巨头刺草皂甙D对人肝癌Hep3b细胞的抑制作用

目的 探讨巨头刺草皂甙D(GD)对人原发性肝癌Hep 3b细胞的抑制作用及其作用机制.方法 采用MTT法及细胞克隆法检测GD对肝癌细胞Hep 3b的抑制作用;运用光学显微镜和Hoechst荧光染色观察细胞形态的变化和凋亡现象;应用流式细胞术检测细胞周期的变化以及线粒体膜电位的变化;运用Western blotting检测细胞内Bcl-2、PARP蛋白及MAPK通路关键蛋白的变化.结果 GD具有较强的抗肝癌细胞Hep 3b作用,并且其抑制作用具有时间和剂量依赖性,在72 h处的半数抑制浓度IC50=16.08 μmol·L-1.细胞周期分析表明,随着GD浓度增加,Hep 3b细胞出现sub-G1凋亡峰,凋亡率从3.3％增加到33.6％.但细胞周期无明显改变.Hoechst荧光染色及流式细胞术分析发现GD作用Hep 3b细胞后,细胞核能发出明显的蓝色荧光点,并降低该细胞线粒体膜电位.通过Western Blotting发现,GD作用Hep 3b细胞后,Bcl-2蛋白表达减少,凋亡标志分子PARP活化.MAPK通路蛋白Erk磷酸化形式表达下降,p38和JNK磷酸化形式表达增加.结论 GD可通过诱导肝癌细胞凋亡发挥抗肝癌活性,该作用可能与MAPK通路有关.     

斑马鱼环状RNA研究进展

环状RNA(circRNA)是一类由前体线性RNA通过反向剪接方式形成的具有环状闭合结构的小分子RNA。其具有结构稳定、高度保守等生物学特征,在各种生物不同发育阶段的生理病理过程中均表现出重要的调控作用。模式动物斑马鱼具有可用于高通量药物筛选、成本低等特点,circRNA及与其相关的发育和炎症疾病可在斑马鱼体内展开更高效的研究。近年来,斑马鱼中的circRNA不断得到鉴定并表征。研究发现,circRNA在斑马鱼的发育进程及炎症反应中扮演着重要的角色。本文就circRNA的分类和特点、生物学功能以及斑马鱼circRNA的研究进展进行综述。     

基于斑马鱼炎症模型的凉膈散及其组分甘草不同极性部位的抗炎活性评价及作用机制

目的 采用脂多糖（LPS）诱导斑马鱼炎症模型,通过浸泡给药方式,评价凉膈散及其组分甘草不同极性部位的抗LPS活性。方法 利用相似相溶原理分离得到凉膈散及其组分甘草的不同极性部位,随机选择受精后3 d的斑马鱼,暴露于不同浓度的药物提取物中,进行为期24、48、72 h的毒性观察;斑马鱼卵黄囊显微注射0.5 g·L^-1 LPS造模,浸泡给予不同浓度的凉膈散及甘草提取物,统计72 h内斑马鱼的生存数目并在显微镜下观察12 h时斑马鱼卵黄囊中性粒细胞的聚集情况;苏木素-伊红（HE）染色对LPS显微注射斑马鱼卵黄囊进行组织病理学分析;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）进一步探讨凉膈散及甘草体内抗炎作用及其可能的机制。结果 凉膈散及甘草提取物毒性随着极性升高而降低,药物的毒性大小依次为石油醚部位>乙酸乙酯部位>正丁醇部位>水部位;与LPS模型组比较,各提取物均能提高LPS斑马鱼炎症模型的动物生存率,抑制斑马鱼卵黄囊中性粒细胞的聚集及炎症细胞浸润,其中凉膈散水部位与甘草乙酸乙酯部位的效果最为显著（P<0.01）;此外,与LPS模型组比较,凉膈散水部位与甘草乙酸乙酯部位降低了斑马鱼炎症模型中促炎细胞因子白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达,抑制了LPS诱导的Toll样受体4（TLR4）和核转录因子-κB（NF-κB）的上调（P<0.01）。结论 凉膈散及其组分甘草的不同提取部位对LPS炎症均有保护作用,其机制可能与抑制TLR4和NF-κB信号通路相关;在斑马鱼模型中,浸泡给药方式适用于中药的抗LPS活性筛选,可用于单味中药、复方及其不同提取部位的抗内毒素活性评价。     

外泌体对上皮-间质转化调控作用的研究进展

外泌体是一种具有生物活性的膜性囊泡,既可在细胞间传递活性物质,还可通过调控细胞间的信息传递参与细胞活动。 上皮-间质转化（EMT）是上皮细胞获得间充质细胞特性的过程,在众多疾病中发挥了重要作用。研究表明,外泌体在EMT的发 生发展过程中具有双向作用。一方面,外泌体可促进细胞发生EMT,赋予肿瘤细胞侵袭和转移能力,促进血管新生和加快肿瘤 生长;另一方面,外泌体亦可抑制EMT,发挥减弱肿瘤细胞侵袭能力,抑制心、肝、肾纤维化,改善心肌梗死等作用。外泌体可能 是通过携带EMT相关蛋白或miRNA,调控EMT相关信号通路发挥双向调节作用。