MicroRNA-141靶向Keap1调控Nrf2/ARE信号通路对乳腺癌T47D细胞活力的影响

目的:探讨微小RNA-141(miRNA-141)靶向Keap1调控Nrf2/ARE信号通路对乳腺癌T47D细胞活力的影响。方法:乳腺癌T47D细胞分别转染miRNA-141模拟物(mimic)和阴性对照序列(NC),作为miRNA-141组和NC组,并设立未转染空白对照组,采用real-time PCR法检测细胞中miRNA-141的含量;MTT法与荧光探针2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法分别检测细胞活力和活性氧簇(ROS)水平;Western blot法检测胞质接头蛋白Keap1、核因子E2相关因子2(Nrf2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽过氧化酶1(GPx1)的表达;双萤光素酶实验检测miRNA-141与Keap1的关系。结果:转染miRNA-141 mimic后,miRNA-141组的miRNA-141表达量明显增高,细胞活力、ROS水平和Keap1蛋白表达均下降,而细胞核Nrf2蛋白SOD2和GPx1表达升高(P0.05);双萤光素酶实验结果显示Keap1为miRNA-141的靶基因。结论:miRNA-141可能通过靶向负调控Keap1激活Nrf2/ARE信号通路,诱导抗氧化酶的表达,以降低细胞氧化应激水平,从而抑制乳腺癌细胞的活力。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤与红花黄素的保护作用

目的：观察大鼠心肌缺血再灌注损伤模型心肌组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、诱导型一氧化氮合酶、总一氧化氮合酶活性及一氧化氮，丙二醛含量的变化，探讨红花黄素对离体大鼠缺血再灌注心肌的保护作用。 方法：①实验于2004—06／2005—02在南阳医学高等专科学校药理学教研室完成。选用健康Wistar大鼠32只，随机分为4组，每组8只：正常对照组、模型组、红花黄素组、地奥心血康组。②采用Langendofff创建的离体心脏灌流法建立离体大鼠心肌缺血缺氧再灌注损伤模型。以持续平衡的充有体积分数0．95O2＋0．05CO2混合气体的KH液进行非循环逆行灌流。灌注数秒后心脏恢复跳动。稳定15min后停灌30min，再灌40min，给药组在停灌前10min以红花黄素（0．33g生药／mL）或地奥心血康灌注，直至再灌后40min。正常对照组离体心脏持续灌注K—H液90min。模型组离体心脏灌注．K—H液35min，全心缺血25min，再灌注30min。③心肌中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、一氧化氮合酶活性变化、一氧化氮、丙二醛含量测定按南京建成生物工程研究所提供的相应试剂盒说明完成。④分别进行成组t检验和配对t检验。 结果：进入结果分析大鼠32只。①超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力：模型组明显低于其他3组（P〈0．05～0.01）；丙二醛含量：模型组明显高于其他3组（P〈0．05～0．01）。②一氧化氮含量：模型组明显低于其他3组（P〈0．05～0．01）。③诱导型一氧化氮合酶活力：地奥心血康组明显高于模型组（P〈0．01）；总一氧化氮合酶活力：模型组明显高于对照组和红花黄素组（P〈0．01），明显低于地奥心血康组（P〈0．05）。 结论：红花黄素对离体大鼠缺血再灌损伤的心肌具有保护作用，此作用可能与抑制心肌脂质过氧化、增强抗氧化能力有关。     

前列腺癌特异突变DNA聚合酶β真核表达载体构建及鉴定

目的 构建前列腺癌(PCa)特异突变DNA聚合酶β(polβ)真核表达载体.方法 提取有特异DNA polβ突变的PCa组织的总RNA,通用引物逆转录成cDNA;用设计带有接头的DNA polβ全基因引物,PCR扩增PCa组织中呈现的突变型DNA polβ全基因;构建T-A克隆并进行重组体的筛选鉴定;亚克隆入表达载体pcDNA3.1并进行重组体的筛选和鉴定.结果 PCa特异突变DNA polβ基因扩增选择出P4(MI-polβ)和P5(M2-polβ)两个标本,构建重组有特定突变位点的polβ目的 基因的pcDNA3.1真核表达载体,经PCR扩增获得2个阳性集落.结论 经鉴定成功构建2例PCa特异突变DNA polβ真核表达载体(pcDNA3.1-M1 and peDNA3.1-M2).     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑病的保护作用

目的探讨神经生长因子(NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑病(H IE)的保护作用。方法建立H IE新生大鼠模型,给予腹腔注射NGF后,通过组织学观察、分光光度法及原位末端标记法对比观察NGF对H IE模型鼠脑组织结构、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的含量和凋亡细胞数的影响。结果NGF组MDA、NO含量及凋亡细胞数明显低于模型组的测定值;SOD活性显著高于模型组的测定值。结论NGF能提高抗氧化酶活性,抑制氧自由基生成,阻断NO的异常代谢,降低细胞凋亡数,对H IE具有保护作用。     

