NADPH氧化酶亚单位nox-1在心肌细胞急性缺氧复氧损伤时的变化及心肌营养素-1的作用

目的： 探讨心肌细胞急性缺氧复氧损伤时NADPH氧化酶亚单位nox-1的变化及心肌营养素-1的作用。方法: 用改良的方法培养出生1-３ d的乳鼠心肌细胞,分为6组：(1)对照组;(2)缺氧复氧组;(3)缺氧复氧+CT-1组;(4)缺氧复氧+CT-1+LY294002组 (PIK3/Akt 阻断剂);（5）缺氧复氧+CT-1+PD98059组（ERK 阻断剂）;（6）缺氧复氧+CT-1+助溶剂DMSO组。 CT-1 的浓度为10 μg/L。MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物（JC1）检测心肌细胞线粒体膜电位(Δψm),二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-CA）检测细胞活性氧（ROS）,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。Nox-1蛋白采用Western blotting检测。结果: 缺氧复氧培养后心肌细胞凋亡率及细胞内ROS较对照组明显增加,分别是(19.7%±1.4% vs 2.1%±0.5%, 14.07%±1.25% vs 3.54%±0.86%, P<0.05),而心肌细胞存活率显著降低,线粒体膜电位（Δψm）下降;nox-1表达明显升高。CT-1处理的心肌细胞,较缺氧复氧组心肌细胞存活率明显上升 (87.0%±7.3%),而心肌细胞凋亡率及细胞内ROS 显著减少,Δψm水平增加,nox-1蛋白表达下调。而CT-1的这些作用能被PIK3/Akt和ERK阻断剂抑制。结论: 心肌细胞急性缺氧复氧损伤时NADPH氧化酶亚单位nox-1表达上调,而心肌营养素-1能通过下调nox-1表达,发挥对心肌细胞保护作用。     

ERK1/2信号通路介导心肌营养素1对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的探讨心肌营养素1对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及其信号通路。方法用改良的方法培养出生1～3天的乳鼠心肌细胞,分为五组:对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧+心肌营养素1组、缺氧复氧+心肌营养素1+PD98059(ERK阻断剂)组及缺氧复氧+心肌营养素1+DMSO组。缺氧3 h,复氧3 h。MTS法测定心肌细胞存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位,二氯荧光磺双乙酸盐(DCFH-CA)检测细胞活性氧水平,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,RT-PCR检测心肌细胞促凋亡基因Bad mRNA表达,Western blot检测ERK1/2蛋白水平。结果缺氧复氧后心肌细胞凋亡率及细胞内活性氧水平较对照组明显增加,分别是19.4%±2.3%比2.2%±0.2%及14.28±1.42比3.54±0.46(P<0.05),而心肌细胞存活率显著降低,心肌细胞线粒体膜电位下降。而心肌营养素1处理后,心肌细胞存活率明显高于缺氧复氧组,心肌细胞凋亡率及细胞内活性氧水平显著减少,心肌细胞线粒体膜电位更高,ERK1/2磷酸化蛋白水平增加,Bad mRNA表达明显下调。心肌营养素1的这种作用能被ERK阻断剂PD9...     

剪切修复基因XPD抑制Ox-LDL诱导人脐动脉平滑肌细胞的增殖

目的:探讨剪切修复基因——着色性干皮病D组基因(XPD)在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)促血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制。方法:将重组质粒pEGFP-N2/XPD利用脂质体转染人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs),实验分为空白对照组、空载质粒pEGFP-N2组、重组质粒pEGFP-N2/XPD组、Ox-LDL组、Ox-LDL+pEGFP-N2组和Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组。用MTT法和Ed U法测定各组细胞的增殖率;流式细胞术检测各组细胞周期分布;利用Western blot法检测XPD、caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:Western blot实验结果发现,与空白对照组相比,pEGFP-N2/XPD组的XPD表达增加(P0.05),表明转染成功;MTT和Ed U检测结果显示,pEGFP-N2/XPD组的细胞增殖率较空白对照组降低(P0.05);与Ox-LDL组比较,Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组细胞增殖明显被抑制(P0.05)。流式细胞术的检测结果显示,与空白对照组比较,pEGFP-N2/XPD组的S期细胞比例明显减少(P0.05),G0/G1期细胞比例明显增多(P0.05);与Ox-LDL组比较,Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组的S期细胞比例减少(P0.05),G0/G1期细胞比例明显增多(P0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,pEGFP-N2/XPD组的cleaved caspase-3和Bax蛋白水平增加(P0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P0.05);与Ox-LDL组比较,Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组的cleaved caspase-3和Bax蛋白水平增加(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.05)。结论:XPD能抑制HUASMCs的增殖并促其凋亡,还能抑制Ox-LDL的促HUASMCs增殖作用,有可能成为抗动脉粥样硬化治疗的靶点。     

