Th17相关性细胞因子在HIE中的表达及临床意义

目的 研究新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清中白细胞介素-17(IL-17)与白细胞介素-23(IL-23)水平的变化,探讨IL-17和IL-23与HIE之间的关系.方法 ELISA法测定新生儿血清IL-17与IL-23的水平,电化学发光免疫法测定血清神经元特异性烯醇化酶(NSE).HIE组患儿60例为实验组,同期住院的足月健康新生儿48例为对照组.对两组新生儿不同时间的血清IL-17与IL-23的水平进行比较性分析,同时分析他们与NSE的相关性.结果 HIE组治疗前血清中IL-17与IL-23水平明显高于HIE组治疗后及对照组,有显著性差异(P<0.01).且IL-17、IL-23与NSE水平呈正相关.结论 IL-17和IL-23在HIE的发病机制中起一定作用,检测血清中IL-17与IL-23水平变化对判断HIE病情进展、指导临床治疗,有一定的临床意义.     

含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸2395对鼠巨细胞病毒肝炎新生小鼠的治疗作用北大核心CSCD

目的 研究含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸2395（CpG ODN2395）对鼠巨细胞病毒（MCMV）肝炎新生小鼠的治疗作用及相关机制.方法 SPF级BALB/c新生小鼠,按窝随机分为对照组、病毒组和治疗组.对照组：腹腔注射9 g/L盐水20×10-6L隔日1次;病毒组：腹腔注射MCMV（病毒致半数细胞感染量TCID50=108.31/L）20×10-6L1次,从接种MCMV当日起隔日腹腔注射9 g/L盐水20×10-6L;CpG治疗组：腹腔注射MCMV（TCID50=108.31/L） 20×10-6L1次,从接种MCMV当日起隔日腹腔注射CpG ODN2395 20 mg/kg.观测小鼠的生长发育情况.HE染色观察肝脏病理,酶联免疫吸附试验检测小鼠血清ALT、IFN-α,PCR法检测肝脏MCMV DNA,反转录（RT）-PCR法检测肝脏IFN-α mRNA,Wester blot法检测肝脏的Toll样受体9（TLR9）和衔接蛋白-髓样分化标志物88 （MyD88）的表达水平.应用SPSS 16.0软件进行分析.结果 1.病毒组小鼠生长发育落后,体质量低于对照组和治疗组,7d、14 d时差异有统计学意义（F=18.919、25.543,P均＜0.05）;治疗组发育介于对照组和病毒组之间,体质量均低于对照组,在7d时差异有统计学意义（t=3.187,P ＜0.05）.2.病毒组小鼠血清ALT高于对照组和治疗组,治疗组血清ALT高于对照组,差异均有统计学意义（F=11.407、11.791、154.565,P均＜0.05）.3.肝组织病理改变：病毒组肝组织病变活动性积分（HAI）值在第3天达高峰,以后逐渐下降;治疗组肝组织HAI均值也在第3天达高峰,但肝损害明显轻于病毒组,以后肝病变逐渐减轻,在第7天和第14天时HAI均值都显著低于病毒组.4.病毒组和治疗组小鼠3d、7d和14 d时肝脏MCMV DNAPCR检测阳性,3个时间点治疗组MCMV DNA负荷量均低于病毒组.5.病毒组和治疗组的3d时血清IFN-α达高峰,7d、14 d时渐下降;治疗组的血清IFN-α高于病毒组和对照组.6.病毒组和治疗组肝脏IFN-α mRNA表达水平在3d时增加,7d时达高峰,14 d时下降,3个时间点表达水平差异有统计学意义.治疗组IFN-αmRNA表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.7.治疗组肝脏TLR9表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.治疗组肝脏MyD88表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.结论 CpGODN2395可能提高TLR9的表达水平,通过MyD88依赖途径激活IFN-α的分泌,抑制MCMV的复制,减轻新生小鼠MCMV肝炎肝功能损害,改善肝脏病变和降低肝脏病毒负荷量具有抗MCMV的活性作用.     

