紫草素通过激活自噬相关的 E1连接酶 7信号通路诱导结肠癌细胞自噬

目的研究紫草素对人结肠癌细胞系 SNU?407增殖和自噬的影响,及其潜在的分子机制。方法通过细胞计数试剂盒 ? 8(CCK?8)检测细胞存活率,用 Hoechst 33258染色法和流式细胞术分析细胞生长情况,采用蛋白质印迹法(Western Blot)分析不同紫草素浓度(0μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L和 30 μmol/L)处理前后自噬相关的 E1连接酶 7(ATG7)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和死亡受体(Caspase?8,Caspase?3,PARP)蛋白表达情况。结果紫草素以时间和剂量依赖性方式诱导 SNU?407细胞凋亡和自噬,在紫草素处理的 SNU?407细胞中观察到 ATG7表达水平显著升高;与 0 μmol/L的紫草素相比, 10 μmol/L、20 μmol/L和 30 μmol/L紫草素处理后 SNU?407细胞的 ATG7/自噬相关的 E1连接酶 5(ATG5)相对表达量分别显著增加［(176±9)%、(212±13)%和(293±11)%］。与 GFPi(阴性对照质粒 pSUPER_GFP siRNA)阴性对照组相比, ATG被沉默的 shATG7(ATG7的 RNA干扰质粒 pSUPER_ATG7 siRNA)组 LC3?Ⅱ/LC3?Ⅰ比值显著低于 GFPi阴性对照组［(8.25±1.36)比(97.45±1.98),P＜0.001］ATG7沉默后抑制了紫草素诱导的 SNU?407细胞自噬;荧光显微镜结果和流式细胞术分析证实紫草素诱导结肠癌细胞凋亡;质印迹法印迹分析显示紫草素通过 MAPK活化诱导结肠癌细胞凋亡,激活死亡受体(FADD)调节细胞凋亡蛋白(Caspase?8,Caspase?3,PARP)表达。此外,紫草素通过增加 ATG7的表达水平,进而下调促进细胞自噬的 p62表达。结论紫蛋白,草素通过激活 ATG7信号通路诱导人结肠癌细胞系 SNU?407细胞凋亡和自噬。     

紫草素通过抑制上皮间质转化缓解结肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药

目的:探讨紫草素在结肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药中的作用及Src-FAK通路的介导作用。方法:以结肠癌HT-29细胞为研究对象构建5-FU耐药细胞HT-29/DR、紫草素处理细胞。克隆形成实验检测细胞克隆形成能力; MTT法检测细胞活力; 蛋白印迹实验检测p-Src、p-FAK、E-cadherin及Fibronectin蛋白表达。结果:HT-29/5-FU细胞构建成功,耐药指数为6.5。与HT-29细胞比较,5-FU处理后HT-29/5-FU细胞克隆形成率显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。5 μmol/L紫草素与10 μmol/L紫草素均可降低HT-29/5-FU和HT-29细胞的存活率。5 μmol/L紫草素与10 μmol/L紫草素均能显著降低5-FU对HT-29/5-FU细胞的IC50,干预前后比较,差异有统计学意义(P<0.01)。5 μmol/L紫草素与10 μmol/L紫草素均能降低HT-29/5-FU细胞p-Src、p-FAK及Fibronectin蛋白表达水平,且能上调E-cadherin蛋白表达,干预前后比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:紫草素通过抑制Src-FAK通路抑制上皮间质转化,从而缓解结肠癌细胞5-FU耐药。     

紫草素通过激活活性氧自由基诱导大肠癌细胞的凋亡

目的：研究紫草素通过激活活性氧（ROS）自由基诱导大肠癌细胞凋亡的作用机制。方法：通过MTT测定法检测紫草素对人结肠癌细胞系HCT116和SW480细胞活力的影响,结合Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞术检测细胞凋亡情况;通过Caspase 3/9活性测定试剂盒检测半胱天冬酶活性,使用ROS检测试剂盒检测紫草素处理对HCT116和SW480细胞中ROS水平的影响,并借助Western Blotting检测Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达情况。结果：细胞活力检测结果显示,人正常结肠黏膜上皮细胞系NCM460对紫草素干预不敏感,而紫草素对人结肠癌细胞系HCT116和SW480细胞活力表现出显著的抑制作用（均P<005）。在紫草素干预后,Western Blotting分析检测到细胞周期蛋白D、c-Myc、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达水平显著下调（均P<005）。同时,紫草素以剂量依赖性方式上调了Caspase3和Caspase9蛋白表达水平（均P<005）。流式细胞术检测结果表明,经10 μmol/L紫草素处理24 h后,HCT116和SW480细胞凋亡率增加至592%和656%,而几乎没有坏死细胞（Annexin V-,PI+）;并检测到HCT116和SW480细胞线粒体膜电位被去极化。ROS水平检测结果显示,紫草素以剂量依赖性方式上调了HCT116和SW480细胞ROS水平。结论：紫草素通过线粒体介导途径诱导结肠癌细胞凋亡,Bcl-2蛋白家族和细胞内ROS水平升高在该过程中发挥重要作用。     