生脉注射液对美托洛尔治疗扩张性心肌病慢性充血性心力衰竭疗效的影响

目的评价生脉注射液对扩张性心肌病慢性中重度充血性心力衰竭患者使用美托洛尔的影响。方法选择扩张性心肌病慢性充血性心力衰竭（心功能NYHAⅢ～Ⅳ级）临床症状稳定患者89例,随机分成两组．对照组在原抗心衰治疗基础上使用美托洛尔．治疗组在原抗心衰治疗基础上使用美托洛尔同时加用生脉注射液．观察两组使用美托洛尔能够达到的最大耐受剂量及其所需用的时间和整个过程的安全情况。结果治疗组与对照组对美托洛尔的平均最大耐受剂量分别为（82．01±15．56mg／d和81．35±15．26mg／d）．两组之间无显著性差异;达到最大耐受剂量所需的平均时间分别为4．98±0．86周和6．82±0．83周,两组之间有显著性差异;治疗过程中出现的不良反应,治疗组少于对照组。结论在中重度慢性充血性心力衰竭患者使用美托洛尔治疗过程中加用生脉注射液治疗可缩短美托洛尔达到最大剂量所需的时间．并可提高治疗过程中的安全性。     

L型结核菌致耳后淋巴结结核16例误诊报告

对 1990～ 1995年经病理诊断为非特异性淋巴结炎的 16例患者淋巴结重新切片复查 ,用经典抗酸染色法 ( Ziehl- Neelsen ZN)、改良抗酸染色法 ( Intensifed kinyoun IK)和免疫组化染色法进行。结果发现 11例牛型结核卡介菌 ( BCG)抗体免疫组化染色阳性 ,13例抗酸染色 L型阳性。对16例患者耳后淋巴结抗酸菌 L型感染的病变特征及误诊的可能原因进行初步探讨     

RNAi对细胞因子信号转导抑制因子1在内皮细胞中表达的沉默作用

背景：利用RNAi技术引发细胞因子信号转导抑制因子1沉默可促进神经内分泌肿瘤细胞的凋亡,然而对于内皮细胞是否有类似的作用,目前尚不清楚。 目的：实验拟验证内皮细胞中是否有细胞因子信号转导抑制因子1表达,并在所设计的siRNA中,筛选出1对对细胞因子信号转导抑制因子1沉默效率最高的siRNA。 设计、时间及地点：随机对照,体外细胞学实验,于2007-12/2008-06在南昌大学医学院第二附属医院所属的江西省分子医学重点实验室完成。 材料：人脐静脉内皮细胞由南京凯基生物公司提供。 方法：设计并化学合成4对靶向细胞因子信号转导抑制因子1的siRNA：siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4。培养人脐静脉内皮细胞,利用RT-PCR检测人脐静脉内皮细胞是否有细胞信号转导抑制因子1表达。将带有荧光标记的阴性对照siRNA配制成25,50,75,100 nmol/L的4组,利用脂质体转染细胞,并在荧光倒置显微镜下观察转染效率,对比得出有最佳转染效率的浓度。然后,实验根据不同的处理因素分成8组：siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4和阳性对照组、阴性对照组、转染试剂组、空白对照组4个对照组。将均为有最佳转染效率浓度的各组siRNA转染细胞,48 h后提取RNA。 主要观察指标：利用RT-PCR测定细胞因子信号转导抑制因子1 mRNA的相对表达水平。 结果：人脐静脉内皮细胞高表达细胞因子信号转导抑制因子1。siRNA在50 nmol/L时有较高的转染效率。4对siRNA干扰后,细胞因子信号转导抑制因子1 mRNA的表达水平与阴性对照、转染试剂组和空白对照组相比明显下调(P < 0.05),与阳性对照组相比显著下调(P < 0.01),其中siRNA-3的沉默效率最高(P < 0.05),阴性对照、转染试剂组和空白对照组与阳性对照组相比明显下调(P < 0.05),阴性对照、转染试剂组和空白对照组之间差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：内皮细胞中存在细胞因子信号转导抑制因子1表达。RNAi抑制细胞因子信号转导抑制因子1在内皮细胞中的表达,实验筛选出1对沉默效率最高的siRNA。     