无创正压通气治疗新生儿呼吸窘迫综合征患儿的临床效果

目的探讨无创正压通气治疗新生儿呼吸窘迫综合征患儿的临床效果。方法选取2018年1月至2020年6月医院收治的60例新生儿呼吸窘迫综合征患儿作为研究对象,依据不同的治疗方式分为对照组(28例)和试验组(32例)。对照组接受同步间歇指令通气治疗,试验组接受无创正压通气治疗,比较两组治疗前和治疗24、48 h后的氧合指数(OI)、吸入氧浓度(FiO₂),以及呼吸机使用时间、氧疗时间、住院时间和并发症发生率。结果治疗24、48 h后,两组的OI均高于治疗前,FiO₂均低于治疗前,且试验组OI高于对照组,FiO₂低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);试验组的呼吸机使用时间、氧疗时间、住院时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组并发症发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论无创正压通气治疗可有效缩短新生儿呼吸窘迫综合征患儿的治疗时间,并可有效改善期通气状态,且安全性较高。     

Th17相关性细胞因子在新生小鼠MCMV肝炎中的表达及意义

目的:探讨新生小鼠MCMV肝炎治疗前后外周血及肝脏中Th17相关性细胞因子白细胞介素17(IL-17)、白介素23(IL-23)的表达变化及其意义.方法:腹腔接种MCMV建立MCMV肝炎模型(MCMV组),对照组腹腔注射等量的无菌生理盐水,更昔洛韦治疗组在接种病毒后当日每天腹腔注射更昔洛韦60 mg/(kg.d),连用2周.分别用全自动生化分析仪、ELISA方法和RT-PCR检测血清谷丙转氨酶(ALT)、外周血中IL-17、IL-23水平和肝组织IL-17mRNA、IL-23mRNA的表达,同时分析它们与ALT的相关性.结果:病毒组小鼠血清IL-17、IL-23在感染后3、7和14天的水平均明显高于正常对照组相应时点(P＜O.01)的水平,更昔洛韦治疗后7和14天IL-17、IL-23的水平均明显低于病毒组相应时点(P＜0.01)的水平;肝组织IL-17mRNA、IL-23mRNA的表达在感染后3、7和14天的水平均明显高于正常对照组相应时点(P＜0.01)的水平,更昔洛韦治疗后7和14天肝组织IL-17mRNA、IL-23 mRNA的表达均明显低于病毒组相应时点的水平.IL-17、IL-23与AL水平呈正相关(r值为0.691～0.803,P＜0.05).结论:MCMV肝炎新生小鼠IL-17、IL-23呈现高表达,提示IL-17、IL-23可能参与了新生小鼠MCMV肝炎的发病.     

新生BALB/c小鼠巨细胞病毒肝炎模型的建立

目的:建立新生BALB/c小鼠巨细胞病毒肝炎模型.方法:小鼠巨细胞病毒经腹腔注射感染新生BALB/e小鼠,建立肝炎小鼠模型.结果:感染小鼠肝炎发病率为100.00％,死亡高峰在感染后3～5天,死亡率为10.00％.MCMV感染小鼠生长发育缓慢,7、14天时体重低于未感染小鼠(P＜0.05).HE染色可见3天时炎性细胞浸润,肝细胞肿胀变性,表现为体积变大、胞浆空淡,肝细胞点状坏死;7天时病变加重达高峰,可见大泡性脂肪变,大量炎性细胞浸润,肝细胞片状坏死;第14天病理损害仍保持较高水平.MCMV感染新生小鼠与对照组相比,在第3、7、14天ALT明显升高(P＜0.05),ALT的高峰是在第7天.PCR检测MCMV感染新生小鼠肝脏组织内MCMV DNA为阳性,7天时肝脏病毒滴度最高.结论:新生小鼠巨细胞病毒肝炎动物模型为探讨先天性HCMV肝炎的发病机制、转归及抗病毒药物的筛选提供了有力的工具.     

