实时荧光定量PCR检测RAGE mRNA方法的建立及初步应用

目的 建立实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)检测人晚期糖基化终末产物受体(RAGE)mRNA的方法并研究其在食管癌组织中的表达.方法 根据Genebank提供的序列在RAGE基因外显子5和6之间设计引物,应用SYBR Green Ⅰ荧光染料,建立检测RAGE mRNA的RTFQ-PCR方法,并对其线性、特异性、灵敏度及重复性进行评价;根据标准曲线计算出食管癌及配对远端正常组织中RAGE mRNA含量,并以RAGE mRNA和18S rRNA含量的比值作为评价RAGE mRNA表达水平指标.结果 线性范围为5.0×103～5.0×109copies/ml,相关系数为-0.98,批内变异系数(CV)为0.63%～8.71%,批间CV为1.52%～12.38%.食管癌及配对远端正常组织RAGE mRNA与18S rRNA浓度的对数比值(-x±s)分别为0.638±0.068和0.334±0.329(P＜0.005),提示食管癌组织RAGE表达上调.结论 RTFQ-PCR检测RAGE mRNA的方法具有灵敏、特异、重复性好等优点,RAGE mRNA表达水平与食管癌存在一定相关性.     

凝血指标检测与急性冠状动脉综合征患者Gensini及GRACE评分的关系研究

目的探讨急性冠状动脉综合征（ACS）患者血浆凝血指标（D-二聚体（D-D）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）及纤维蛋白原（FIB））含量变化及与Gensini和GRACE评分的关系。方法检测并比较55例ACS患者和34例健康对照者血浆D-D、PT、APTT及FIB含量。结果ACS组血浆凝血指标（D-D、PT、APTT及FIB）含量分别为0.16±0.19mg/L、11.9±1.91s、30.4±6.25s、2.41±0.96g/L,对照组含量分别为0.07±0.08mg/L、11.9±0.91s、27.5±3.36s、2.36±0.73g/L。D-D在ACS不稳定型心绞痛（UA）、非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）和ST段抬高型心肌梗死（STEMI）三个亚组中的含量分别为0.10±0.07、0.08±0.10、0.25±0.28mg/L;ROC曲线下面积D-D检测为0.64,Gensini评分检测为0.99,GRACE评分检测为1.00。D-D在GRACE评分低风险组、高风险组和极高风险组中的含量分别为0.13±0.18、0.18±0.25、0.18±0.14mg/L;D-D在Gensini评分中危组、高危组和极高危组中的含量分别为0.10±0.05、0.09±0.09、0.23±0.28mg/L,D-D含量与Gensini极高危组评分成正相关（r=0.911,P〈0.05）。结论ACS患者尤其STEMI患者四个凝血指标仅D-D显著升高;较Gensini和GRACE评分,D-D能粗略反映ACS患者冠状动脉严重程度,可指导临床治疗。     

14项临床化学检验指标分析前不确定度评定

目的以14项临床生化指标为例,探讨评定分析前不确定度的方法。方法招募25名志愿者,各采集左右手臂共7管血,按照设定的参照方法及常规检验所用方法处理标本血清,于同一批内将结果配对计算分析。结果 LDH对每个因素都最敏感,分析前相对不确定度为12.01%;其次为AST、Glu,大于6.00%;Urea、TC分别为1.05%、1.61%;ALT、ALP、GGT、Cr、UA、TG、HDL-C、LDL-C、CK为2.5%~5.0%。AST、ALP、Urea、Cr、TC、TG因采血手臂不同带来的不确定度大;ALT、LDH、GGT、Glu由凝血时间不同带来的不确定度较大;LDL-C受运输方式的影响较大;UA、HDL-C、CK受真空管类型不同影响较大。结论通过计算各分析前不确定度,说明采取相应对策从源头上减小不确定度值的必要性;其计算方式有望应用于其他指标与因素。     

不同精密度评价方法的比较及在临床血糖测定中的应用

目的：以临床血糖项目测定为例进行精密度评价,比较3种精密度评价方法的差异。方法选择2个具有医学决定水平的人混合血清作为实验标本,采用Advia2400全自动生化分析仪测定血糖浓度,分别根据方差分析、《用户对精密度和正确度性能的验证试验》（EP15-A2）和《定量测量方法的精密度性能评价》（EP5-A2）文件要求进行精密度评价实验。计算并比较3种精密度评价方法的变异系数（CV ）。结果选择低值和高值2个不同浓度的实验标本,按方差分析 CV为0．80％、0．73％,按照EP15-A2计算的 CV为0．81％、0．72％;按照EP5-A2计算的CV分别为1．25％、1．09％,均小于国家标准3．00％。EP5-A2方案计算的室内精密度与方差分析、EP15-A2方案的结果比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 EP5-A2方案计算的室内精密度大于方差分析和EP15-A2方案的结果,后两种方案在精密度的评价上无本质区别,实验室要进行更为严格的精密度评价需采用 EP5-A2方案。     

