隐丹参酮对胰腺癌细胞生物学行为的影响及作用机制

背景与目的:胰腺癌是一种高度恶性的消化系统肿瘤,尽管目前针对胰腺癌的治疗方式在不断发展,患者预后仍然很差。隐丹参酮(CPT)是从植物丹参中提取的具有多种活性的单体,已被证实对宫颈癌、前列腺癌等有抗癌作用,但其对胰腺癌的作用尚不清楚,本研究通过体外实验探讨CPT对胰腺癌细胞生长和迁移的影响及相关机制,为相关的临床治疗药物研发提供理论和实验依据。方法:采用人胰腺癌BxPC-3细胞和SW1990细胞为研究对象,用3个浓度(10、20、40 μmol/L)的CPT处理该两种胰腺癌细胞不同时间(0、1、2、3 d)后,用CCK-8法检测CPT对细胞活力影响的浓度与时间效应;用以上3个浓度的CPT处理两种胰腺癌细胞24 h后,分别用克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验检测对细胞克隆形成能力、迁移能力、侵袭能力的变化;用20 μmol/L CPT处理BxPC-3和SW1990细胞1、2、3 d后,用Western blot检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)以及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白vimentin、E-cadherin与细胞周期相关蛋白CDK4、cyclin D1的表达。对照组细胞均只采用溶剂(DMSO)处理。结果:与各自对照组比较,CPT处理后的两种胰腺癌细胞的生长被明显抑制,且呈时间与浓度依赖性(均P0.05);划痕愈合程度、相对克隆形成率、侵袭细胞数均明显降低,且呈浓度依赖性(均P0.05);Akt、p-Akt、vimentin、E-cadherin、CDK4、cyclin D1蛋白的表达均明显下调,且呈时间依赖性(均P0.05)。结论:CPT能有效抑制胰腺癌细胞的生长和迁移,其作用机制可能与其下调Akt的表达,并进一步导致胰腺癌细胞生长周期阻滞及抑制EMT过程有关。     

芹菜素对H2O2诱导人肝细胞L02氧化损伤模型的影响

目的探索芹菜素对H_2O_2致人肝细胞L02损伤模型的保护作用。方法以H_2O_2诱导L02细胞建立氧化损伤模型,CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA法检测细胞活性氧的生成,试剂盒检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)活性,Hoechst染色观察细胞凋亡情况,试剂盒检测caspase-3的活性。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果芹菜素浓度为≥20μmol/L时对L02细胞的增殖有显著抑制作用(P值均001);与空白对照组L02细胞活力相比,500μmol/L及以上的H_2O_2浓度均可使细胞活力极显著降低(P值均0.001),500μmol/L为H_2O_2的建模浓度;模型组细胞活力与空白对照组相比差异显著(P0.01),与模型组相比,芹菜素5、10μmol/L组细胞存活率显著提高(P值均0. 01);空白对照组细胞状态较好,模型组细胞间收缩变圆,细胞破损变形严重,芹菜素5μmol/L组与模型组相比,明显得到改善,变圆破损细胞较少;空白对照组、模型组、芹菜素5μmol/L组3组间相对荧光强度比较差异有统计学意义(1. 00±026 vs 32.94±1. 29 vs 13. 49±1. 23, F=1.10,P0. 001),模型组相对荧光强度较空白对照组明显增强(P0. 001),芹菜素/L组与模型组比较,芹菜素可明显清除H_2O_2诱发的ROS(P0.001);模型组中LDH和MDA水平均明显升高,SOD水平明显降低,与正常对照组相比差异均有统计学意义(F值分别为3.21、2.03、3.32,P值均0. 05),芹菜素(5μmol/L)处理后,与模型组相比,LDH和MDA水平均明显降低,SOD水平明显升高(P值均0. 05);空白对照组、模型组、芹菜素5μmol/L组3组间细胞凋亡率比较差异有统计学意义(7. 54%±0. 52%vs 39. 77%±3. 44%vs 14. 40%±0. 79%,F=9.44,P 0. 01);模型组细胞凋亡率显著高于对照组(P 0. 01);给与芹菜素处理后,相比于模型组凋亡率明显降低(P0. 01);空白对照组、模型组、芹菜素5μmol/L组3组间caspase-3活性比较差异有统计学意义[(4. 38±0. 59)U/mg vs(16. 44±1. 13)U/mg vs(10. 60±1. 04)U/mg,F=1.17,P005],模型组细胞caspase-3活性与对照组相比明显增强(P 005),芹菜素处理后,相比于模型组caspase-3活性明显降低(P005)。结论芹菜素可能通过消除ROS的生成、降低caspase-3活性对H_2O_2诱导的L02细胞损伤产生保护作用。     

