NDRG2通过调控肝癌细胞磷脂和甘油三酯代谢抑制肝细胞癌的生长：基于代谢组学分析

Objective To explore the role of the tumor suppressor gene NDRG2 in regulating lipid metabolism in hepatoma cells. Methods We analyzed the differential expression of NDRG2 gene between hepatocellular carcinoma tissues (n=809) and normal liver tissues (n=379) based on data from TNMplot database, and investigated the correlation between NDRG2 mRNA expression and the overall survival of the patients with hepatocellular carcinoma using THPA database, which was also used for analysis of NDRG2 expression levels in tumor cell lines for screening hepatoma cell lines. Human hepatoma cell line HepG2 was infected with a lentivirus containing NDRG2 cDNA, and the expression level of NDRG2 in the infected cells was detected using qPCR and Western blotting. Lipid metabolomics analysis was performed to analyze the regulatory effect of NDRG2 overexpression on lipid metabolism in HepG2 cells, and ELISA and Oil Red O staining were used to examine the changes in contents of phospholipids and triglyceride in NDRG2-overexpressing HepG2 cells. Results Analysis of the TNMplot database showed that NDRG2 expression level was significantly lower in hepatocellular carcinoma tissues than in normal liver tissues (P<0.001). Analysis of THPA database showed that the patients with high NDRG2 mRNA levels had a longer survival time than those with low NDRG2 mRNA levels, and NDRG2 expression level was the highest in HepG2 cell line among the tumor cell lines. Metabolomics analysis showed that in HepG2 cells, NDRG2 overexpression led to changes in the contents of phospholipids, and among them lecithin PC, phosphatidyl glycerol PG, phosphatidyl ethanolamine PE, sphinophosphatidyl serine SM, and ceramide Cer exhibited significant changes. The results of ELISA and Oil Red O staining demonstrated that NDRG2 overexpression obviously reduced the contents of multiple phospholipids and significantly lowered the contents of triglyceride in HepG2 cells. Conclusion NDRG2 regulates tumorigenesis of hepatocellular carcinoma by modulating the metabolism of phospholipids and triglyceride.     

SPARC通过竞争性结合胶原蛋白抑制DDR2的活化

目的 探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)是否与盘状结构域受体2(DDR2)竞争性结合胶原蛋白,并观察SPARC对DDR2磷酸化水平的影响.方法 采用转染小干扰RNA的方法下调人前列腺癌细胞PC-3中DDR2的表达,观察对该细胞中SPARC mRNA表达水平的影响.在HEK293T细胞中同时过表达SPARC和DDR2,在有无胶原蛋白刺激的情况下,通过免疫沉淀及Western blot法检测DDR2磷酸化水平的变化.结果 下调DDR2会引起SPARC mRNA和蛋白表达水平显著下降;而SPARC能够抑制胶原蛋白刺激的DDR2磷酸化.结论 SPARC很可能通过竞争性结合胶原蛋白来抑制DDR2的活化.     

生物化学与分子生物学实验教学改革的几点体会

为进一步提高生物化学与分子生物学实验课的授课质量,促进学生学习兴趣的提高和综合能力的培养,对实验课教学的部分环节进行了调整和充实,充分发挥了教与学互动的优势,取得了良好的教学效果.     

肿瘤相关中性粒细胞诱导人粘液表皮样癌细胞上皮-间质转变和侵袭转移的功能及机制研究

目的:研究肿瘤相关中性粒细胞对人粘液表皮样癌MC3细胞上皮-间质转变(EMT)和侵袭转移过程调控的功能及机制。方法:分离培养C57小鼠骨髓中性粒细胞,Transwell检测肿瘤相关中性粒细胞对MC3侵袭和迁移的影响;Western印迹和Real-time PCR检测Vimentin等mRNA和蛋白表达;免疫荧光等检测Vimentin表达。结果:肿瘤相关中性粒细胞中TGF-β表达增加;MC3细胞与中性粒细胞共培养后Vimentin和Snail表达增加;裸鼠体内实验表明中性粒细胞浸润程度与Vimentin表达相关。结论:肿瘤相关中性粒细胞通过TGF-β诱导MC3细胞中Snail表达,并促进肿瘤侵袭和转移。     

