡聚体电镜检测中的应用研究

目的 探讨改进假复型技术用于电镜直接观察Aβ寡聚体特定成分ADDLs的效果.方法 利用假复型技术原理,对ADDLs进行分次点样于琼脂糖凝胶,逐步富集,之后再进行负染制样.结果 在透射电镜下观察到大小从5～10nm左右球形、颗粒状结构,以及20～30nm的卷曲结构.结论 假复型技术用于ADDLs的浓缩与电镜制样是快捷、有效的,为进一步开展Aβ寡聚体的电镜观察和超微结构研究奠定了基础.     

重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP的构建及其对UT-7/Epo细胞感染效率的检测

目的构建携带报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,并且研究该病毒对人白血病细胞UT-7/Epo的感染效率及其在细胞中的复制。方法先通过分子克隆技术构建重组腺病毒质粒pAd5F11pTPEGFP,然后利用脂质体转染法,将其转染至HEK293细胞包装出重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,经酶切和PCR鉴定正确后,扩增并纯化得到滴度较高的重组腺病毒。以空载体病毒Ad5GFP作为对照,将纯化的重组腺病毒感染UT-7/Epo细胞,经流式细胞仪检测在不同感染复数(MOI)下荧光阳性细胞比例,即为Ad5F11pTPEGFP病毒对UT-7/Epo细胞的感染效率,同时将冻融后的重组腺病毒感染的UT-7/Epo细胞上清感染HEK293细胞,48 h后观察GFP在HEK293细胞中的表达。结果成功制备了重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,其对UT-7/Epo细胞的感染效率明显高于空载体对照病毒Ad5GFP,在MOI为200时,感染效率达98.2%,而空载体病毒在MOI为200时,对UT-7/Epo细胞的感染效率仅为29.7%。感染了重组腺病毒的UT-7/Epo细胞冻融上清感染新的HEK293细胞后,荧光显微镜下观察到GFP的表达。结论成功构建了重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,其对UT-7/Epo细胞有较高的感染效率,并能在其中复制。     

六株不同地区分离的H7N9流感病毒假病毒制备与生物学特性研究CSCD

目的 选择不同地区分离的H7N9亚型流感病毒代表株,制备各代表株的假病毒,为H7N9疫苗对不同地区毒株的免疫保护效果评价奠定基础.方法 通过对29株H7N9流感病毒血凝素（Hemagglutinin,HA）的氨基酸序列分析,获得6株不同地区H7N9亚型流感病毒代表株病毒;采用基于慢病毒载体的假病毒包装系统,以HA与神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）作为包膜质粒,包装获得6株带有荧光素酶报告基因的假病毒;通过电镜负染、Western blot检测、感染MDCK后的荧光素酶读值和血凝试验等了解6株假病毒的生物学特性,通过血清交叉中和试验了解其在中和抗体检测中的应用情况.结果 筛选获得6株不同地区分离的H7N9流感病毒代表株并制备了相应的假病毒颗粒,电镜下可观察到典型的流感病毒形态,Western blot可检测到HA、NA和P24的表达;滴度测定结果显示6株假病毒对MDCK细胞的感染力为104- 105TCID50/50μl,血凝活性可达64- 512;SH1上海株H7N9 HA疫苗免疫血清针对6株流感假病毒100TCID50剂量的中和效力不同,提示6株假病毒可用于疫苗的交叉免疫效果评价.结论 成功获得6株H7N9不同地区代表株流感假病毒,为疫苗的免疫效果评价奠定了基础.