蛇床子素与金雀异黄酮对大鼠峰值骨量影响的比较研究

研究蛇床子素（Osthole,OST）与金雀异黄酮（Genistein,GEN）对大鼠峰值骨密度与骨质量的影响。方法：采用随机分组法将36只1月龄SD雌性大鼠（125±3）g分为3组：对照组（CON,等体积蒸馏水,n=12）,蛇床子素组（OST,9mg·kg^-1d^-1i．g．,n=12）,金雀异黄酮组（GEN,10mg·kg^-1d^-1i．g．;n=12）。每周监测体重,每月用双能x射线骨密度仪（DEXA）检测全身骨密度。3个月后处死所有动物,采用酶联免疫法测定血清骨钙素（Osteocalcin,0C）和抗酒石酸性磷酸酶5b（Tartaficacid phosphatase 5b,TRACP 5b）含量,用DEXA测定股骨骨密度,用μCT分析股骨组织微结构,树脂包埋不脱钙骨组织切片技术做胫骨骨形态分析,用万能材料试验机测定股骨生物力学,称量心、肝、胃、肾、肾上腺和子宫湿重,计算器官指数,并做常规病理学检测。结果：大鼠的体重、器官指数差异无统计学意义（P〉0．05）;病理学观察未见异常发生;第1、2个月全身骨密度无明显差异（P〉0．05）,第3个月后OST组全身骨密度显著高于CON组、GEN组,上述3组中股骨骨密度与全身骨密度的变化呈相同趋势（P〈0．05）。与对照组相比,OST组、GEN组血清OC水平升高,而与CON组、GEN组相比,0ST组的TRACP5b含量下降（P〈0．05）;OST组的骨体积百分率、骨小梁厚度和骨小梁数量均高于CON组,但骨小梁分离度和模型系数均显著低于CON组（P〈0．05）,OST组与GEN组的上述指标虽未出现统计学差异（P〉0．05）,但平均值OST组高于GEN组;OST组骨小梁厚度和骨小梁数量均高于CON组、GEN组,但骨小梁分离度低于CON组、GEN组;OST组股骨最大载荷、弹性模量和屈服强度均明显高于CON组（P〈0．05）,OST组与GEN组虽未出现统计学差异（P〉0．05）,但平均值OST组高于GEN组。结论：口服蛇床子素能有效提高大鼠峰值骨量,从而?     

不同强度正弦交变电磁场对大鼠骨密度及骨形态计量学的影响

目的 ：研究50 Hz不同强度正弦交变电磁场（sinusoidal electromagnetic fields,SEMFs）对SD大鼠骨密度和骨形态计量学的影响。方法：将30只雌性SD大鼠随机分为3组：A组（正常对照组）,B组（0.1 m T磁场组）和C组（0.6 m T磁场组）。除对照组外,分别给予各磁场组每日3 h的磁场干预。实验8周后处死大鼠,用双能X线骨密度仪检测各组大鼠全身、股骨及椎体骨密度,并对左侧胫骨及椎体L4分别进行骨组织静态和动态分析评价。结果：与A组相比,B组大鼠全身、股骨和椎体骨密度显著增加;股骨和椎体骨小梁面积百分数、骨小梁数量和骨小梁宽度显著增加,骨小梁分离度明显降低;观察双标记有明显变化。C组骨小梁数目与A组相比差异有统计学意义,其余指标差异均无统计学意义。结论：50 Hz 0.1 m T磁场强度的正弦交变电磁场,能够有效增加大鼠骨密度,改善大鼠的骨组织微结构,促进骨形成。     

淫羊藿苷对骨髓间充质成骨性活性强于金雀异黄酮

目的:比较研究金雀异黄酮与淫羊藿苷对体外培养原代大鼠骨髓间充质细胞(rats bone marrow stromal cell,rBMSC)成骨性分化的影响.方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质细胞,筛选最佳的药物浓度;采用终浓度为1×10-5mol·L-1的金雀异黄酮和淫羊藿苷对体外培养原代大鼠骨髓间充质细胞进行干预;在药物干预后的第3,6,9,12,15天后测定碱性磷酸酶活性(alkaline pbosphatase,ALP)和3,6,9,12,15 d测定钙含量;第12天进行钙化结节茜素红染色;在药物干预后第12,24,48,72,96 h Real-time RT-PCR检测OXS,Runx-2,骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP-2)和Collagen-Ⅰ mRNA的表达水平.结果:浓度为1 ×10-5 mol·L-1金雀异黄酮和淫羊藿苷可提高ALP活性最高,增加Ca含量,调节骨代谢活性Runx-2,OXS,BMP-2和Collagen-Ⅰ mRNA的表达水平,淫羊藿苷比金雀异黄酮的成骨性作用更强一些.结论:在促进体外培养骨髓间充质细胞成骨性分化作用方面淫羊藿苷较强于金雀异黄酮.     

