新生大鼠单眼摘除后双侧上丘浅灰层细胞色素氧化酶的组织化学研究

本实验用细胞色素氧化酶组织化学方法定量地研究了7只新生大鼠作单眼摘除对上丘浅灰层细胞色素氧化酶活性的影响,观察到与保留眼同侧的上丘浅灰层细胞色素氧化酶活性明显地低于对侧上丘浅灰层,说明保留眼发出的同侧视网膜顶盖投射纤维不足以维持同侧上丘浅灰层的正常氧化代谢机能     

维拉帕米对大鼠缺血—再灌流视网膜Glu—IR神经元的观察

探讨维拉帕米对大鼠缺血-再灌流视网膜Glu-IR神经元的作用。方法结扎双侧颈总动脉,3h后松结复流,分别于缺血前15min和再灌流前1min腹腔注射维拉帕米(5mg/kg/次),对照组腹腔注射等量生理盐水。动物存活3d,4%多聚甲醛经心灌注,视网膜切片Glu免疫组织化学反应。结果正常大鼠视网膜内核层中有大量Glu-IR神经元,外核层、节细胞层部分细胞呈Glu-IR。缺血-再灌流损伤后,视网膜内核层中Glu-IR神经元较正常时显著减少,染色变淡,外核层、节细胞层未见Glu-IR(P＜0.05)。在缺血-再灌流期应用维拉帕米,视网膜中Glu-IR神经元明显增多,染色变深(P＜0.05)。结论视网膜Glu-IR神经元对缺血-再灌流损伤敏感,维拉帕米有助于视网膜Glu-IR神经元的存活及免疫活性的恢复。     

大鼠高眼压后视网膜内三种钙结合蛋白免疫活性的改变

目的：通过高眼压诱导的视网膜缺血模型和免疫组化方法，探讨parvalbumin(PV)，calbindin(CB)和calretinin(CR)三种钙结合蛋白在缺血后视网膜中的表达。方法：24只大鼠(分4组，每组6只)的右眼眼内压升高至14．6kPa(110mmHg)，维持90min；左眼作对照。分别存活0，2，7，14d后处死。其视网膜冷冻切片后，分别作CB、PV和CR的免疫组化反应；邻片用焦油紫染色。结果：在正常视网膜，PV和CB主要表达于内核层；CR表达于内核层、节细胞层和内网层。缺血0d组中，PV在内核层的表达剧减，而CB和CR仅轻微减少。2d后，CB和CR明显减少；而PV的表达开始逐渐恢复。至第14天，尽管内核层神经元已减少了1／2，但PV的表达已恢复至正常水平，其阳性神经元与尼氏染色神经元数之比是正常的2倍。同样，相对第7天而言，CB和CR的表达也有一定程度的恢复。结论：PV，CB和CR的阳性神经元对缺血敏感程度不同，且在一定的实验条件下其表达是可逆的。     

大鼠视网膜节细胞细胞色素氧化酶与逆行示踪辣根过氧化物酶联合反应

大鼠经双上丘辣根过氧化物酶埋藏后,用氯化钴细胞色素氧化酶反应法处理视网膜,观察到节细胞分别呈高细胞色素氧化酶活性反应、辣根过氧化物酶标记和细胞色素氧化酶/辣根过氧化物酶联合反应,说明此法可作联合反应法使用。本实验中辣根过氧化物酶标记是在不使用过氧化氢的条件下作出的。     

BDNF对小鼠周围神经损伤后髓化与再生作用的实验研究

目的：建立小鼠坐骨神经压榨损伤模型，研究内源性的脑源性神经营养因子(BDNF)对周围神经损伤后髓化与再生的作用。方法：将动物分为三组，腹腔分别注射抗BDNF血清、羊血清和生理盐水。采用电子显微镜观察周围神经损伤后髓化与再生的变化，用体视学方法计数单位面积髓化纤维的数密度。结果：抗BDNF血清组动物，髓鞘松散、分离、变性，损伤远端髓化轴突的数密度比羊血清组和生理盐水组分别减少83％和78％。结论：周围神经损伤后神经纤维的髓化和再生可能与内源性BDNF的作用有关。     