绞股蓝对衰老大鼠的抗氧化作用

目的：观察绞股蓝总苷对老龄大鼠的抗氧化作用，探讨其延缓衰老的作用机制。 方法：实验于2004-03／2005-02在郑州大学医学院完成。选用健康老龄(18个月)SD雄性大鼠50只，随机分为5组，每组10只。空白对照组给予蒸馏水灌胃，1次／d；人参皂甙组给于人参皂甙20mg／kg灌胃，1次／d；绞股蓝总苷40，20及10mg／kg组，分别给于相应剂量绞股蓝总苷灌胃，1次／d。灌胃30d，取大鼠血清和脑组织，用硫代巴比妥酸法测定脂质过氧化物含量；用羟胺法检测超氧化物歧化酶活性及免疫器官指数。 结果：50只大鼠均进入结果分析。①绞股蓝对衰老大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响：绞股蓝40mg／kg组和20mg／kg组胸腺指数和脾脏指数明显高于空白对照组[绞股蓝40mg／kg组(18．98±1．95)，(22．12+2．41)，20mg／kg组(17．98±1．64)，(22．89±1．98)，空白对照组(16．02+2．03)，(18．79±2．37)，P<0．05]。②绞股蓝对衰老大鼠血清及脑组织中超氧化 物歧化酶和丙二醛含量的影响：绞股蓝40mg／kg组和20mg／kg组血清超氧化物歧化酶活力显著提高；脑组织中超氧化物歧化酶活力亦显著高于空白对照组[(176．24±19．56)，(154．35±17．23)，(113．14±13．56)kNu／L，P<0．01]；绞股蓝40mg／kg组大鼠血清丙二醛含量显著降低；绞股蓝40mg／kg组和20mg／kg组脑组织中丙二醛含量显著低于空白对照组[(102．24±11．32)，(132．54±12．03)。(199．32±20．15)μmol／L，P<0．01)。 结论：绞股蓝总苷能增强老龄大鼠机体抗氧化能力，延缓机体衰老。     

DNA聚合酶β靶向siRNA对PC3细胞生物学行为的影响

目的:观察DNA聚合酶(pol)B靶向siRNA表达载体转染人前列腺癌PC3细胞对细胞生物学行为的影响.方法:采用已构建的DNA polβ靶向siRNA真核表达载体(pSUPERneoGFP-PS1、pSUPERneoGFP-PS2和pSU-PERneoGFP-CS),利用脂质体包裹转染PC3细胞,并设未转染组和转染空...     

Ames实验对叶黄素的致突变性与抗突变性研究

背景与目的研究不同剂量的叶黄素致突变性、抗突变性及抗突变机理的初步分析。材料与方法采用Ames试验常规方法进行检测。结果1335μg/皿、668μg/皿、334μg/皿和167μg/皿剂量的叶黄素对TA97、TA98、TA100和TA102菌株在加与不加S9条件下均无致突变性;对TA98和TA100菌株具有显著的抗突变作用。结论在本实验条件下,叶黄素对Ames试验无致突变性,且有显著的抗突变作用,抗突变的机理为叶黄素具有综合的抗突变作用。     

番茄红素对宫颈癌HeLa细胞bax、bcl-2基因表达的影响

目的 研究番茄红素对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。方法不同浓度番茄红素分别处理HeLa细胞24～72h后，MTT法检测细胞的生长活性，RT-PCR方法检测凋亡相关基因bax，bcl-2的表达。结果实验结果随着番茄红素浓度的增加，bax基因mRNA表达增加而bcl-2的mRNA表达减少。结论番茄红素对HeLa细胞的生长具有抑制作用，可促进宫颈癌HeLa细胞发生凋亡，bcl-2基因的减少与bax基因表达增加可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。     

小儿特发性血小板减少性紫癜的中西医治疗

特发性血小板减少性紫癜（ITP）是小儿最常见的出血性疾病，约占小儿出血性疾病总数的25．40％。1997年7月～2004年12月，我院儿科采用中西医结合方法治疗特发性血小板减少性紫癜63例。     

煤工尘肺患者血清CuZn-SOD和铜蓝蛋白活性研究

[目的]探讨煤工尘肺发生发展过程中血清含Cu抗氧化酶CuZn-SOD和铜蓝蛋白(CP)的活性及Cu含量的变化。[方法]分别采用亚硝酸盐形成法、对苯二胺盐酸盐法及原子吸收分光光度法,测定70例不同期别煤工尘肺患者(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期)及30例健康对照者的血清CuZn-SOD活性、铜蓝蛋白(CP)活性及Cu的含量。[结果]对照组、Ⅰ期尘肺组、Ⅱ期尘肺组及Ⅲ期尘肺组的血清CuZn-SOD活性分别为(15.96±2.26)、(17.24±2.28)、(19.81±3.01)、(21.63±3.52) NU/ml;血清CP活性分别为(2.26±0.52)、(2.68±0.67)、(2.97±0.79)、(3.36±0.88)U/ml;血清Cu含量分别为(12.68 ±3.87)、(14.96±4.42)、(17.84±5.12)、(19.38±5.89)μmol/L。与对照组相比,各期别尘肺患者血清与CuZn-SOD和CP 活性及其Cu的含量均显著升高。[结论]煤工尘肺的发生发展涉及含Cu抗氧化酶活性的上调,且其活性的改变与Cu含量变化有平行关系。