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| 转化生长因子-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA真核表达质粒的构建及鉴定 | |
| 引用本文： | 周昌宁,曹海宁,陈浩,张彩萍,吕会增,郑宗珩,陈图峰,王晖.转化生长因子-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA真核表达质粒的构建及鉴定[J].实用医学杂志,2008,24(11). |
| 作者姓名： | 周昌宁 曹海宁 陈浩 张彩萍 吕会增 郑宗珩 陈图峰 王晖 |
| 作者单位： | 1. 中南大学附属第三医院,长沙市,410013 2. 中南大学口腔医学院,长沙市,410008 3. 中山大学附属第三医院胃肠外科,广州市,510630 |
| 摘 要： | 目的：针对转化生长因子-β（TGF-β）Ⅱ型受体基因的不同部位，构建不同TG-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA（shRNA）表达质粒载体，在转录后水平抑制TGF-βⅡ型受体的表达，对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法：用DNA重组技术将针对人TGF-βⅡ型受体基因不同部位所设计的4对shRNA序列克隆到真核表达质粒pSilencer^TM 3．1-H1 neo vector中，构建TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencer^TM3．1-H1-TGF-β R ⅡshRNA1、2、3、4。脂质体介导转染成人原代成纤维细胞，经G418筛选抑制TGF-βⅡ型受体表达的稳定细胞克隆。结果：3个TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencer^TM3．1-H1-TGF-βRⅡ shRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westem blotting均证实3种shRNA重组质粒中pSilencer^TM3．1-H1—TGF-βRⅡshRNA2可明显降低细胞内TGF-βⅡ型受体mRNA峰度及TGF-βⅡ型受体蛋白表达。结论：成功构建了TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilenceir^M3.1—H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3，并筛选出特异而高效的阻断TGF-βⅡ型受体表达的克隆。此实验结果为进一步研究TGF-βⅡ型受体蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 瘢痕 shRNA TGF-βⅡ型受体 |
| 收稿时间： | 2008-3-20 |
Construction and identification of eukaryotic expressing plasmids of TGF-β type Ⅱ receptor shRNA |
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| ZHOU Chang-ning,CAO Hai-ning,CHEN Hao,ZHANG Cai-ping,LV Hui-zeng,ZHENG Zong-heng,CHEN Tu-feng,WANG Hui.Construction and identification of eukaryotic expressing plasmids of TGF-β type Ⅱ receptor shRNA[J].The Journal of Practical Medicine,2008,24(11). | |
| Authors: | ZHOU Chang-ning CAO Hai-ning CHEN Hao ZHANG Cai-ping LV Hui-zeng ZHENG Zong-heng CHEN Tu-feng WANG Hui |
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