思维导图在高血压病航空医学鉴定教学实践中的应用

思维导图在多个领域展现出高效处理信息的优势，而高血压的航空医学鉴定缺乏高效的信息整合加工工具，本文通过分析思维导图的原理和高血压航空医学鉴定的特点两方面入手，探讨了思维导图在航空医学鉴定教学的应用价值。     

飞行人员神经精神科教学的现状及思考

神经精神科教学是航空航天临床医学教学的重要组成部分.目前神经精神科的教学内容和教学模式已经不能很好的匹配新的疾病谱和部队战斗力生成的紧迫需求.笔者重点讨论了航空神经精神科教学工作的现状和存在的一些问题,讨论了增加脑血管病、头痛、头晕与焦虑、抑郁状态,大龄飞行员的认知问题等讨论课,旨在增强航空军医解决部队实际问题的能力,面向新的时代、新的疾病谱,部队战斗力生成的新的需求,改进军医大学航空临床医学神经精神科教学工作,调整教学内容,改进教学方法 ,紧贴部队需求,培养实用型、新型航空军医.     

血管内皮间质样转分化遗传示踪小鼠模型的构建及其在肝纤维化研究中的应用

目的 构建Cdh5-Cre^ERT/Acta2-tdTomato-STOP^floxed-eGFP knockin遗传示踪小鼠，并探究其在肝纤维化血管内皮细胞转化研究中的应用。方法 将Cdh5-Cre^ERT小鼠和Acta2-KI小鼠进行交配繁育，经PCR基因型鉴定得到Cdh5-Cre^ERT/Acta2-KI遗传示踪小鼠。通过分离、培养原代肝血窦内皮细胞（LSEC）和建立CCl₄肝纤维化模型，取LSEC和肝脏组织，分别进行免疫荧光染色，观察荧光蛋白tdTomato和eGFP的表达。结果 经他莫昔芬诱导后,Cdh5-Cre^ERT/Acta2-KI遗传示踪小鼠的LSEC和肝脏组织在体内外建立的内皮-间质样转分化条件下可表达eGFP,而未经诱导的对照组只表达tdTomato。结论 成功构建的Cdh5-Cre^ERT/Acta2-KI遗传示踪小鼠可实现对血管内皮-间质样转分化的有效标记，并为肝纤维化中肌纤维母细胞来源的多样性提供新的遗传示踪学依据。     

间充质干细胞及其修饰体在肝纤维化治疗中的作用研究进展

肝纤维化是由饮酒、病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)及胆汁淤积肝脏疾病等多种因素引起的慢性肝损伤,上述因素对肝脏的共同影响是产生慢性炎症,导致异常的肝脏炎症、坏死、再生、修复过程。间充质干细胞(MSCs)是一种多能干细胞,能够植入靶组织并分泌多种因子,从而改变或改善受损组织的功能。干细胞具有自我更新、多潜能分化及低免疫原性等优点,因此MSCs的分化潜力及旁分泌特性使其成为组织修复的重要选择。本文主要就MSCs及其修饰体在肝纤维化治疗中的作用及研究进展进行综述。     

肝癌干细胞研究进展

肝癌是占全球发病率第5、致死率第3的恶性肿瘤。在我国,每年新发现的肝癌患者人数占全球的一半以上。虽然在早期诊断和治疗措施方面已有很大的进步,但是大部分肝癌患者被发现时已属晚期,而且针对肝癌的以手术为主的综合治疗疗效仍有限。近十多年的研究使肿瘤干细胞的概念深入人心,越来越多的证据表明肿瘤干细胞与肿瘤的生长、耐药、转移和复发等密切相关,使人们对肝癌的发生和发展有了新的认识,为肝癌的治疗提供了新的方向。     

