siRNA抑制Ki-67表达对乳腺癌MCF-7／ADR细胞阿霉素耐药性的研究

目的采用Ki-67RNA表达载体干扰沉默Ki-67基因,检测其对乳腺癌MCF-7／ADR细胞株耐-67mRNA及蛋白表达的影响,观察沉默艇-67基因前后乳腺癌细胞株对阿霉素敏感性改变。方法体外合成靶向艇-67siRNA表达载体,应用脂质体法瞬时转染尉-67高表达的乳腺癌细胞株MCF-7／ADR,应用RT-PCR和Western印迹法检测转染后Ki-67mRNA及蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖活性及转染前后细胞对阿霉素敏感性的变化。结果Ki-67siRNA载体转染后24h可显著抑制乳腺癌MCF-7／ADR细胞株的Ki-67mRNA和蛋白表达及细胞的增殖活性。Ki-67siRNA组阿霉素IC50值为（6．3±0．9）μg/ml。结论si—Ki-67能够有效抑制Ki-67基因的表达,降低乳腺癌细胞的增殖能力,沉默Ki-67表达能部分逆转阿霉素耐药现象。     

闭合性桡骨远端骨折手法复位小夹板固定临床路径的病例对照研究

目的:探讨以手法复位小夹板固定治疗闭合性桡骨远端骨折在保证临床疗效的基础上,缩短治疗时间,减轻患者医疗费用,创建中医优势病种门诊诊疗的临床路径。方法:自2007年7月至2009年12月,共200例患者,年龄40～80岁,分为提前拆除小夹板组(CP治疗组)和常规治疗组,各100例。CP治疗组男21例,女79例;年龄(62.98±0.85)岁;常规治疗组男20例,女80例;年龄(63.19±0.88)岁。均采用手法复位小夹板固定后,常规治疗组30d拆除小夹板,CP治疗组在第25天拆除小夹板,两组定期摄X线片复查及内服中药(早期口服玄胡片、创伤宁片,中期口服归香正骨丸,后期口服双龙接骨丸)至骨折临床愈合,拆除夹板后指导功能锻炼。患者在治疗中评定复位情况,了解骨位,采用Gartland-Werley腕关节评分标准评估腕关节功能,进行疗效观察。结果:CP治疗组患者的实际治疗时间从原来的(30.08±3.06)d下降到(25.06±1.07)d,治疗费用由(2100.00±332.12)元下降到(1644.00±125.20)元。两组在复位、腕关节功能恢复方面比较差异无统计学意义,说明中医门诊治疗的疗效可以保证。结论:在中医骨科门诊实施临床路径后,促进了诊疗行为的规范化及治疗时间的缩短,为广大病患减轻了医疗经济负担,值得推广应用。     

有效的体适能干预增强网球运动爱好者弱链接能力的研究分析

目的通过发现网球运动爱好者在网球运动中不同动力链的弱链接,进行有效的体适能干预,不仅对其弱链接的能力有所提高,还提升了运动爱好者的整体运动能力,有效地防治运动损伤。方法收集我院运动促进中心网球运动爱好者52例,日常生活中均参与相同频率和强度的网球运动,常规组在1个月周期内完成正常的运动量,体适能干预对照组在1个月周期内除了完成正常的运动量,在运动促进中心给予弱链接的专项强化即体适能干预。在运动周期前中后测评机能情况,采用体适能测试单项评分标准及等速肌力测试仪评估肌肉能力、关节活动度,进行对比研究分析。结果有效体是能干预组网球爱好者弱链接环节的肋力、关节活动度均16常规组提高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论通过对网球运动爱好者实施有效的体适能干预,不仅强化了弱链接的能力,还提升了运动爱好者的整体运动能力,争取通过改善运动弱链接的能力为不同年龄阶段的各种项目运动爱好者制定体适能干预计划时提供一个参考,值得推广。     

