细胞生长相关新基因PP3105的克隆及其初步功能研究

目的 新基因PP3105的克隆及其初步功能研究。方法 分离和克隆新基因PP3105的全长序列，在生物信息学分析的基础上，采用克隆形成、亚细胞定位、生长曲线等实验对该基因进行初步功能研究。结果 实验表明PP3105有两个不同的转录本，并表现出一定的组织特异性；染色体定位于4q22-24；蛋白定位于细胞膜和细胞浆中；克隆形成实验显示有明显的体外集落抑制作用；生长曲线实验表明PP3105在SMMC7721细胞中的表达对细胞增殖有抑制作用。结论 新基因PP3105可能是一个新的金属离子尤其是锌的转运蛋白，并且与肝癌细胞的生长、增殖相关。     

肝癌相关基因HCAP1的定位克隆和初步功能研究

目的　克隆和筛选位于染色体 17p13.3缺失区内的肝癌相关基因。方法　采用定位克隆的策略 ,通过PAC筛库和RACE(rapidamplificationofcDNAends)方法克隆新基因 ;通过多组织膜片Northern杂交分析其组织表达谱 ,Southern杂交分析其在肝癌组织DNA水平上的变化 ,然后通过克隆集落形成实验与MTS法测定细胞生长速度 ,初步筛选其作为肿瘤相关基因的可能性。结果　克隆到一个基因HCAP1(HCC associatedprotein 1,先前又称HC5 6 ) ,GenBank登录号为AF177341。多组织膜片杂交显示该基因在多种组织中表达 ,其中胎盘、肝脏和肌肉中表达较高。Southern杂交结果显示HCAP1基因在肝癌组织中存在缺失 ,比例为 2 5 .3% ;克隆集落形成实验与生长抑制率测定实验初步表明该基因能抑制肝癌细胞株Hep3B细胞的生长 ,抑制率为 31.8%。结论　HCAP1可能与肝癌的发生发展相关 ,是一个新的肝癌相关基因的侯选者。     

CPGL-B对肝癌细胞增殖的影响

目的研究CPGL-B抑制肝癌增殖的分子机制。方法将CPGL-B克隆入慢病毒载体,转染293T细胞包装病毒。之后感染肝癌细胞系,通过CCK-8染色和克隆形成的方法检测细胞增殖的变化,用PI染色的方法检测细胞周期的变化;用western印迹方法检测p21的表达。结果CPGL-B可抑制肝癌细胞的增殖和克隆形成能力,并使细胞阻滞在G1期,上调p21的蛋白水平。结论CPGL-B能够抑制肝癌的增殖,抑制肝癌细胞从G1到S期的转化,这种作用可能是通过上调p21介导的。     

Hsa-miR-93在肝癌中的作用机制研究

目的观察hsa-miR-93对肝癌细胞生长和细胞周期的影响，以分析其在肝癌中的作用机制。方法用real time RT-PCR法分析hsa-miR-93在人肝癌和癌旁肝组织的表达情况。此后构建hsa-miR-93过表达载体，同时合成二甲氧修饰的hsa-miR-93的反义核苷酸序列，二者转染肝癌细胞株观察它们对肝癌细胞生长及细胞周期的影响，分别以空载体和无关寡核苷酸序列为对照。转染后CCK-8法检测肝癌细胞生长情况，通过流式细胞仪分析细胞周期。结果hsa-miR-93在肝癌组织中表达明显高于癌旁肝组织。hsa-miR-93过表达载体可以促进肝癌细胞生长，促进细胞周期的G1／S期转换，而hsa-miR-93反义序列抑制肝癌细胞生长，使肝癌细胞阻滞于G1期（P〈0．05）。结论hsa-miR-93通过促进细胞周期的G1／S期转换而促进肝癌细胞生长，提示hsa-miR-93可能是肝癌的发病机制中一个重要分子。     

非编码小RNA在肝癌发生中的作用及机制研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类约22个核苷酸组成的小分子非编码RNA,主要在转录后水平通过促进靶基因mRNA的降解或抑制其翻译过程而发挥负调控作用.miRNA不但参与生命活动的一些基本过程,如细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡和细胞代谢等,而且与人类疾病,尤其与恶性肿瘤的发生发展密切相关,可作为一类新的癌基因及抑癌基因,在癌症的发生发展中起重要作用.近年,我们首次在肝癌染色体变异区内发现新的肝癌转移促进因子miR-151并阐明了其分子作用机制,即RhoGDIA是miR-151下游靶基因,介导了miR-151的促肝癌转移功能;miR-151与其宿主基因FAK协同作用,活化Rac,cdc42及Rho GTPase,进而促进肝癌细胞的迁移、侵袭与转移,为阻断肝癌转移提供了新的治疗靶点.研究发现多个用于肝癌诊断及转移、复发、预后预测的miRNA分子标志物,建立了肝癌诊断、转移、复发及预后的miRNA预测模型;鉴定miR-125b为肝癌侯选抑癌基因,主要通过抑制癌基因LIN28B发挥抑癌作用;发现miR-30d为肝癌转移促进基因,转移抑制基因GNAI2为其功能靶基因;另外,发现miRNA不仅与mRNA的3’非翻译区结合,而且能与基因家族的蛋白编码区结合从而调控基因表达,为研究miRNA在肿瘤中的调控机制提供了新的思路;采用实验方法论证了单个基因能同时被多个miRNA所调控,为建立miRNA与mRNA复杂的相互作用调控网络提供了良好的实验基础.     