脑胶质瘤患者血清及脑脊液中游离DNA的检测

目的 检测不同级别脑胶质瘤患者血清及脑脊液中游离DNA的含量及完整性,探讨其对脑胶质瘤的诊断及预后判断的意义.方法 术前采集70例脑胶质瘤患者和22例健康对照的外周血;其中30例胶质瘤患者同时采集脑脊液.通过实时荧光定量聚合酶链反应( RT-qPCR)方法检测血清及脑脊液中游离DNA短串联重复序列(ALU)的长片段(247 bp)与短片段(115 bp)的含量以及DNA完整性.结果 血清中ALU-247 bp与115 bp含量以及游离DNA完整性在胶质瘤组与对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).脑脊液中游离DNA ALU-247 bp与115 bp含量均较非肿瘤对照组高,DNA完整性(ALU-247/ALU-115 bp)较对照组也显著增高.ROC曲线分析ALU-247 bp,ALU-115 bp含量与DNA完整性的AUC分别为0.775、0.875和0.912.结论 胶质瘤患者术前脑脊液中游离DNA ALU-247 bp、ALU-115 bp的含量以及DNA完整性对胶质瘤的术前诊断具有一定价值.     

环状RNA hsa＿circ＿0001479在胃癌中的表达及功能研究

目的：探讨hsa＿circ＿0001479在胃癌（gastric cancer,GC）组织中的表达情况及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：建立实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测hsa＿circ＿0001479表达量的方法并进行方法学性能评价;通过RT-qPCR检测76对胃癌组织和配对癌旁组织中hsa＿circ＿0001479的表达水平并分析其表达量与临床病理参数的关系;构建针对hsa＿circ＿0001479的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和过表达载体,转染至胃癌细胞株,通过CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期分布,划痕实验检测细胞横向迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果：RT-qPCR检测hsa＿circ＿0001479表达量的方法具有良好的精密度、正确度和线性;hsa＿circ＿0001479在胃癌组织中表达增高且表达水平与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和CA19-9水平有关;细胞功能实验显示,在胃癌细胞株中干扰hsa＿circ＿0001479的表达可抑制胃癌细胞的增...     

血循环核酸作为肿瘤诊断生物标志物的研究进展

循环核酸(circulating nucleic acids,CNAs)是一种存在于动植物和人体液中的细胞外游离状态核酸,包括循环DNA、循环RNA以及新发现的微小RNA(miRNA).血液不同于其他体液,分布于全身各处,因此,血CNAs具有良好的临床应用前景.由于生理状况、疾病种类和病程的不同,CNAs在血清和血浆中存在的种类和数量也会发生变化.本文中,我们主要介绍了血CNAs的发现过程、分子结构、生物学特性、检测方法以及与肿瘤发生、发展关系等方面的研究进展.一、肿瘤患者血CNAs的发现1948年,法国科学家首次报道,在人血浆中可分离得到游离形式的核酸.由于当时人们认为,核酸需在完整细胞内传递生物遗传信息,因此,这一发现并未引起广泛关注.数十年后,植物学家Anker和Stroun发现,植物冠瘿肿瘤的转移是通过游离核酸来完成的.随后,人们证实,肿瘤患者血液中存在游离形式的DNA,血液中循环DNA不仅发生基因突变,还包括了微卫星改变、倒位、缺失和甲基化等.至此,CNAs在肿瘤诊断方面的研究有了快速发展.     

构建临床实验室管理学课程内容体系的思考

随着科学技术的发展,对临床实验室管理的要求也在不断提高。临床实验室管理学课程是医学检验专业学生的主干课程,而课程内容研究作为贯彻和落实教育改革与发展的重要环节,受到国内外高等医学教育界的高度关注。构建合适的课程内容体系对提高教学质量、培养新型检验医学人才至关重要。该文主要介绍了临床实验室管理学和课程内容的定义及如何构建新型临床实验室管理学课程内容体系。     

利用实验室质控数据评定血常规项目测量不确定度研究

目的：探讨利用室内质量控制（internal quality control,IQC）和室间质量评价（external quality assessment,EQA）数据评定血常规项目测量不确定度。方法：收集南通大学附属医院检验科2014年～2016年累积30个月白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白浓度（HGB）和血小板计数（PLT）等4个项目IQC在控数据以及2015年卫生部（和江苏省）临检中心EQA回报结果,采用自上而下方法评定4个血常规项目的测量不确定度。结果：利用IQC数据结合国家EQA数据评定的相对合成标准不确定度（% uc）分别为2.62、2.34、1.96和4.59;利用IQC数据结合江苏省EQA数据评定的% uc分别为2.59、1.40、1.58和3.97,均小于按中华人民共和国卫生行业标准WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》设置的目标不确定度。结论：采用实验室的质控数据可较方便地反映XE-2100五分类全自动血细胞分析仪WBC、RBC、HGB和PLT等4个项目测量不确定度,具有一定临床应用价值。     

Bootstrap重抽样法在《临床实验室管理学》教学评价中的应用

该研究探讨了Bootstrap重抽样法在《临床实验室管理学》教学评价中的应用。采用MATLAB软件,运用Bootstrap重抽样法105次可获得可靠结果。6种题型中,简答题相对得分率最高,为82.87%;多项选择题相对得分率最低,为40.00%。所授的17个章节中,"床旁检测的质量管理"章节相对得分率最高,为97.00%;"检验前过程质量管理"章节相对得分率最低,为40.00%。Bootstrap法在不增加新样本的情况下,通过有放回的重抽样增加学生考试成绩数据,使已知样本更接近总体,可运用于《临床实验室管理学》的教学评价。