紫草素对人大肠癌HT29细胞化疗增敏作用研究

目的:研究紫草素对人大肠癌HT29细胞奥沙利铂化疗增敏作用及其机制。方法:体外培养并取对数生长期人大肠癌HT29细胞,设紫草素(0.5 mg·L^-1)、奥沙利铂(25 mg·L^-1)、联合[紫草素(0.5 mg·L^-1)+奥沙利铂(25 mg·L^-1)]组,并设空白对照组。给药干预48 h后,CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、激活型Caspase-3的表达。结果:较空白对照组,紫草素组人大肠癌HT29细胞处于G0/G1期比例升高且G2/M期比例降低(P<0.05;P<0.01),Bax蛋白表达量升高且Bcl-2表达量降低(P<0.05;P<0.01)、Bax/Bcl-2值升高(P<0.01),激活型Caspase-3蛋白表达量升高(P<0.01)。较奥沙利铂组,联合组人大肠癌HT29细胞增殖率明显降低(P<0.05);细胞凋亡率显著升高(P<0.01);处于G0/G1期细胞比例升高而G2/M期比例降低(P<0.05;P<0.01);Bax、激活型Caspase-3蛋白表达量升高且Bcl-2表达量降低(P<0.05;P<0.01),Bax/Bcl-2值显著升高(P<0.01)。结论:紫草素具有提高人大肠癌HT29细胞奥沙利铂化疗敏感性的作用,机制可能与紫草素阻滞细胞周期进程、调节凋亡相关蛋白表达而促进HT29细胞凋亡有关。     

腹腔镜辅助经肛全直肠系膜切除术后患者排便及排尿功能的影响因素分析

目的:分析低位直肠癌患者腹腔镜辅助经肛全直肠系膜切除术(TaTME)后排便及排尿功能的影响因素。方法:回顾分析2016年10月至2017年10月为85例低位直肠癌患者行腹腔镜TaTME的临床资料。患者35~80岁,平均(60.3±11.4)岁;男43例,女42例,观察患者手术及术后情况、随访结果,术后1年采用低位前切除综合征评分量表对患者排便功能进行评估,采用Saito等制作的分级方法对患者排尿功能进行评估,采用单因素方差分析及多因素Logistic回归模型分析腹腔镜TaTME术后排便及排尿功能的相关因素。结果:85例低位直肠癌患者均成功完成腹腔镜TaTME,无中转开腹。随访12~24个月,平均(20.4±3.8)个月;术中出血量平均(69.4±27.1)mL,术后吻合口距肛缘距离平均(2.5±0.5)cm,肿瘤直径平均(3.9±1.6)cm。术后1年时低位前切除综合征发生率为43.53%(37/85),轻度低位前切除综合征发生率为22.35%(19/85),重度低位前切除综合征发生率为21.18%(18/85)。无低位前切除综合征组(对照组)低位前切除综合征量表评分平均(12.3±3.5)分,轻度低位前切除综合征组(轻度组)平均(24.6±4.8)分,重度低位前切除综合征组(重度组)平均(38.3±6.2)分;排尿功能障碍发生率为18.82%(16/85)。单因素分析结果显示,术后吻合口距肛缘距离、肿瘤直径及同步放化疗是影响患者术后排便功能的相关因素(P<0.05);体质量指数、同步放化疗及术中出血量是排尿功能障碍发生的相关因素(P<0.05)。多因素分析结果显示,术后吻合口距肛缘距离<2 cm、同步放化疗是患者术后排便功能的独立危险因素(P<0.05);体质量指数≥24 kg/m 2及同步放化疗是患者术后排尿功能障碍的独立危险因素(P<0.05)。结论:TaTME术后部分患者可出现低位前切除综合征及排尿功能障碍,应结合危险因素有针对性地处理。