与雪旺细胞共培养诱导脂肪来源干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

目的探讨非接触共培养条件下,大鼠SCs对脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的诱导分化效应,为神经组织工程寻找理想种子细胞提供参考。方法取新生1~2 d SD大鼠双侧坐骨神经,酶消化法分离培养SCs,并行S-100免疫荧光染色鉴定。取成年雄性SD大鼠腹股沟和腹膜后脂肪组织,差速贴壁法纯化获得ADSCs并传代,流式细胞仪检测第3代细胞表型CD29、CD34、CD45、CD73、CD90和CD105。取原代SCs和第3代ADSCs按2∶1比例于Transwell共培养系统共培养(实验组),以单纯培养ADSCs作为对照组。倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变,培养14 d流式细胞仪检测神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)表达,免疫荧光染色观察微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)、神经元核蛋白(neuronal nuclei protein,Neu N)和胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)神经元特异性标志物表达情况,并计算阳性细胞率。结果成功分离培养ADSCs并能连续传代,流式细胞仪检测示其高表达CD29、CD90、CD73和CD105,低表达CD34和CD45。倒置相差显微镜下见,实验组共培养后原本呈梭形的ADSCs以胞核为中心收缩,胞体折光性增强,胞体伸出多个长而粗的突起;对照组ADSCs形态无显著变化。流式细胞仪及免疫荧光染色示,共培养后14 d实验组均表达神经元特异性标志物NSE、MAP2、Neu N、GFAP,且阳性细胞率显著高于对照组(P0.01)。结论 SCs与ADSCs非接触共培养,两者不仅能够共生,且SCs能显著促进ADSCs向神经元样细胞分化。     

胰岛素样生长因子-1对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对氯化钴（CoCl2）诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤 PC12细胞凋亡的作 用及机制。方法 取对数生长期的 PC12细胞,分别以 10、20、40、80 μmol/L的 CoCl2溶液和 100、200、400 μg/L的 IGF- 1溶液处理细胞,CCK-8法检测细胞活力,得出 CoCl2和 IGF-1最佳干预浓度。根据选定的实验条件,应用 CoCl2处理 PC12细胞建立 HIE细胞模型,实验分为对照组、CoCl2处理组、IGF-1+CoCl2处理组。分组处理 24 h后采用 CCK-8法 检测细胞存活率;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞 Bax、Bcl-2及 Caspase-3的蛋白的表达 水平。最后在上述实验的基础上,设 CoCl2处理组、CoCl2+IGF-1处理组、HIF-1α抑制剂 2-甲氧雌二醇（2-MeOE2）+ CoCl 2组和 CoCl2+2-MeOE2+IGF-1组,Western blot观察 IGF-1、2-MeOE2及两者共用对 PC12细胞 HIF-1α及 Bax的表 达水平的影响。结果 CCK-8检测结果显示,40 μmol/L CoCl2和 200 μg/L IGF-1为最佳干预浓度。利用以上浓度分 组干预细胞 24 h后,与 CoCl2组相比,IGF-1+CoCl2处理组细胞存活率明显提升,TUNEL阳性细胞数和细胞比例降低, 同时抗凋亡蛋白 Bcl-2表达上调,促凋亡蛋白 Bax、Caspase-3,HIF-1α表达下调,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。 应用 2-MeOE2对细胞进行预处理后,CoCl2+2-MeOE2组与 2-MeOE2+IFG-1组 HIF-1α和 Bax蛋白表达差异无统计 学意义,但均较 CoCl2+IGF-1组明显下调（P＜0.01）。结论 IGF-1可抑制 CoCl2诱导的 PC12细胞凋亡,其保护作用 可能与 HIF-1α表达下调有关。     

经皮椎间孔镜技术治疗腰椎间盘突出症和腰椎间孔狭窄的并发症原因分析与处理

目的分析经皮椎间孔镜技术治疗腰椎间盘突出症和腰椎间孔狭窄的并发症及其原因和相应处理措施。方法采用经皮椎间孔镜技术治疗286例经X线、CT或MRI证实的腰椎间盘突出症(201例)和腰椎间孔狭窄(85例)患者,视觉模拟评分(VAS)评价手术前后疼痛情况、Macnab标准评价手术疗效,记录手术相关并发症并分析原因及相应处理措施。结果与术前相比,术后3个月随访时VAS评分减少[1.00(0.00,1.50)分对8.50(7.75,9.25)分;Z=2.825,P=0.050];Macnab标准优良率达95.45%(273/286)。286患者中神经损伤8例(2.80%)、术区出血和神经根周围血肿形成6例(2.10%)、硬脊膜囊破裂1例(0.35%)、肌肉痉挛3例(1.05%)、感染1例(0.35%)、术后复发4例(1.40%),均予对症治疗后痊愈。结论经皮椎间孔镜技术治疗腰椎间盘突出症和腰椎间孔狭窄总体疗效满意,手术相关并发症发生率较低,通过术前评估,术中精细操作、仔细止血、缩短手术时间,以及术后对症处理,可以有效减少并发症的发生。     