脉冲电磁场对MC3T3-E1细胞增殖与分化的影响

目的研究不同强度50Hz脉冲电磁场(Pulse electromagnetic fields,PEMFs)对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖与分化的影响。方法 MC3T3-E1传代培养后分成七组,分别采用0.0 m T、0.6 m T、1.2 m T、1.8 m T、2.4 m T、3.0 m T和3.6 m T 50 Hz脉冲电磁场处理,90 min/d。MTT法检测细胞增殖情况,成骨性分化检测处理3 d、6 d、9 d、12 d后ALP活性和首次处理12 h后BMP-2、Runx-2、OPG基因表达情况。结果 6种强度的脉冲电磁场均促进细胞增殖,其中0.6 m T的促增殖效应最强(P<0.01)。在成骨性诱导培养条件下,细胞内ALP活性随电磁场处理时间的延长而逐渐增加,第9 d达到峰值,之后开始回落。0.6 m T、3.0 m T和3.6 m T均能提高ALP活性,其中0.6 m T始终处于最高水平(P<0.01)。三种基因的表达水平在首次处理12 h,在0.6 m T、1.2 m T、3 m T和3.6 m T组均显著提高,但仍然是0.6 m T的增强效应最为明显。结论 0.6 m T 50 Hz脉冲电磁场具有最佳的促进MC3T3-E1细胞增殖和成骨性分化活性,这可能为采用脉冲电磁场治疗骨质疏松症提供了理想的治疗参数。     

8-异戊烯基柑橘素和柑橘素对体外培养大鼠股骨组织代谢活性的影响

目的：比较研究8一异戊烯基柑橘素和柑橘素对体外培养大鼠股骨组织代谢活性的影响。方法：体外分离培养大鼠股骨组织,然后随机分为4组,其中3组分别给予雌二醇（终浓度为1×10^-8mol·L^-1）、8-异戊烯基柑橘素（终浓度为1×10^-8mol·L^-1）和柑橘素（终浓度为1×10^-5mol·L^-1）,另外1组加生理盐水作为对照。分别在培养的第3、6、9、12、15和18d测定大鼠股骨组织中碱性磷酸酶活性和钙含量,并采用RT—PCR检测骨保护素、I-型胶原、Runx-2和骨形态发生蛋白基因的mRNA表达水平。结果：8-异戊烯基柑橘素、柑橘素和雌二醇均可提高股骨组织中碱性磷酸酶的活性,增加钙含量,并上调opg、bmp-2、collagen-1,和runx-2mRNA的表达水平;8-异戊烯基柑橘素活性强于柑橘素。结论：8-异戊烯基柑橘素和柑橘素均能改善体外培养大鼠股骨组织的代谢活性。     

8-异戊烯基柑橘素与柑桔素对体外培养破骨细胞活性影响的比较研究

目的: 研究8-异戊烯基柑橘素(8-prenylnaringenin, PNG)和柑桔素(naringenin, NG)影响体外培养破骨细胞活性和凋亡的差异,探讨8-异戊烯基团的生理活性. 方法: 从青紫兰乳兔四肢长骨中分离出破骨细胞,培养于含10%FBS的α-MEM培养液中,分别加入浓度为1×10^-5 mol·L^-1的PNG和NG.药物干预4 d后进行TRAP染色和TRAP酶活性测定,7 d后进行甲苯胺蓝染色.于加药后48 h内多个时间点进行Annexin V-FITC染色,观察破骨细胞凋亡情况,并提取总RNA,用Real-time RT-PCR法检测TRAP及Cathepsin K(CTSK)的基因表达情况. 结果: 与对照组相比,PNG和NG组的TRAP阳性细胞即破骨细胞数均显著减少,TRAP酶活性显著降低,形成骨吸收陷窝的数量和面积明显减少,TRAP和CTSK的基因表达水平明显降低.PNG组与NG组相比,以上所有指标均是前者显著低于后者.此外,PNG组的破骨细胞凋亡高峰于加药后12 h到达,而NG组是24 h后到达,且前者的凋亡总数显著高于后者. 结论: PNG抑制破骨细胞骨吸收和诱导破骨细胞凋亡的活性明显高于NG.由于两者分子结构的唯一差别在于8-异戊烯基团,因此,8-异戊烯基团可提高黄酮母核的抗骨吸收活性.     