乳腺导管原位癌患者生活质量调查及相关因素分析

ObjectiveTo study the quality of life (QOL) of patientswith ductal carcinoma in situ (DCIS) and to analyze the relevant factors affecting their QOL. MethodsA total of 84 patients with DCIS and 125 patients with invasive breast cancer were surveyed. Researchers used SF-36 to assess the QOL of participants at one year after operation. Some information of patients were analyzed the relationship to SF-36 score, such as age, the type of surgery, endocrine therapy, education, marital status, working status and health insurance. ResultsCompared to normal women, patients with DCIS had lower QOL in physical function (P=0.029), bodily pain (P=0.039), general health (P=0.033) and mental health (P=0.003). Patients with invasive breast cancer also had poorer QOL in physical function (P=0.002), bodily pain (P=0.002), vitality (P=0.002), general health (P=0.002) and mental health (P=0.001). QOL of DCIS patients were similar to that of invasive breast cancer patients, except that score of physical function (P=0.032) and vitality (P=0.040) were better in DCIS patients. Endocrine therapy significantly affected the score of QOL of DCIS patients. DCIS patients with endocrine therapy had poorer score in physical function (P=0.034), bodily pain (P=0.046), general health (P=0.031), vitality (P=0.042) and mental health (P=0.002). Conclusion Patients with DCIS have poor QOL at one year after operation. Endocrine therapy significantly reduces their QOL.     

类泛素化neddylation修饰调控乳腺癌中核纤层蛋白lamin B1的表达

背景与目的：类泛素化neddylation修饰在乳腺癌中的作用鲜有报道。该研究的前期研究发现,抑制neddylation修饰可诱导乳腺癌细胞发生衰老,但具体机制尚未完全阐明。研究报道核纤层蛋白lamin B1缺失可导致细胞衰老。本研究旨在探讨在乳腺癌中,neddylation修饰与lamin B1是否存在相关性及其可能的机制。方法：利用113例乳腺癌患者肿瘤组织制成的组织芯片对neddylation修饰过程中关键蛋白神经前体细胞表达发育下调蛋白8（neural precursor cell expressed developmentally downregulated protein 8,NEDD8）、NEDD8 活化酶E1（NEDD8-activating enzyme 1,NAE1）及核纤层蛋白lamin B1进行免疫组织化学染色。采用Spearman rank分析NEDD8和NAE1与laminB1表达的相关性。采用CRISPR/Cas9技术敲低NEDD8的表达以阻断neddylation修饰,采用蛋白质印迹法（Western blot）检测neddylation修饰对Lamin B1表达的调控作用及其机制。结果：Lamin B1表达与NEDD8（r=0.817,P<0.000 1）和NAE1（r=0.406,P<0.000 1）表达呈显著正相关。敲低NEDD8以阻断neddylation修饰可显著抑制Lamin B1的表达。沉默P53表达可部分逆转阻断neddylation修饰对lamin B1表达的抑制。结论：Neddylation修饰与lamin B1表达呈正相关,靶向neddylation修饰可能通过P53依赖的方式抑制lamin B1的表达。这为乳腺癌的治疗提供了新的靶点和方向。     

microRNA-206在乳腺癌转移中的研究进展

肿瘤是危害人类健康的重要疾病之一,目前乳腺癌在女性恶性肿瘤中占据第一的位置,发病率日益增高.大约75％的患者为激素受体ER-α阳性的乳腺癌,随着乳腺癌个体化治疗的提出和完善,针对激素受体阳性的患者来说,内分泌治疗必不可少,并且能有较好的预后[1].但是对于激素受体阴性的患者来说,并不能从内分泌治疗中获益,乳腺癌术后复发转移的风险相对提高.近年来,微小RNA（microRNA,rniRNA）在肿瘤中的研究越来越受关注,那么是否存在相应的miRNA调控激素受体的表达,从而影响乳腺癌的转移途径呢？     

上海妇女乳腺癌危险度评价模型的初步研究

目的:筛选上海妇女患乳腺癌的危险因素,初步建立符合上海乳腺癌危险度评价模型,探讨乳腺癌低、中、高危险人群区分的分界点;并用该模型评估上海女性具备特定危险因素下患乳腺癌的机率。方法:采用Logistic回归法筛选乳腺癌的危险因素,以此建立乳腺癌危险度评价模型。判别分析评价模型;计算ROC曲线下面积观察此效能,并利用ROC曲线寻找乳腺癌低、中、高危险性的合适分界点。结果:乳腺癌调查人群可能的主要危险因素有:文化程度、乳腺疾病、乳腺疾病手术史、粗粮、蔬菜食品、雌激素药品、缺乏锻炼及熬夜。危险度评价模型预测低、中、高危人群,以预测概率值P≤0.076判为低危险性人群,预测概率值P≥0.243判为高危险性人群,0.076<预测概率值P<0.243判为中危险性人群。结论:该模型可评估上海女性具备特定危险因子情况下患乳腺癌的机率,为建立筛查标准提供一定依据。     

siRNA沉默LKB1基因激活Hedgehog信号通路及对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长的实验研究