细胞外基质在肝细胞性肝癌发生发展过程中的作用

肝细胞性肝癌（HCC）是我国常见的恶性肿瘤性疾病。近年来微环境对癌组织的影响受到重视,其中细胞外基质（ECM）作为HCC组织的重要微环境成分,在肿瘤发生发展过程中扮演着重要的角色,涉及肿瘤的生长、凋亡、耐药、侵袭、转移等。纤连蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）、胶原蛋白（COL）以及细胞外基质的硬度在HCC的发生发展过程中所起到的特殊作用。正是由于ECM各蛋白成分在HCC中的特殊作用,若盲目降解或敲除ECM中任意蛋白成分,可能无法达到预期的治疗效果,反而加速HCC的进展。所以需要探索某种特定的方法用于靶向调节ECM中成分,精准控制ECM重塑,从而调控HCC的发生发展。HCC微环境是一个持续变化的动态环境,为了尽可能模拟HCC细胞所处微环境,运用多种ECM蛋白成分而非单一成分联合培养HCC细胞以探究ECM多成分对细胞的共同作用是可行的研究方向。     

藏红花醛对脂多糖诱导的脓毒症相关肝损伤小鼠模型的作用及其机制

目的 探讨藏红花醛对脂多糖（LPS）诱导的脓毒症相关肝损伤（SRLI）小鼠模型的保护作用及其机制。方法 采用简单随机分组法将32只实验用C57BL/6雄性小鼠分为对照组、单药组、模型组和治疗组,每组各8只。单药组和治疗组腹腔注射藏红花醛（60 mg/kg）预处理7天,模型组和治疗组腹腔注射LPS(10 mg/kg)诱导急性肝损伤。检测各组小鼠血清ALT、AST活性,HE染色观察肝组织切片标本,免疫组化分析信号通路下游蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)的表达差异,TUNEL法分析肝细胞凋亡情况,Western Blot法分析肝组织总蛋白[核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、HO-1]表达差异。采用藏红花醛（100μmol/L）预处理人类肝细胞系L02细胞,通过LPS 100 ng/mL诱导急性肝细胞损伤,DCFH-DA荧光标记氧自由基。结果 藏红花醛预处理后,治疗组小鼠ALT、AST明显低于模型组（P值均<0.01）,治疗组小鼠肝脏维持了较为完整的假小叶结构且坏死面积更小。治疗组小鼠经藏红花醛+LPS处理后肝组织Nrf2、HO-1表达水平相较于模型组明显升高（P值均<0.0...     

环状RNA作为脑肿瘤潜在生物学标志物的研究进展

摘 要：环状RNA（circular RNA，circRNA）是一类无游离5′端和3′端的共价闭合的非编码RNA，具有丰富性、稳定性、保守性和组织特异性等结构特点，circRNA与细胞增殖、凋亡、血管生成和转移等方面都有着密不可分的联系。脑肿瘤因为其独特的微环境造成了其发生发展机制的特殊性。研究circRNA与脑肿瘤发生发展的机制，必将促进对脑肿瘤诊断、治疗预后等多方面的发展。全文综述circRNA在常见脑肿瘤（胶质瘤、垂体瘤和髓母细胞瘤）中的表达情况及其靶向miRNA和后续信号通路，并概述其作用结果，总结circRNA作为多种脑肿瘤的潜在生物学标志物。     