Id3基因在心肌营养素1促心肌成纤维细胞增殖中的作用

目的 探讨在高静水压条件下分化抑制因子3(inhibitory of differentiation 3,Id3 )基因在心肌营养素-1 (cardiotrophin-1,CT-1 ) 促心肌成纤维细胞增殖中的作用.方法 3～4代心肌成纤维细胞用于实验,分为对照组( C 组)、CT-1反义寡核苷酸组 (ASODN组) 、正义寡核苷酸组 ( SODN组)、高静水压组( P 组).利用自制压力培养装置,将各组细胞置于160 mmHg压力下培养8 h.CT-1活性通过 Western印迹法分析测定,Id3基因表达通过RT-PCR方法测定,MTT测定心肌成纤维细胞增殖 .结果 高静水压明显促进心肌成纤维细胞增殖 ,CT-1表达上调,Id3 mRNA表达增加;CT-1 ASODN干预后能抑制高静水压所致的细胞增殖,CT-1表达下调,Id3 mRNA表达减少.结论 Id3 mRNA在心肌成纤维细胞中有明显表达,且与CT-1促心肌成纤维细胞增殖密切相关.     

心肌营养素1对心肌细胞缺氧复氧损伤的作用及信号机制的研究

目的探讨心肌营养素1(CT-1)对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及信号通路所起的作用。方法用改良的方法培养出生1～3天的SD乳鼠心肌细胞,分为对照组、缺氧复氧组、阻断剂组、营养素组和助溶剂组。后4组进行缺氧3 h,加不同药物处理后,复氧3 h,MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物检测心肌细胞线粒体膜电位,二氯荧光黄双乙酸盐检测细胞内活性氧(ROS),用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。采用RT-PCR法检测心肌细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达,Western blot检测磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)蛋白水平。结果与对照组比较,缺氧复氧组心肌细胞凋亡率及ROS明显增加,而心肌细胞存活率明显降低,线粒体膜电位下降,eNOS mRNA表达明显下调(P0.05);与缺氧复氧组比较,营养素组心肌细胞存活率明显升高,心肌细胞凋亡率及细胞内ROS明显减少,线粒体膜电位水平更高,磷酸化PI3K蛋白水平增加,eNOS mRNA表达上调。与营养素组比较,阻断剂组抑制上述指标表达。结论 CT-1能减轻缺氧复氧引起的心肌细胞损伤,其作用部分依赖PI3K/蛋白激酶B/eNOS信号通路的激活。     

通心络胶囊对大鼠急性缺血再灌注损伤心肌的保护作用及信号转导

目的:探讨通心络胶囊是否对缺血再灌注损伤的大鼠心肌有保护作用,以及保护的信号机制。方法:大鼠随机分为6组(n=6)(1)对照组;(2)缺血-再灌注组(IR组);(3)通心络组1(小剂量通心络,0.1 g/(kg.d));(4))通心络组2(大剂量通心络,0.5 g/(kg.d));(5)大剂量通心络+LY294002组;(6)大剂量通心络+PD98059组。LY294002,PD98059分别是PI3K/Akt、ERK1/2信号通路阻断剂,摘取大鼠心脏后进行离体Langendorff灌流,多导生理记录仪分别记录心率、心律、左室收缩末压(LVSP)和左室内压力的变化速率(+dp/dtmax);灌流液检测LDH、CPK、MDA水平及SOD活力。氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液染色法测定心肌梗死范围,心室肌检测iNOSmRNA和eNOSmRNA表达。结果:IR组心律失常较对照组增多,LVSP和+dp/dtmax明显下降,心肌酶升高,心肌iNOSmRNA和MDA增加,而心肌eNOSmRNA和SOD减少;通心络能使IR大鼠心功能明显改善,心梗范围缩小,心肌eNOSmRNA和SOD增加,而两信号通路阻断剂均能阻断通心络的部分作用。结论:通心络对缺血再灌注损伤心肌有保护作用;可能与激活PI3K/Akt、ERK1/2信号通路有关。     

心肌营养素-1与心肌梗死的研究进展

心肌成纤维细胞和肌纤维母细胞增生直接促进心脏的重塑及机能改变,最终导致收缩性和/或舒张性的心力衰竭。心肌营养素-1属IL-6超家族；是迄今发现的IL-6家族中最强的体外诱导心肌细胞肥大因子。近来发现其与心肌梗死后心肌的成肌纤维细胞增殖、成纤维细胞增生和胶原分泌有关。心肌营养素-1可能在心肌梗死后心室重塑起着重要作用。