小鼠DUSP1 3’-UTR双荧光素酶报告基因表达系统的建立及功能鉴定

目的 建立小鼠双特异性磷酸酶1(DUSPl)3’端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因表达系统,并对其进行功能鉴定.方法 提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA,以其为模板通过PCR扩增获得小鼠DUSP1 3'-UTR全长序列,酶切后克隆至pGL3-control载体荧光素酶编码基因的下游,获得重组载体LuDP,经PCR、限制性内切酶酶切、DNA序列分析鉴定正确后与内参照质粒pRL-TK共转染NIH3T3细胞,48h后检测双荧光素酶报告基因的表达.将含有小鼠DUSP1 3’-UTR的荧光素酶表达模块与来源于pRL-TK质粒的RL表达模块克隆至pLenti6-TR质粒中,获得双荧光素酶报告基因表达载体LuDP/RL,将其与RNA结合蛋白HuR表达载体(pcDNA3.1-HuR-FLAG)、mmu-miR-101a分别共t转染NIH3T3细胞,检测双荧光素酶的活性,分析HuR、mmu-miR-101对荧光素酶基因表达活性的影响.结果 成功构建了双荧光素酶报告基因表达载体.小鼠DUSP1 mRNA 3'-UTR可显著下调与其相连的荧光素酶的表达活性(0.14±0.01倍,P＜0.01);共转染HuR可上调荧光素酶的表达活性(1.40±0.20倍,P＜0.05),共转染mmu-miR-101a则可下调荧光素酶表达活性(0.57±0.18倍,P＜0.05).结论 成功构建了DUSP1 3’-UTR双荧光素酶报告基因表达系统,该系统可用于转录后调控元件对小鼠DUSP1基因表达的调控机制研究.     

RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α转录后调控机制的初步研究

 目的：探讨RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α（IκB-α）转录后调控机制。方法：构建IκB-α mRNA 3UTR报告基因真核表达质粒,并转染3T3细胞;体外生物素标记IκB-α mRNA 3UTR并进行RNA pull-down;过表达及干扰HuR后,qPCR检测其对IκB-α mRNA稳定性的影响,Western bltting检测其对IκB-α 蛋白表达的影响。结果：(1) IκB-α mRNA 3UTR报告基因真核表达质粒构建成功;(2) 报告基因检测：共转染pcDNA3-HA-HuR质粒及IκB-α mRNA 3UTR报告基因质粒后与对照组相比其数值明显增高;(3) 用生物素标记的IκB-α mRNA 3UTR探针进行RNA pull-down,可以检测到特异性结合的HuR蛋白;(4) 过表达HuR,IκB-α mRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显上调;干扰HuR 表达后,IκB-α mRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显下调。结论：(1) HuR可以与IκB-α mRNA 3UTR特异性结合并参与调节IκB-α mRNA 3UTR的功能;(2) HuR对IκB-α mRNA稳定性无明显影响,其主要调控IκB-α 蛋白表达,使其表达上调。     

应用VRML建设虚拟医学教学环境的构想

为了提高教学质量,改变传统医学教学模式,可以在校园网平台下建设虚拟医学教学环境。文章着重介绍了用虚拟现实建模语言VRML建设虚拟医学教学环境的方法和步骤,以及虚拟医学教学环境的工作模式等问题。     

医学院校网络题库的建设

在校园网的网络环境下建立网络题库,首先要选择合适的程序语言,定义好题库的结构;然后采用开放式的题库管理,并提供手工和自动两种组卷方式.本文结合实践就此问题进行了介绍.     

自主呼吸停止13个月的一例高位颈髓损伤病人的护理体会

目的总结一例自主呼吸停止13个月的高位颈髓损伤病人的护理体会。方法对1例自主呼吸停止13个月的高位颈髓损伤病人的进行护理，护理措施包括病房管理、严密观察病情变化、呼吸道的管理、预防并发症、心理护理等。结果通过13个月的护理，病人病情稳定，护理人员对高位颈髓损伤致自主呼吸停止的病人积累了宝贵的经验。结论良好的护理是延长病人生命的重要保证。     

pEGFP-HuR真核表达载体的构建及热休克刺激后细胞内定位的改变

目的构建人抗原R(HuR)的绿色荧光真核表达载体,初步探讨其生物学功能。方法克隆构建pEGFP-HuR(绿色荧光蛋白HuR)真核表达载体,并使用脂质体转染的方法将pEGFP-HuR转染入NIH 3T3细胞,Western blotting(WB)检测其表达,并给予热休克处理,利用荧光显微镜观察其在细胞内定位及与应激小体的共定位情况。结果 pEGFP-HuR真核表达载体构建成功,转染入细胞后,利用WB技术及荧光显微镜技术均能观察到其在细胞内高表达,并主要定位于细胞核内,给予热休克处理后,HuR向胞外移出并形成颗粒状小体,与应激小体的主要成分G3BP1蛋白存在共定位。结论 HuR主要定位于细胞核内,给予热休克处理后,HuR向胞外移动并与应激小体形成共定位,提示HuR定位的改变可能在应激时具有重要意义。     

一例自主呼吸停止9个月的高位颈髓损伤患者的护理体会

我科收治外伤性高位颈髓损伤致高位截瘫、无自主呼吸、神志清醒患者一例,持续机械性通气治疗长达9个月,现将护理体会报告如下.     

TRPM2蛋白在大肠杆菌的表达纯化和多克隆抗体制备

目的 获得人瞬时受体电位M2(TRPM2)离子通道蛋白N末端的原核表达融合蛋白,制备兔抗人TRPM2多克隆抗体.方法 采用PCR扩增编码人TRPM2蛋白N末端l～334位氨基酸残基(在人与小鼠中高度保守)的cDNA序列,将其克隆至谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-3上.将原核表达重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导GST-TRPM2N融合蛋白的表达,并纯化获得相对分子质量(Mr)约70 000的GST-TRPM2融合蛋白.将此融合蛋白与弗氏完全佐剂混合后采用经典的4次免疫法免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,用Western blot法对该抗体进行鉴定.结果 通过PCR扩增获得编码TRPM2蛋白N末端的cDNA片段并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T3中,采用IPTG诱导、蛋白质的变性与复性纯化获得融合蛋白GST-TRPM2N,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备获得特异性抗TRPM2蛋白的多克隆抗体.结论 成功制备了特异性抗人TRPM2蛋白的多克隆抗体.     

医学院校积件系统的建设构想

通过积件思想与课件思想的比较,论述了计算机辅助教学从课件走向积件的必然性,同时介绍了积件系统的结构,并提出了数字化积件库建设的重要性.     

改革医学院校计算机基础课考试方式

为了开发一个基于Web技术的网上考试系统,首先比较了C/S(Client/Server)结构和B/S(Browse/Server)结构在网络应用中的优缺点,然后介绍了本网上考试系统的设计方案,所采用的主要技术,以及所能实现的功能.