中性蛋白酶Ⅱ消化法在神经元诱导培养中的应用

【目的】建立中性蛋白酶Ⅱ(DispaseⅡ)对神经球的分散、消化及消化后神经元的诱导培养方法。【方法】取15 d胎鼠的脑组织,经剪碎、研磨、血清培养基培养得到的神经球,培养2 d后观察细胞贴壁情况,并换成诱导剂培养液培养3 d,用DispaseⅡ消化已培养的神经球,后期将经DispaseⅡ消化后的细胞继续进行培养、诱导、鉴定。【结果】用DispaseⅡ消化神经细胞后体外培养并诱导,神经球能够诱导分化成神经元,并能形成典型的神经元细胞网状,经NSE鉴定阳性。【结论】利用DispaseⅡ消化的方法能够将神经球消化成单个细胞,消化后的细胞能够继续培养并向神经元分化。     

RAUMDIC双腔脑室外引流管治疗蛛网膜下腔出血的应用研究

目的：探讨RAUMDIC双腔脑室外引流管治疗蛛网膜下腔出血的临床应用研究。方法：入选临床蛛网膜下腔出血患者396例,分为对照组198例,治疗组199例。对照组予以常规药物及单腔脑室外引流管治疗;治疗组给予常规药物及RAUMDIC双腔脑室外引流管治疗,分别观测比较2组患者治疗后1、3、5、7d的脑脊液红细胞计数。统计比较术后14d内患者手术并发症的发生率和颅内感染率;术后7、14d的体温及GCS评分变化。结果：治疗组患者术后脑脊液检验红细胞数较对照组降低明显（P〈0.05）,术后感染率小于对照组（P〈0.05）,手术并发症发生较对照组无差异（P〉0.05）,治疗后患者体温恢复快（P〈0.05）,治疗后14d的GCS昏迷评分较对照组高（P〈0.05）。结论：RAUMDIC双腔脑室引流管较传统单腔脑室引流管提供了更为准确真实的颅内压监测,减少了颅内感染,提高了SAH患者的临床治疗效果。     

柴胡皂苷a影响大鼠急性脊髓损伤后机体炎症水平表达的实验研究

Objective: To investigate the effect of saikosaponina on the expression of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) in the early stage of acute spinal cord injury in rats. Methods: Thirty SD rats were randomly divided into sham operation group, simple injury group, saikosaponin a 5 mg / kg group, 10 mg / kg group, 20 mg / kg group, respectively. The acute spinal cord injury model was made by modified ^,Allen^,s heavy blow method. The rats in the injury group were injected with normal saline only, and the drug groups were intraperitoneally injected with the different dosages. All the animals were sacrificed at 24 h after the operation. The spinal cord and the vena cava sera of the injured segment were taken for 10 minutes and 2 minutes, respectively. The levels of TNF-αand IL-6 in the spinal cord tissue and serum were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）. Results: TNF-αand IL-6 in the spinal cord tissue and serum of the rats in the pure injury group were higher than those in the sham group (P <0.05). The levels of TNF-αand IL-6 in spinal cord tissue and serum of rats treated with saikosaponin a 5 mg / kg, 10 mg / kg and 20 mg / kg were lower than those of the injury group, and the difference was statistically significant (P < 0.05). The expressions of TNF-α and IL-6 in the spinal cord tissue of rats treated with 10 mg / group and 20 mg / kg group the difference were not statistically significant (P> 0.05). The levels of TNF-α and IL-6 in serum of rats treated with 10mg / kg and 20 mg/kg were lower than those of 5mg/kg group (P> 0.05). Conclusion: Saikosaponina could reduce the secondary immune inflammatory response by affecting the early expression of inflammatory factors to improve the body’s immune function in acute spinal cord injury. The10mg/kg group is superior to the other groups, and the drug may partially pass through the spinal blood barrier.     

人工仿生脊髓导管的制备及性能分析

BACKGROUND: The traditional method of preparing tissue-engineered conduit has the defects of complex shape manufacturing and uncontrollable inner space structure, which cannot meet the requirements of some micro-catheters.     

自发性脑出血的遗传因素及其分子机制的研究进展

自发性脑出血（SICH）是指原发性、非外伤性脑实质内出血, 在我国约占全部脑卒中的 20%~30%, 是一种受环境和遗传等多重因素共同影响的疾病。 其高致残率及病死率严重危害着人类的健康。 因此, 找到 SICH 的发病原因及危险因素具有重要意义。 本文主要从遗传学及分子生物学的角度对 SICH 的发生机制的研究进展作一综述。