Tg737基因参与胎肝干细胞正常分化的机制研究

目的探讨Tg737基因对胎肝干细胞(Fetal liver stem cells,FLSCs)正常分化的影响及相关机制。方法三步分离法富集FLSCs;在HGF诱导FLSCs的不同时间点,RT-PCR检测AFP、ALB、Tg737及HNF4α的mRNA表达,Western blot检测Tg737和HNF4α的mRNA和蛋白表达;慢病毒Tg737-shRNA转染FLSCs,观察转染后Tg737的抑制效果;Tg737抑制后,RTPCR检测不同诱导时间AFP和ALB的mRNA表达;Western blot检测Tg737抑制后HNF4α的蛋白表达。结果三步分离法能有效富集FLSCs;在HGF诱导FLSCs的过程中,AFP的mRNA表达呈逐渐降低的趋势,ALB的mRNA表达逐渐升高,Tg737及HNF4α的mRNA和蛋白表达均呈逐渐升高的趋势;shRNA能有效下调Tg737的mRNA和蛋白表达;在HGF诱导过程中,Tg737抑制组AFP和ALB的mRNA水平均无明显变化;Tg737抑制后HNF4α的蛋白表达显著下调。结论 Tg737和HNF4α参与了FLSCs的正常分化,Tg737的表达缺失会抑制FLSCs的正常分化,其抑分化机制可能是通过下调HNF4α来实现的。     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。     

miR-200a在肝癌干细胞中的差异表达及其作用

目的:分离肝癌细胞系MHCC97-H中肝癌干细胞并分析miR-200a在肝癌干细胞和非肝癌干细胞亚群中的表达差异,探讨miR-200a的表达水平与肝癌干细胞之间的关系.方法:利用流式细胞荧光激活分选法从MHCC97-H中分选出肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)和非肝癌干细胞(non-liver canc-er stem cells,non-LCSCs)两个亚群;采用real-time PCR检测miR-200a在两个亚群中的表达差异;在MH-CC97-H中瞬时转染miR-200a-mimic,检测LCSCs亚群比例的变化.结果:LCSCs亚群占总体细胞的百分比为3.56％;LCSCs亚群细胞中miR-200a的表达明显低于non-LCSCs亚群(P＜0.05);上调miR-200a后LCSCs亚群细胞比例为1.24％.结论:miR-200a在LCSCs亚群细胞中明显低表达,上调miR-200a后LCSCs亚群细胞比例明显降低,提示miR-200a能够调控肝癌干细胞的比例.通过调控miR-200a的表达,可以降低LCSCs亚群细胞比例,从而为肝癌的治疗提供新的思路.     

HGF／Met通路对肝癌细胞株MHCC97-H干细胞样表型的影响

目的观察HGF／Met通路对肝癌细胞株MHCC97-H干细胞样表型的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外培养肝癌细胞株Huh7和MHCC97-H,采用细胞免疫荧光染色技术筛选高表达Met的肝癌细胞株MHCC97-H,将其分为4组：空白组（不做处理）、HGF刺激组（50μg/L HGF）、抑制组（50μg／LHGF＋1mol／LHGF抑制剂PHA665752）和表皮生长因子（EGF）／成纤维细胞生长因子（FGF）刺激组（50μg/LHGF＋20μg/LEGF＋20μg/LFGF）。Westernblot检测前3组MHCC97-H细胞中Met和磷酸化Met（p-Met）蛋白的表达。培养24h后光镜下观察前3组细胞形态学变化。克隆球形成实验检测4组细胞克隆球形成能力。荧光实时定量PCR检测空白组和HGF刺激组不同时间点（2、4、8、16、24h）MHCC97-H细胞中多能干细胞相关基因表达变化。计量资料采用x±s表示,多组间比较采用单因素方差分析和重复测量的方差分析,两两比较采用LSD—t检验。结果细胞免疫荧光染色检测结果显示：肝癌细胞株MHCC97-H与Huh7细胞比较．前者高表达Met,将其作为后续研究对象。Westernblot检测结果显示：空白组、HGF刺激组和抑制组细胞中Met蛋白的相对表达量分别为0．44±0．04、0．37±0．03和0．41±0．04,3组比较,差异无统计学意义（F=2．31,P〉0．05）。而3组细胞中p-Met蛋白的相对表达量分别为0．020±0．010、0．070±0．020和0．010±0．000,3组比较,差异有统计学意义（F=34．11,P〈0．05）,其中HGF刺激组p-Met蛋白的表达水平高于空白组和抑制组（t=3．87,5．20,P〈0．05）。HGF刺激组MHCC97-H细胞形态呈现长梭状问质样改变,而抑制组和空白组细胞形态相似,呈上皮样。克隆球形成实验结果表明：空白组、HGF刺激组、抑制组和EGF／FGF刺激组克隆球数目分别为0、（35．0±6．3）个、（4．3±1．5）个和（54．3±2．5）个,4组比较,差异有统计学意义（F：511．28,P〈0．05）,其中HGF刺激组克隆球数目多于空白组和抑制组（t=9．62,8．21,P〈0．05）,而少于EGF／FGF刺激组（t=4．93,P〈0．05）。实时定量PCR检测结果显示：空白组和HGF刺激组不同时间点（2、4、8、16、24h）C—myemRNA相对表达量分别为1．00±0．11、1．68±0．09、1．08±0．24、1．18±0．13、0．78±0．14、1．06±0．04;Klf4mRNA分另1为1．00±0．20、1．43±0．16、0．87±0．28、1．19±0．29、2．17±0．43、1．41±0．06;Oct4mRNA分别为1．00±0．12、0．54±0．12、0．69±0．19、1．08±0．12、1．62±0．30、0．97±0．11,空白组和HGF刺激组不同时间点上述各指标比较,差异均有统计学意义（F=13．64,8．52,13．56,P〈0．05）;HGF刺激组2hc—myemRNA相对表达量达到峰值,与空白组比较,约升高了1．68倍（t=8．29,P〈0．05）,HGF刺激组16hK]f4mttNA相对表达量达到峰值,与空白组比较,约升高了2．17倍（t=4．27,P〈0．05）,HGF刺激组16hOct4mRNA相对表达量达到峰值,与空白组比较,约升高了1．62倍（t=3．32,P〈0．05）。结论HGF／Met通路的活化能够诱导肝癌细胞MHCC97-H的干细胞样表型转化,其可能作用机制是通过增加多能干细胞相关基因的表达而实现的。     