辣根过氧化酶(Horaseradish Peroxidase)示踪法在神经解剖研究中的应用

辣根过氧化酶(HRP)示踪法是70年代初出现的一种新的神经解剖学研究方法,由于它具有许多前所未有的优点,在短短数年内便广为国外神经学者所采用,做了大量工作,把神经学研究工作大大向前推进一步。自60年代中期以来便有人报道:某些物质如氚组氨酸(~(-3)H-histidine)、某些氨基酸、钌红(Ruthenium Red)等外源性的大分子物质可以透过神经纤维进入轴索,并沿轴索传递至胞体。过氧化酶示踪法最早是被用来观察大白鼠及小白鼠     

应激对中枢神经系统即刻早期基因c-fos表达及HPA轴的调节作用研究

目的：研究应激对即刻早期基因ｃ－ｆｏｓ表达的调节作用及其与ＣＲＦｍＲＮＡ、ＨＰＡ通路和行为之间的关系。方法：制造社会应激动物模型,高架十字迷宫和空场实验评估大鼠应激行为,免疫组织化学技术检测ＦＯＳ蛋白表达,计算机图像分析系统定量,原位杂交检测ＣＲＦｍＲＮＡ表达,放射免疫分析方法和酶联免疫吸附方法（ＥＬＩＳＡ）检测血清ＡＣＴＨ和Ｃｏｒｔｉｓｏｌ。结果：提示室旁核（ＰＶＮ）部位所ｃ－ｆｏｓ,可能作为第     

急性高眼压致大鼠视网膜节细胞细胞色素氧化酶活性降低

为了探讨大鼠眼压与细胞代谢的关系，对一组大鼠分别以７５％、５０％及２５％平均动脉压作右眼前房内灌注。采用改良细胞负素氧化酶组织化学法作视网膜细胞色素氧化酶反应，观察其对网膜节细胞细胞色素氧化酶的作用。     

经上丘逆行标记法视网膜神经节细胞定量的实验研究

目的　建立一种视网膜神经节细胞 (RGCs)定性及定量的研究方法 ,并了解大鼠RGCs密度分布情况。方法　暴露大鼠双上丘后将饱含 3 0 %辣根过氧化物酶 (HRP)溶液的明胶海绵片贴附于双上丘表面 ,大鼠存活 2 4h后 ,取出视网膜行HRP组织化学反应 ,计算机图像分析系统对RGCs进行分类及计数。结果　左右眼RGCs密度分别为 14 66±3 76/mm2 及 14 5 7± 40 4/mm2 ,左眼鼻、颞侧RGCs密度分别为 14 90± 3 71/mm2 及 14 4 2± 3 82 /mm2 ,右眼鼻、颞侧RGCs密度分别为 14 67± 410 /mm2 及 14 4 6± 40 0 /mm2 。结论　成功地建立了直接上丘HRP逆行标记RGCs定量计数法 ,正常大鼠双眼RGCs密度基本相同 ,颞侧及鼻侧RGCs密度基本相同。     

维拉帕米对缺血后大鼠视网膜电生理功能和节细胞代谢的影响

本实验用闪光视网膜电图（ＦＥＲＧ）、细胞色素氧化酶（ＣＯ）组织化学研究维拉帕米对缺血后大鼠视网膜的影响。结扎双侧颈总动脉，３ｈ后松结复流。分别于缺血前１５ｍｉｎ和再灌流前１ｍｉｎ腹腔注射维拉帕米（５ｍｇ／ｋｇ，２５ｍｇ／ｍ１／次），对照组腹腔注射等量生理盐水。动物分别存活１、３、７ｄ，处死前复查ＦＥＲＧｂ波。视网膜铺片行ＣＯ组织化学反应，ＣＯ结果用计算机图像分析处理。结果显示：维拉帕米组与对照组缺血后第１ｄＦＥＲＧｂ波恢复程度差异无显著性（Ｐ＞００５），而第３、７ｄ，维拉帕米组ＦＥＲＧｂ波幅度恢复程度较对照组显著性增加（Ｐ＜００５），维拉帕米组高ＣＯ活性节细胞数密度大于对照组（Ｐ＜００５），高ＣＯ活性节细胞的灰度低于对照组（Ｐ＜００５）。说明维拉帕米对大鼠视网膜缺血后的节细胞具有保护作用，并促进视网膜功能的恢复。