新生小鼠巨细胞病毒肝炎模型的建立

目的 探讨建立鼠巨细胞病毒(MCMV)感染致新生小鼠肝炎模型的可行性.方法 48只日龄24 h内新生BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组每只小鼠腹腔注射MCMVSmith株20μl TCID50(104.31/0.1 ml),对照组注射无菌生理盐水20μl,注射第3、7、14天取血清和肝脏,检测血清ALT水平,肝脏组织HE染色后用光镜检查组织病理损害,同时提取肝脏组织的DNA,应用MCMV及β-actin引物行PCR扩增,然后跑电泳和测序.结果 实验组小鼠ALT水平(U/L)在3天时即明显升高,7天达高峰,14天时有所下降,与对照组比较,差异均有统计学意义[3天:(58.7±11.5)比(25.0±10.6),7天:(169.6±57.4)比(25.1±8.4),14天:(157.3±15.5)比(26.5±9.4),P均＜0.01].实验组小鼠肝组织内均可见肝细胞气球样变性,点灶状坏死,门管区炎性细胞浸润,肝细胞核内病毒包涵体,7天时最严重;对照组肝细胞无相似病理变化.实验组MCMV-DNA PCR电泳全部出现阳性条带,阳性条带测序结果与MCMV基因序列的同源性完全相符.结论 MCMV能侵袭BALB/c新生小鼠引起肝炎,这种模拟人类巨细胞病毒肝炎的新生小鼠模型的建立为该病动物实验研究提供了可能.     

白细胞介素-35在新生小鼠巨细胞病毒感染中的作用

目的 探讨白细胞介素-35(interleukin-35,IL-35)在鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染新生小鼠肝脏中的表达及其作用.方法 将新生仔鼠按窝随机分为空白对照组、更昔洛韦组及病毒组,每组6只.病毒组和更昔洛韦组分别于仔鼠出生4～6 h内腹腔接种致半数细胞感染量为104.31 U/0.1 ml的MCMV病毒悬液20μl,建立MCMV感染小鼠模型,更昔洛韦组在接种病毒悬液24 h后腹腔注射更昔洛韦50 mg/kg,每日1次,连续14d.然后处死仔鼠,采用逆转录聚合酶链反应技术检测肝脏组织IL-35的亚基——EB病毒诱导基因3(Epstein Barr virus induced gene 3,EBi3)和p35 mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测血清中IL 35含量.多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用q检验.结果 (1) MCMV感染后病毒组小鼠出现食欲差、活动少、皮毛稀松、对刺激反应迟钝、生长迟缓、体重不增等表现.(2)病毒组肝脏组织有MCMV DNA表达,更昔洛韦组亦有表达,但弱于病毒组.(3)病毒组血清IL-35水平[(63.02±14.13) ng/L]较空白对照组[(126.04±16.00) ng/L]及更昔洛韦组[(118.97±35.50) ng/L]明显减低,差异有统计学意义(q分别为4.560和4.033,P均＜0.05).(4)病毒组EBi3 mRNA表达水平(0.675±0.232)较空白对照组(1.367±0.178)及更昔洛韦组(1.513±0.170)明显减低,差异有统计学意义(q分别为4.895和4.617,P均＜0.05).病毒组p35 mRNA表达水平(0.567±0.099)较空白对照组(1.411±0.384)及更昔洛韦组(1.499±0.217)亦明显减低,差异有统计学意义(q分别为4.752和4.381,P均＜0.05).(5)更昔洛韦组小鼠体重、血清IL 35、肝脏组织EBi3和p35 mRNA与空白对照组差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-35做为一种抑制性细胞因子,在MCMV感染急性期,可以抑制其炎症反应;而在MCMV急性感染后所导致的持续病理损伤过程中发挥着重要的保护作用.