人重组TRAIL对胆囊癌细胞生长的影响

目的探讨人重组肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(recombinant human tumor necrosis factor relat-ed apoptosis inducing ligand,rhTRAIL)对胆囊癌细胞株SGC-996的作用。方法用Western-blot法检测胆囊癌细胞株中TRAIL死亡受体DR4、DR5和Fas相关死亡结构域(fas-associated death domain,FADD)的表达状况,生长曲线、相差显微镜和流式细胞仪观测rhTRAIL作用于胆囊癌细胞株后的细胞生长状况。结果胆囊癌细胞株SGC-996中,有死亡受体DR4、DR5和Fas相关死亡结构域(FADD)的表达,rhTRAIL作用胆囊癌细胞后,细胞生长受到抑制,作用前后细胞Casepase-3/7活性明显升高,流式细胞仪检测表明rhTRAIL治疗组和对照组细胞的凋亡差异明显(P<0.05)。结论rhTRAIL在体外对胆囊癌细胞株SGC-996有明显抑制作用,可能成为治疗胆囊癌的新途径。     

用RAPD标记检测棘阿米巴基因组DNA多态性

本文用ＲＡＰＤ技术就我国首次分离到的棘阿米巴角膜炎病原体Ｗ株（ＥＣＮＵ－９２Ｗ１），同其它４个虫株（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａｐｏｌｙｐｈａｇａ，Ａ．ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ，Ａ．ｑｕｉｎａ，Ａ．ｐａｌｅｓｔｉｎｅｎｓｉｓ）进行了分子分类的比较研究，并对各虫株的系统发生进行了初步探讨。虫株间的共享度各有差异，其中Ａ．ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ和Ａ．ｑｕｉｎａ最大，为０．６４５；Ｗ和Ａ．ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ，Ａ．ｑｕｉｎａ分别为０．６３６，０．６００；Ａ．ｐｏｌｙｐｈａｇａ和Ａ．ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ，Ａ．ｑｕｉｎａ及Ｗ分别为０．５７６，０．４７６，０．４７８；Ａ．ｐａｌｅｓｔｉｎｅｎｓｉｓ和Ａ．ｐｏｌｙｐｈａｇａ，Ａ．ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ，Ａ．ｑｕｉｎａ及Ｗ分别为０．２２５，０．２００，０．２７０，０．３０８。结合以往对形态学，同工酶和ｍｔＤＮＡ限制性内切酶分析的结果，进一步为Ａ．ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ－Ａ．ｑｕｉｎａｃｏｍｐｌｅｘ提供了分子证据，并将Ｗ株初步鉴定为此复合体     

siRNA干扰c-FLIP表达治疗胆囊癌的实验研究

目的 检测c-FLIP在胆囊癌组织中的表达,探讨siRNA(small interfering RNA)干扰胆囊癌细胞c-FLIP表达后对细胞生长的影响.方法 用免疫组化法检测10例正常胆囊组织,10例胆囊腺瘤和35例胆囊癌组织中c-FLIP的表达;siRNA干扰c-FLIP表达后,通过生长曲线测定、倒置相差显微镜检查和流式细胞仪检测细胞生长状况.结果 在胆囊癌组织中,c-FLIP的表达明显高于在胆囊腺瘤(P<0.05)和正常胆囊组织中的表达(P<0.05);siRNA干扰c-FLIP表达后,胆囊癌细胞株SGC-996的生长明显受到抑制,倒置相差显微镜检查发现,干扰后细胞凋亡细胞比例明显增加,流式细胞仪的检查发现干扰后细胞凋亡比例与对照组相比明显上升(P<0.05).结论 siRNA干扰c-FLIP表达的靶向治疗有可能成为治疗胆囊癌的新的方法.     

长链非编码RNA亚细胞定位和功能的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)的亚细胞定位和其功能息息相关，定位于细胞核时，lncRNA可以维持染色质结构，调控基因转录，参与mRNA的可变剪接；定位于细胞质时参与信号传导、转录后调控、翻译和翻译后修饰；定位于细胞器时协助完成细胞器的功能。lncRNA的亚细胞定位机制与其自身序列、结合蛋白等密切相关。此外通过构建核滞溜载体Snovector、添加胞质定位元件等强制改变lncRNA的亚细胞定位，以及利用APEX2等技术研究lncRNA亚细胞定位和其功能之间的关系，有利于lncRNA疗法的开发。