不同浓度胰岛素对脐静脉内皮细胞形态和活性的影响

目的 观察不同浓度胰岛素对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)形态和细胞活性的影响,用以筛选内皮细胞胰岛素抵抗模型.方法 应用含不同浓度胰岛素(50,40,30,20,10,1,0.1,0.01U/L)的DMEM培养基与HUVEC共同培养6、12、2...     

Cyr61基因siRNA表达载体的构建及沉默作用研究

目的:构建Cyr61靶向siRNA重组表达载体,为探讨抑制Cyr61基因表达对机械通气所致肺损伤的研究奠定基础。方法:根据GenBank数据库提供的Cyr61基因核苷酸序列,选择设计3条能转录siRNA的DNA序列,命名Cyr61-1 siRNA,Cyr61-2 siRNA,Cyr61-3 siRNA,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照。据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil1.1载体,转化扩增后进行序列测定。4种重组表达载体转染肺癌A549细胞,逆转录RT-PCR和Western blot法分别在mRNA和蛋白水平检测Cyr61的表达。结果:经酶切鉴定和测序结果证实Cyr61靶向siRNA重组表达载体构建成功,它对大肠癌细胞Cyr61 mRNA和蛋白的表达抑制率分别为60.54%和52.97%。结论:Cyr61靶向siRNA重组表达载体构建成功并能显著抑制Cyr61基因的表达。     

不同剂量舒芬太尼用于全麻妇科手术后患者自控静脉镇痛的临床研究

目的探讨不同剂量舒芬太尼用于全麻妇科手术后患者自控静脉镇痛（patient-controlled intravenous analgesia,PCIA）的效果及其副作用,为舒芬太尼术后PCIA的个体化用药剂量提供依据。方法择期全身麻醉下行妇科手术患者48例,采用抽签分组法随机分为3组,每组16例：Sufl组、Suf2组和对照组。人选患者年龄18岁～65岁,美国麻醉医师协会（ASA）分级Ⅰ～Ⅱ级。对照组,首剂芬太尼2.5μg／kg,术后持续镇痛浓度为芬太尼0.2μg·kg-1·ml-1;Sufl组：首剂舒芬太尼0.25μg／kg,术后持续镇痛浓度为舒芬太尼0.02Pμg·kg-1·ml-1。;Suf2组,首剂舒芬太尼0.25μg／kg,术后持续镇痛浓度为舒芬太尼O.0225μg·kg-1·ml-1。镇痛泵参数设定：流速2ml／h,指令剂量0.5ml,锁定时间15min。比较3组术后1、2、4、8、12、24、48h视觉模拟评分（visual analogue scale,VAS）、镇静评分、生命体征和副作用发生情况。结果与对照组比较,Suf2组在12h内,静息VSA评分显著降低[术后12h为例,对照组（2.0＋0.6）分,Suf2组（0.9＋0.6）分,P〈0.05];同时在24h内,活动VAS评分差异也有统计学意义[术后24h为例,对照组（2.6＋0.7）分,Suf2组（2.0＋1.0）分,P〈0.05]。与Sufl组比较,Suf2组在不同时间点的静息VAS[术后48h为例,Sufl组（1.2±0.5）分,Suf2组（0.5±0.7）分,P〈0.05]和活动VAS[术后48h为例,Sufl组（2.1±0.6）分,Suf2组（1.8±0.8）分,P〈O.05]评分均显著下降。Sufl组和对照组在各时间点的VAS评分差异均无统计学意义（P〉0.05）。此外,3组患者术后镇静评分、生命体征、副作用发生率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论舒芬太尼0.0225μg·kg-1·ml-1。用于妇科手术后PCIA效果满意,副作用发生率较低。     

周期性机械牵张对人肺泡上皮细胞穿透素-3表达的影响

目的探讨人肺泡上皮细胞穿透素-3(PTX3)在呼吸机相关性肺损伤中的可能作用。方法应用FX4000T细胞应变加载系统,对体外培养的人肺泡上皮细胞A549周期性施加20%应变,频率为0.3Hz,加载时间为1、2、4、6h,然后采用实时定量RT-PCR检测肺泡上皮细胞PTX3表达的变化、Western blot检测分泌到培养液上清PTX3蛋白,同时检测细胞活性。结果(1)周期性牵张诱导肺泡上皮细胞表达PTX3;(2)牵张引起肺泡上皮细胞的凋亡;(3)PTX3的水平与肺泡上皮细胞的凋亡水平显著相关。结论本研究提示PTX3在呼吸机相关性肺损伤的发病机制中可能起重要的作用。     

多不饱和脂肪酸衍生物对急性肺损伤的保护作用研究进展

背景急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是目前严重威胁人类健康的疾病之一。有大量研究表明：源自多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids,PUFA）的一些特殊的促炎症消退介质（specialized pro-resolving mediators,SPM）对ALI具有一定的保护作用。目的分析总结SPM对ALI的保护作用和机制。内容此文描述SPM的分子生物学特征、炎症与ALI的关系,SPM的抗炎和促进炎症消退的保护作用及机制3个方面。趋向SPM对ALI具有一定的保护作用,这对于临床上治疗ALI提供了一种新的思路和方法。     