CDCA5对肝癌患者预后的影响及机制研究

【摘要】 目的 探讨细胞分裂周期相关蛋白5（CDCA5）对肝癌患者临床预后的影响,并探讨其在肝癌发生、发展过程中的作用机制。 方法 收集2009年9月~2012年9月在南充市中心医院肝胆外科行根治性肝癌切除术的178例患者临床病理资料,免疫组化检测CDCA5在肝癌组织和正常肝脏组织中的表达,分析CDCA5与患者临床病理及预后的关系。构建质粒,敲低及过表达CDCA5。MTT法测定不同表达CDCA5对肝癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化。将普通HepG2细胞组,CDCA5低表达组的细胞分别注射于裸鼠成瘤,观察成瘤时间。第30天处死小鼠,观察瘤体状态。免疫组化检测CDCA5在裸鼠肿瘤中的表达。结果 CDCA5在肝癌组织中表达量较正常肝脏组织明显增高(P＜005)。CDCA5高表达患者肿瘤直径较大,微血管侵犯发生率高,且患者无瘤生存率及总生存率较CDCD5低表达患者差(P＜005)。CDCA5促进了肝癌细胞增殖,敲低CDCA5后,肝癌HepG2细胞生长阻滞在G2期。30天后,两组裸鼠瘤体重量比较差异有统计学意义（P＜005）。结论 CDCA5对肝癌患者的预后可能有一定预测作用;其能显著促进肝癌细胞的增殖能力,通过调控CDCA5对抑制肝癌细胞的生长有一定意义。     

乔松素对对乙酰氨基酚诱发的肝损伤小鼠模型的保护作用

目的探索乔松素(PIN)对对乙酰氨基酚(APAP)诱发肝损伤小鼠模型的保护作用。方法50只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白组、PIN(50 mg/kg)组、APAP(300 mg/kg)模型组、PIN(30 mg/kg)+APAP(300 mg/kg)组和PIN(50 mg/kg)+APAP(300 mg/kg)实验组,每组各10只。各组采取灌胃给药,空白对照组和模型组给予等量的生理盐水,PIN组及PIN+APAP组每日给药1次,连续给药7 d。末次给药2 h后,模型组和PIN+APAP组腹腔注射APAP 300 mg/kg 1次,空白组和PIN组腹腔注射等量生理盐水。收集血清,检测ALT、AST水平,肝组织匀浆检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH)生化指标,HE染色观察肝脏组织病理情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与空白组比校,APAP(300 mg/kg)模型组的ALT、AST水平显著升高(P<0.01),模型构建成功;PIN(30 mg/kg)+APAP(300 mg/kg)及PIN(50 mg/kg)+APAP(300 mg/kg)组的ALT、AST与APAP(300 mg/kg)模型组相比均显著降低(P值均<0.01)。与空白组比校,APAP(300 mg/kg)模型组小鼠肝脏中MDA的水平显著升高(P<0.01),且SOD活性及GSH水平显著降低(P<0.01);与APAP(300 mg/kg)模型组比较,PIN(30 mg/kg)+APAP(300 mg/kg)及PIN(50 mg/kg)+APAP(300 mg/kg)组的小鼠肝脏中MDA的水平显著降低(P值均<0.05),且SOD活性及GSH水平显著升高(P值均<0.05)。组织病理观察显示PIN可明显改善APAP对肝组织的损伤,使肝组织形态相对正常。结论PIN对APAP诱发的小鼠肝损伤具有明显的保护作用,其保护作用可能与抑制肝脏氧化应激相关。     

内质网应激在肝癌中的作用

内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)是一种极其重要的信号反应通路。内质网应激时,首先启动生存途径即未折叠蛋白反应(Unfolded protein response,UPR),而长时间的内质网应激将会启动细胞凋亡途径。目前越来越多的研究表明,肝癌与内质网应激密切相关,并且肝癌的肿瘤微环境可使内质网产生应激已得到证实。根据相关文献报道的内质网双重作用,内质网应激既可以诱导转化肝癌,又可以抑制肝癌增殖、转移等,故内质网应激为肝癌新的治疗方法提供可能。本文就以内质网应激与肝癌关系的研究进展进行综述。     

肿瘤微环境和肿瘤标志物研究中数字空间多组学技术应用的研究进展

肿瘤的发生及进展依赖于肿瘤细胞与肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）之间复杂的相互作用,而TME中显著差异表达的蛋白质、细胞因子等物质可能成为预测肿瘤进展的标志物。探索TME并寻找肿瘤标志物已成为目前肿瘤免疫治疗领域的研究热点之一。数字空间多组学（Digital Spatial Profiler,DSP）作为一项新型的、基于光学与探针的空间组学技术,在TME和肿瘤标志物等的研究中表现出显著优势。全文论述DSP技术在多种肿瘤研究中的应用,总结其在分析TME和肿瘤标志物中的作用。