口服蛇床子素提高大鼠峰值骨量的研究

目的 研究口服蛇床子素是否能提高大鼠峰值骨量,从而预防骨质疏松症。方法 1月龄健康SD♀大鼠随机分为2组,每组12只。给药组每日灌服10mg·kg1蛇床子素,对照组灌服等体积蒸馏水。每周监测体质量,每月检测1次全身骨密度。3个月后处死所有动物,取血测血清骨钙素（OC）和抗酒石酸性磷酸酶5b（TRACP5b）含量,取双侧股骨和胫骨分别进行骨密度检测、分析,骨形态计量分析和生物力学评价,剥离心、肝、胃、肾、肾上腺和子宫后称重,计算器官指数,并做常规病理学检测。结果 2组大鼠的体质量始终无显著性差异（P〉0.05）;各器官指数均无明显差异（P〉0.05）,病理学观察未见异常发生;第1、2月的全身骨密度无明显差别（P〉0.05）,但3个月后给药组显著高于对照组,股骨骨密度呈相同趋势（P〈0.05）;给药组的血清OC水平升高,而TRACP5b含量下降（P〈0.05）;μCT检测结果是：给药组的骨体积百分率、骨小梁厚度和骨小梁数量均高于对照组,但骨小梁分离度和模型系数均显著低于对照组（P〈0.05）;股骨最大载荷（P〈0.01）、屈服强度（P〈0.01）和弹性模量（P〈0.05）均为给药组明显高于对照组。结论 口服蛇床子素可抑制实验大鼠体内骨吸收水平并增强骨形成,提高大鼠峰值骨量,可预防各种原因引起的骨质疏松及骨质疏松性骨折。     

淫羊藿苷抑制体外培养的大鼠股骨组织骨吸收活性

目的： 研究淫羊藿苷对体外培养大鼠股骨组织（骨干和骨骺端）吸收活性的影响。方法： 体外分离培养大鼠股骨组织的骨干和骨骺端,48 h后采用终浓度为1×10^-5 mol·L^-1的淫羊藿苷对体外培养骨干和骨骺端进行处理。测定抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase,StrACP）活性;测定培养基中葡萄糖（glucose,Glu）和乳酸（lactic acid,Lac）;Real-Time RT-PCR检测抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase,StrACP）、集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor,MCSF）,组织激酶K（cathepsin K,CTSK）mRNA表达水平。结果： 1×10^-5 mol·L^-1淫羊藿苷可抑制StrACP活性,增加培养基中乳酸含量和减少培养基中葡萄糖含量,抑制StrACP,MCSF,CTSK mRNA的表达水平。结论： 淫羊藿苷抑制体外培养大鼠股骨组织的骨骺端和骨干吸收活性。     

淫羊藿苷对rBMSCs成骨和成脂分化的影响

目的:研究淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)成骨和成脂方向分化的影响。方法:在37℃5%CO2和饱和湿度的条件下贴壁筛选法体外培养rBMSCs。采用1×10-5mol.L-1的淫羊藿苷干预rBMSCs的成骨性分化,第3,6,9,12天进行碱性磷酸酶(ALP)活性测定,第15天进行钙化结节染色,第12,24,48,72 h提取总RNA,采用实时聚合酶链反应(Real time PCR)方法分析检测骨成型蛋白2(BMP-2)和骨特异性转录因子(Runx-2)mRNA表达水平。采用1×10-5mol.L-1的淫羊藿苷干预rBMSCs的成脂性分化,第5,10,15,20天进行甘油三酯含量的测定,第21天进行油红O染色,于12,24,48,72 h提取总RNA,采用Real Time PCR方法分析检测PPARγ和C/EBPα的mRNA表达水平。结果:淫羊藿苷显著提高了细胞中ALP的活性,增加了钙化结节数,并且升高了成骨性相关因子BMP-2和Runx-2的基因表达量。淫羊藿苷降低了细胞中甘油三酯的含量,减少了脂滴的形成,并且减弱了成脂转录因子过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和增强子结合蛋白(C/EBPα)的基因表达量。结论:淫羊藿苷对rBMSCs分化的调节有双向性,即它在促进rBMSCs成骨性分化的同时又抑制rBMSCs成脂分化。