犬脂肪干细胞膜片的构建及其复合富血小板纤维蛋白后的成骨能力

目的 初步研究犬脂肪干细胞(adipose-derived stem cell,ADSCs)膜片的构建及其生物学特性对膜片复合富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)后成骨能力的影响.方法 取犬腹股沟处的脂肪进行消化,分离培养成脂肪干细胞进行相关检测.将P3代细胞加入含抗坏血酸的成膜培养液培养2周以上,构建脂肪干细胞膜片,采用HE染色及扫描电镜对膜片进行形态学检测.提取静脉血PRF,分为细胞膜片复合PRF的实验组和膜片对照组,2组分别成骨诱导后进行ALP染色和茜素红染色,并于诱导后第3、5天,采用RT-PCR检测成骨相关基因ALP、Runx2的表达.结果 体外分离培养脂肪干细胞,成功构建干细胞膜片.光镜下可见细胞极性排列紧密,细胞外基质分泌.扫描电镜可见膜片表面光滑,细胞紧密排列.HE染色可见蓝染细胞紧密相连,细胞外大量基质.成骨诱导后,ADSCs膜片复合PRF的实验组ALP表达及茜素红染色钙结节形成量明显优于ADSCs膜片对照组,实验组ALP、Runx2基因mRNA表达高于对照组.结论 成功构建犬脂肪干细胞膜片,膜片复合PRF后具有更强的成骨能力.     

自体浓缩生长因子对比格犬脂肪干细胞体外增殖及成骨向分化的影响

目的：分析自体浓缩生长因子(concentrated growth factor，CGF)对比格犬脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)体外增殖及成骨向分化的影响。方法：取健康比格犬脂肪组织进行分离、培养ADSCs并鉴定其多向分 化潜能，细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8，CCK-8)检测细胞增殖。将ADSCs分为CGF组及对照组，对两组细胞进 行成骨诱导后分别检测其碱性磷酸酶(ALP)活性，RT-PCR法检测I型胶原(Col-I)，Runx2等成骨相关基因表达。结果： CGF组细胞增殖能力明显高于对照组(P<0.05)；经成骨诱导的ADSCs在CGF作用下ALP活性明显增强(P<0.05)，Col-I， Runx2等成骨相关基因的表达亦明显高于对照组(P<0.05)。 结论：CGF能够促进ADSCs体外增殖和成骨向分化。