绿色荧光蛋白转基因小鼠胎肝干细胞在体内外定向分化的潜能

目的探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠胎肝干细胞（FLSCs）在体内及体外定向分化的潜能。方法取孕13d绿色荧光蛋白（GFP）转基因C57BL／6J小鼠胚胎肝脏,经机械消化和胶原酶消化获得FLSCs并扩大培养;成熟肝细胞来自于同品系小鼠成体肝脏,通过两步灌注胶原酶消化法提取,流式细胞仪鉴定其干细胞标志物的表达及自我增殖能力,RT—PCR及Westernblot测定AFP表达;分别将FLSCs经肝细胞生长因子（HGF）及TGF-β诱导分化后,Real—timePCR检测Alb、角蛋白CK一7、8、19mRNA以及Westernblot检测Alb、角蛋白CK-7、8、19蛋白在诱导前后的表达变化,鉴定其向肝细胞和胆管细胞双向分化的能力;经尾静脉注射FLSCs到野生型C57BL／6J肝切除小鼠体内,观察其在肝内重构肝组织的能力。计量资料采用t检验,各时相点比较采用重复测量的方差分析,两两比较采用LSD—t检验。结果成功克隆FLSCs细胞。流式细胞仪检测分离的FLSCs表达上皮细胞黏附分子（EpCAM）、CDl33、CD49f干细胞标志物,其阳性表达率分别为78．6％±3．3％、31．7％±2．5％、47．6％±1．8％。AFPmRNA在FLCs和成熟肝细胞中的相对表达量分别为0．640±0．115和0．053±0．012,蛋白相对表达量分别为1．3834±0．265和0．243±0．227,两者比较,差异有统计学意义（t=8．772,5．354,P〈0．05）。超低黏附培养皿培养FLPCs和成熟肝细胞,其形成克隆球数目分别为（234．04±57．0）个和（5．04±2．0）个,两者比较,差异有统计学意义（t=12．711,P〈O．05）。体外HGF诱导FLSCs分化,Alb、CK-8mRNA表达分别在8、10d到达峰值,分别为0．851±0．030和0．771±0．031;两者蛋白水平于第10天达峰值,分别为4．573±0．015和1．562±0．029。体外TGF—B诱导FISCs分化,CK-7、CK-19mRNA在第12天达峰值,分别为15．454±2．152和10．675±1．822;两者蛋白水平于第14天达峰值,分别为3．4234±0．105和1．8924±0．081。在移植有FLSCs的肝切除小鼠体内可检测到表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的成熟肝细胞及胆管细胞。结论分离的绿色荧光蛋白转基因FLSCs能够稳定表达绿色荧光,具有显著的肝干细胞特征和向肝细胞和胆管细胞双向分化的潜能,且在体内研究中具有良好的示踪性。