人参皂甙Rb1对脑缺血半影区葡萄糖转运体3表达的影响

人参皂甙是从植物根、茎、叶中提取出的主要有效成分，具有多种生物活性。除了有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降低血糖等作用外，对脑缺血损伤还有保护作用，可减小脑梗塞体积。我们用大鼠脑缺血再灌注模型，观察人参皂甙Rb1对脑缺血再灌注损伤后缺血半影区葡萄糖转运体3（GLUT3）mRNA、蛋白表达以及脑梗塞体积的影响，从能量代谢角度进一步探讨Rb1的神经保护机制。     

葡萄糖转运体3在脑缺血/再灌注后半影区表达的变化及意义

目的:研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达。方法:用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用Kontron IBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗塞体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定GLUT3 mRNA水平的变化;用免疫组织化学方法半定量测定GLUT3蛋白水平的变化。结果:脑缺血1 h后再灌注组的脑梗塞体积明显小于缺血3 h再灌注组梗塞体积。GLUT3自3 h即开始升高,24 h到达高峰,1周时仍高于假手术对照组;缺血3 h再灌注组在3 h有一下降点,然后升高,24 h到高峰,1周时接近正常水平。GLUT3蛋白水平的表达与mRNA相符合。结论:GLUT3在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血／再灌注的保护性反应。     

大鼠脑缺血／再灌注过程中脑型葡萄糖转运体在缺血半影区的表达

【目的】研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、皮质半影区脑型葡萄糖转运体（GLUT1、GLUT3）转录水平和蛋白水平的表达。【方法】用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型，用Kontron IBAS2．5全自动图像分析系统检测脑梗死体积比；剥取缺血半影区皮质组织，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR），测定GLUT1、GLUT3 mRNA水平的变化；用免疫组织化学半定量测定GLUT1、GLUT3蛋白水平的变化。【结果】脑缺血1h后再灌注（MCAO1h／R）较缺血3h再灌注（MCAO3h／R）脑梗死体积明显减小。MCAO1h／R组GLUT1、GLUT3 mRNA缺血后升高，24h到达高峰，但GLUT1比GLUT3提前升高，且升高的幅度更大。MCA03h／R组GLUT1在3h开始升高，24h到高峰；GLUT3在缺血3h有一下降点，然后升高，24h到高峰，一周恢复正常，同样GLUT1比GLUT3提前升高，且升高的幅度更大。MCAO3h／R组较MCAO1h／R组的GLUT1、GLUT3峰值低。GLUT1、3蛋白水平的表达与mRNA相符合。【结论】GLUT1、GLUT3在缺血半影区的表达上调，可能是机体对缺血，再灌注损伤的保护性反应。     

葡萄糖转运体3在大鼠脑缺血/再灌注后海马中的表达

[目的]研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、海马区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达.[方法]健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分成3组:①缺血1 h再灌注组(MCAO1h/R)28只;②缺血3 h再灌注组(MCAO3h/R)24只;③假手术组(pseudo operation)4只.用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用Kontron IBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗死体积比;剥取海马区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定GLUT3 mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT3蛋白水平的变化.[结果]脑缺血1 h后再灌注(MCAO1h/R)较缺血3h再灌注(MCAO3h/R)脑梗死体积明显减小.MCAO1h/R组:GLUT3 mRNA在6 h有1次升高,但以后各时相均低于正常对照组.MCAO3h/R组:各时间点GLUT3 mRNA的表达均低于正常对照组,在72h、1周不能测到GLUT3 mRNA的表达.GLUT3蛋白水平的表达与mRNA相符合.MCAO3h/R组与MCAO1h/R组在相应的各时间点比较,GLUT3 mRNA降低幅度差异有统计学意义.[结论]GLUT3在缺血海马区的表达下降,可能与脑缺血再灌注损伤后神经元退变或死亡有关.     

前臂缺血性挛缩的手术治疗

目的：探讨前臂缺血性肌挛缩不同时机手术疗效和最佳手术时机。方法：早期手术组（病程3周以内）4例行坏死肌肉切除、筋膜切开减压，肌腱移位，其中2例行带蒂背阔肌皮瓣移位。晚期手术组（病程6周以上）6例行肌肉（腱）松解、屈肌止点下移、神经松解或移植、肌腱移位延长。其中4例行带蒂背阔肌皮瓣移位，1例行吻合血管神经的游离股薄肌移植重建屈指功能。结果：随访10例，时间2－6．5年。早期手术组优3例，良1例。晚期手术组良3例，差3例。结论：前臂缺血性肌挛缩早期手术能够有效解除组织缺血，防止挛缩纤维化，减轻神经压迫的损害，有利于手功能的恢复。     

异丙酚预先给药对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织葡萄糖转运体-3表达的影响

目的研究异丙酚预先给药对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织葡萄糖转运体-3（GLUT3）表达的影响。方法健康雄性SD大鼠90只，体重290～310g，随机分成3组：假手术组（S组，n=6）、生理盐水组（NS组，n=42）、异丙酚组（P组，n=42）。NS、P组采用线栓法阻断大脑中动脉1h行再灌注，制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，P组在缺血前10min腹腔注射异丙酚10mg／100g，NS组给予等量生理盐水，S组只作切口，不行缺血。NS、P组分别在再灌注即刻、2h、5h、11h、23h、71h、1周各处死6只大鼠，S组于实验11h处死大鼠，断头取脑，计算脑梗塞体积比，用RT-PCR法测定GLUT3 mRNA表达水平，用免疫组织化学法测定GLUT3蛋白表达水平。结果NS组及P组再灌注期脑梗塞体积比、GLUT3 mRNA及GLUT3蛋白表达均高于S组，与NS组比较，P组脑梗塞体积比降低，脑组织GLUT3 mRNA及GLUT3蛋白表达升高（P〈0．05）。结论异丙酚预先给药可上调脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织GLUT3的表达，可能是其减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的机制之一。     