通气时间对呼吸机相关肺炎中β-防御素-2表达的影响

目的本研究观察大鼠肺组织β-防御素-2（BD-2）的基因和蛋白质在24h和48h两种机械通气时间的呼吸机相关肺炎（VAP）模型中表达水平。方法健康清洁级雄性成年SD大鼠随机分成24h通气组（n=29）和48h通气组（n=29）。两组大鼠分别在机械通气24h和48h后，从气管导管中注入1mol／L浓度的铜绿假单胞菌0．2mL复制VAP模型。采用RT—PCR和Western blot技术测定实验大鼠BD-2 mRNA和蛋白质表达的水平变化。结果48h组重度肺组织病理变化为66．7％，显著性高于24h组的28．6％（x^2=6．11，P=0．013）。48h组细菌血培养阳性率为62．5％，明显高于24h组的33．3％（x^2=4．09，P=0．043）。24h组5d存活率为60％，48h组为0（x^2=4．29，P=0．038）。两组接种细菌3h内BD-2 mRNA表达差异无显著性意义，24h组6h后表达上调水平显著高于48h组，并于12—24h时BD-2基因表达水平达峰值。结论随着机械通气时间延长，VAP大鼠中BD-2基因和蛋白质表达上调水平的明显下降，可能是更长时间机械通气易发生VAP的重要因素之一。     

β-防御素-2在机械通气相关性肺炎发病机制中的作用

目的观察铜绿假单胞菌（PA）机械通气相关性肺炎（VAP）前后肺组织β-防御素-2（BD-2）基因和蛋白质表达的变化，探讨肺组织的BD-2在机械通气相关性肺炎发病机制中的作用。方法90只健康清洁级雄性成年SD大鼠随机分成对照组、机械通气组（MV）和高盐抑制组（HS）。MV组中大鼠机械通气24h后气管内注入PA复制肺部感染模型。分别于接种细菌后8个时间点取3只大鼠处死，取肺组织进行病理学检测和测定大鼠肺组织中BD-2基因和蛋白质表达的变化。结果MV组中BD-2基因和蛋白质的表达水平的上调在3h后各时段均显著低于对照组（均P〈0．05）。MV组支气管肺泡灌洗液（BALF）、血细菌培养阳性率和重度肺部感染率均高于对照组（均P〈0．05）。HS组PA血细菌培养阳性率为76．2％，明显高于对照组和MV组（均P〈0．05）。对照组5d存活率为100％．MV组为50％．HS组为0。结论BD-2在机体呼吸系统中发挥重要抗感染作用．机械通气引起BD-2基因表达上调水平的下降可能与VAP的发生和发展有关。     

防御素与肺炎症性疾病

防御素是富含半胱氨酸，带正电的小分子抗微生物肽，具有广谱的抗微生物活性，包括细菌，真菌和一些包膜病毒，在肺的固有免疫中起重要作用。防御素也可以起到趋化因子的作用，这突出了防御素在宿主免疫和炎症反应中的重要作用。防御素或组成性表达或被细菌和炎症介质所诱导。防御素功能的改变可能会导致疾病。     

慢性神经病理性痛大鼠背根神经节P2Y2受体mRNA的表达

目的评价背根神经节（DRG）P2Y2受体mRNA的表达在大鼠慢性神经病理性痛中的作用。方法SPF级大鼠24只,体重150～200g,雌雄不拘,随机分为2组：假手术组（S组）和慢性神经痛组（N组）,每组12只。N组结扎左侧坐骨神经建立大鼠慢性压迫性损伤（CCI）模型,S组只暴露,不结扎左侧坐骨神经。2组分别于CCI前1d、CCI后1、4、7、10、14 d进行行为学观察,测定大鼠双后肢热痛阈和机械痛阈,并分别于CCI后7、14 d各取6只大鼠断颈处死,取双侧L（4-6）背根神经节,RT-PCR法测定P2Y2受体mRNA的表达。结果两组CCI后4 d热痛阈、机械痛阈明显降低（P〈0.05）,持续至CCI后14 d;N组左侧DRG P2Y2受体mRNA表达较右侧明显下调,CCI后14 d较CCI后7 d下调（P〈0.05）;与S组右侧比较,N组DRG P2Y2受体mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论背根神经节P2Y2受体mRNA的表达下调参与了大鼠慢性神经病理性痛的形成。     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂对大鼠呼吸机所致肺损伤的保护作用

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素(genistein)对大鼠呼吸机所致肺损伤(VILI)的保护作用。方法30只健康SD大鼠随机均分成A、B、C3组,A组为正常潮气量机械通气组:潮气量(VT)=8ml·kg-1;B组为大潮气量机械通气组:潮气量(VT)=40ml·kg-1;C组为大潮气量通气加Genistein处理组:潮气量(VT)=40ml·kg-1,C组大鼠实验前30min腹腔注射Genistein溶液(50mg·kg-1)。A、B、C3组机械通气频率(P)均为每分钟80次,通气时间均为2h。实验完毕收集肺组织和肺灌洗液标本。光镜观察肺病理改变,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡情况,同时测定肺灌洗液中总蛋白、肺湿/干比、白细胞计数、肿瘤坏死因子(TNF-α)等指标以及肺组织中中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)的水平。结果和A组相比,B组肺病理改变明显,肺细胞凋亡数量增加,肺湿/干比、总蛋白、白细胞计数、MPO、TNF-α等指标均增高(P<0.01);和B组比较,C组肺病理改变明显减轻,肺细胞凋亡数量减少,肺湿/干比、总蛋白、白细胞计数、MPO、TNF-α等指标均降低(P<0.05)。结论酪氨酸蛋白激酶抑制剂genistein对大鼠呼吸机所致的肺损伤具有较好的保护作用。