蛋白质组学在病原微生物基因功能研究中的应用

病原微生物，尤其是新病原微生物的出现及一些病原微生物的抗药性，使感染性疾病成为危害人类健康的大敌。目前已完成302个（不包括病毒）微生物基因组测序，还有573个重要微生物基因组在测序中，而病原微生物基因组的研究是全基因组测序的重要组成部分，多种重要病原微生物包括流感嗜血杆菌（Hemophilus influenzae）、     

DDR2血管内皮细胞条件性基因敲除小鼠的复制、鉴定及表型分析*

目的 应用Cre/LoxP系统复制盘状结构域受体2（DDR2）在血管内皮细胞可诱导性条件性基因敲除小鼠模型DDR2i?EC（DDR2flox/flox,Cdh5-Cre/ERT2）,并分析其在肝脏中的表型。方法 复制DDR2打靶载体,通过电转入小鼠胚胎干细胞（ES细胞）打靶,通过聚合酶链反应（PCR）+脱氧核糖核酸（DNA）印迹法鉴定筛选阳性ES细胞,将阳性的ES细胞注射到C57BL/6N小鼠囊胚,移植入受体小鼠子宫以获得嵌合体小鼠。将得到的嵌合体小鼠与C57BL/6N小鼠回交得到F0杂合子,F0代杂合小鼠自交筛选获得F1代DDR2flox/flox小鼠,该小鼠与Cdh5-Cre/ERT2小鼠杂交,通过子代自交获得DDR2在血管内皮细胞可诱导性条件性基因敲除（DDR2flox/flox, Cdh5-Cre/ERT2）小鼠。他莫昔芬诱导血管内皮细胞上DDR2基因敲除,对小鼠进行表型分析。结果 获得DDR2血管内皮细胞可诱导性条件性基因敲除小鼠DDR2i?EC（DDR2flox/flox,Cdh5-Cre/ERT2）,DDR2i?EC小鼠出生时符合孟德尔遗传定律,发育良好,他莫昔芬诱导敲除小鼠血管内皮细胞DDR2基因表达后,小鼠出现自发性肝纤维化及黄体血管新生障碍等表型。结论 成功复制DDR2血管内皮细胞可诱导性条件性基因敲除小鼠模型。血管内皮细胞DDR2缺失能导致自发性肝纤维化。     

讨论课在本科生《细胞与分子基础》教学中的实践及分析

《细胞与分子基础》是空军军医大学新设立的一门医学类专业必修的专业基础模块课程。该模块打破了传统的学科界限,采取课堂授课与学员自学相结合、教员讲授与引导学员开展专题讨论的形式。模块教学中采用讨论式教学,教员在课前提前布置选题范围,学员根据自己的兴趣进行选题准备,课上分组讨论后教学组长点评并为获奖学员颁奖,学员课后对讨论课提出的问题进行总结和分析。讨论课激发了学员的学习兴趣,提高了独立思考能力和自我展示的能力,取得了良好的教学效果。     

胶原盘状结构域受体2基因缺失对小鼠卵巢功能的影响

目的利用胶原盘状结构域受体2(Discoidin domain receptor 2,DDR2)基因缺失小鼠,研究DDR2缺失对卵巢功能的影响,探索DDR2缺失小鼠不孕的原因。方法①阴道脱落细胞涂片结合改良巴氏染色法检测DDR2基因缺失纯合子(SLIE)与野生型(WT)小鼠动情周期的差异。②PMSG+HCG促排卵后在体式显微镜下计数排卵数量差异,HE染色法观察SLIE小鼠与WT小鼠促排卵后卵巢与子宫形态及结构的差异。结果①成年SLIE小鼠缺乏明显的动情期,绝大多数处于动情间期,缺乏规律的动情周期。②促排卵实验发现,SLIE小鼠促排卵数量显著减少;③排卵后黄体生成早期,SLIE小鼠子宫壁薄,体积小;卵巢切片中没有黄体生成;子宫切片HE染色显示子宫内膜薄,腺体及间质增生不明显,未见分泌粘液,未能进入分泌期。结论DDR2缺失导致卵巢对促性腺激素的反应能力降低,促排卵后黄体生成障碍。