大鼠脑缺血再灌注后半影区葡萄糖转运体3表达的变化

背景：近年来的研究表明，缺血缺氧导致脑内代谢异常乃至能量衰竭，是引起脑组织损伤坏死的重要原因，可见能量代谢障碍是脑缺血再灌注损伤的中心问题。在脑的能量代谢中葡萄糖转运体3中发挥着重要作用。 目的：观察大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、皮质半影区葡萄糖转运体3转录水平和蛋白水平的表达。 设计：随机对照实验。 单位：中山大学附属第二医院神经外科。材料：实验于2002-08／10在中山大学附属第二医院医学研究中心动物试验室完成。选择SD大鼠56只，随机分成3组：①缺血1h再灌注组28只。②缺血3h再灌注组24只。③假手术对照组4只。缺血1h再灌注组白缺血开始分别选取1，3，6，12，24，72h，1周7个时间点，每个时间点7只大鼠；缺血3h再灌注组除无1h时点外，其余时间点与缺血1h再灌注组相同，假手术对照组只作切口，不作插线。 方法：用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型，检测缺血中心区和缺血半影区脑梗死体积比；剥取缺血半影区皮质组织。采用反转录-聚合酶链反应测定葡萄糖转运体3mRNA水平的变化；用免疫组织化学方法半定量测定葡萄糖转运体3蛋白水平的变化。 主要观察指标：①各组大鼠脑缺血再灌注后的脑梗死面积。②各组大鼠脑缺血再灌注后的葡萄糖转运体3mRNA表达水平的变化。③各组大鼠脑缺血再灌注后的葡萄糖转运体3蛋白水平表达的变化。 结果：56只大鼠均进入结果分析。①脑缺血1h后再灌注组的脑梗死体积明显小于缺血3h再灌注组梗死体积。②葡萄糖转运体3mRNA及蛋白水平表达变化：葡萄糖转运体3白3h即开始升高，24h到达高峰，1周时仍高于假手术对照组；缺血3h再灌注组在3h有一下降点，然后升高，24h到高峰，1周时接近正常水平。葡萄糖转运体3蛋白水平的表达与mRNA相符合。 结论：葡萄糖转运体3在缺血半影区的表达上调，可能是机体对缺血再灌注的保护性反应。     

人胚嗅球嗅鞘细胞及人胚鼻粘膜嗅鞘细胞的分离培养与纯化

[目的]采用差速贴壁法及免疫组化对人胚嗅粘膜OECs及人胚嗅球OECs进行体外纯化培养,探讨建立嗅粘膜OECs及嗅球OECs体外培养的方法.[方法]对差速贴壁后的人胚嗅粘膜OECs及嗅球OECs分别交替应用含13％胎牛血清DMEM - F12培养基进行原代培养.观察嗅鞘细胞的形态学变化,采用p75NTR和GFAP免疫细胞化学染色进行鉴定和纯度检测.[结果]人胚嗅粘膜及人胚嗅球均可培养出嗅鞘细胞,嗅粘膜嗅鞘细胞形态多呈双极、三极,伴有细长的突起.p75NTR和GFAP染色均呈阳性反应,体外培养时人胚嗅球嗅鞘细胞纯度比人胚嗅粘膜嗅鞘细胞高.[结论]差速贴壁法可以分离培养出人胚嗅粘膜嗅鞘细胞及人胚嗅球嗅鞘细胞.     

不同速率生长的胶质瘤细胞的葡萄糖代谢状态研究

目的　观察不同速率生长的胶质瘤细胞的葡萄糖代谢状态。方法　用C6细胞克隆培养得到不同细胞形态、不同生长速率的细胞株。分别检测生长最快的C64细胞和最慢的C61细胞的胞内葡萄糖、ATP浓度 ,同时检测两种细胞的己糖激酶蛋白和它们的胞质 /线粒体己糖激酶活性。结果　C64细胞内检测不到葡萄糖 ,C61细胞内葡萄糖浓度为 (0 .17± 0 .0 5 ) μmol/g蛋白 ;C64细胞、C61细胞内ATP浓度分别为 (10 .16± 1.5 1) μmol/g蛋白和 (7.5 7± 0 .3 2 ) μmol/g蛋白。条带的吸光度分析显示C64细胞的己糖激酶Ⅰ稍高于C61细胞 ;C64细胞线粒体己糖激酶活性约为C61细胞的 3倍 ,但其胞质己糖激酶活性仅为C61细胞的一半。结论　葡萄糖转运系统与肿瘤细胞的葡萄糖摄取、葡萄糖代谢状态及生长速度等密切相关。     

秋水仙素对C6胶质瘤细胞葡萄糖摄取的影响

目的观察秋水仙素对C6胶质瘤细胞葡萄糖摄取的影响。方法C6胶质瘤细胞与秋水仙素在37℃下孵育3 h后,再用含125μmol/L未标记2-脱氧葡萄糖(2-DOG)和37×103Bq[3H]2-DOG的磷酸盐缓冲液(PBS)溶液1ml室温下孵育5min。用液闪计数分析仪检测C6细胞葡萄糖摄取。结果秋水仙素以浓度依赖的方式抑制C6细胞葡萄糖摄取率7％～27％。卡巴可刺激葡萄糖摄取增加11％～24％,但这种作用可因秋水仙素的预处理而抵消。胰岛素刺激C6细胞葡萄糖摄取增加35％～47％,且刺激作用不被秋水仙素抵消。结论秋水仙素可能通过抑制微管的聚合使C6细胞基础糖摄取和卡巴可刺激的葡萄糖摄取下降。