目的探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抑癌基因LKB1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Hedgehog信号通路相关因子的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法构建LKB1基因siRNA质粒LKB1-siRNA;建立LKB1表达抑制的MDA-MB-435细胞模型;裸鼠乳晕皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型;成瘤后,观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中LKB1和Hedgehog信号通路中信号肽Shh、Sufu、膜受体Ptch、Smo、转录因子Gli1、Hip蛋白表达的变化。结果 LKB1-siRNA质粒组裸鼠的肿瘤体积明显增长(P<0.05);肿瘤内LKB1基因表达水平明显下降,而Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Ptch、Smo的表达升高,Hedgehog信号通路抑制因子Sufu、Hip表达下降。结论 LKB1基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的LKB1基因的表达,上调Hedgehog信号通路相关因子的表达,促进肿瘤生长。LKB1基因和Hedgehog信号通路在乳腺癌细胞中呈现负相关表达。     

Sonic Hedgehog信号通路与乳腺癌抑癌基因LKB1的相互影响

目的：研究环靶明（cyclopamine）抑制Sonic Hedgehog（SHH）信号通路后,转染LKB1基因的乳癌细胞的凋亡、周期及信号通路相关基因表达的改变。方法：抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组（231组）和转染LKB1基因的MDA-MB-231（LKB1组）两组,每组分别采用0,5×10-6mol/L,10×10-6mol/L,20×10-6mol/L 4种浓度的环靶明处理细胞,各小组细胞分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,用RT-PCR法和Western blot法检测Sonic Hedgehog信号通路相关基因Shh、Smo、Ptch、Sufu、Hip及LKB1的mRNA和蛋白表达水平。结果 ：在LKB1组和231组中,各小组细胞的凋亡率变化与Sonic Hedgehog相关基因Shh、Smo表达变化一致,随环靶明浓度增大凋亡率增加、基因表达受抑制,在环靶明浓度达10×10-6mol/L时变化最明显,且LKB1组较231组的变化更为明显。在231组中,各小组细胞周期变化与Sonic Hedgehog相关抑制基因Sufu、Hip表达变化一致。而在LKB1组中,各小组细胞周期与抑制基因Sufu、Hip表达变化均无明显差异。在231组中,各小组抑癌基因LKB1的表达随药物浓度增加渐增强。Ptch表达在两组均无明显变化。结论 ：抑癌基因LKB1可协同Sonic Hedgehog信号通路抑制剂环靶明促进乳腺癌细胞凋亡,调控细胞周期,推测其机制可能是通过如上信号通路相关基因表达变化而实现。信号通路抑制剂环靶明可提高乳腺癌细胞抑癌基因LKB1的表达,推测此也是信号通路抑制剂降低癌细胞活性机制之一。     

LKB1通过增强间隙连接细胞通讯增加乳腺癌细胞对顺铂的敏感性

目的研究LKB1对乳腺癌细胞顺铂化学敏感性的作用及机制。方法构建LKB1高表达的稳定转染细胞MDA-MB-231/LKB1及其空载对照细胞MDA-MB-231/VEC。RT-PCR、Western印迹法检测细胞间隙连接蛋白Cx26、Cx32、Cx43和Cx50的核酸、蛋白水平表达;免疫荧光实验对Cx43进行胞内表达定位;染料传输实验评估间隙连接细胞通讯功能;细胞毒实验检测顺铂杀伤乳腺癌细胞的＂旁观者效应＂及计算顺铂的半数抑制浓度。结果 LKB1增加了间隙连接蛋白Cx43的核酸及蛋白水平表达（P〈0.01）,但对Cx26、Cx32及Cx50的表达水平无明显影响。LKB1增加了细胞膜上Cx43的表达,增强了细胞传递荧光黄染料的能力,并使顺铂对细胞的旁观者杀伤效应增强。LKB1也增加了细胞对顺铂的敏感性,MDA-MB-231、MDA-MB-231/VEC和MDA-MB-231/LKB1的半数抑制浓度分别为22.46、24.72、6.55 nmol/L,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 LKB1通过增强乳腺癌细胞的Cx43表达及间隙连接细胞通讯功能增强了顺铂的旁观者杀伤效应,并增加了细胞对顺铂的敏感性。