枯否细胞通过组织因子对大鼠急性胰腺炎凝血系统变化的影响

目的:观察大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)组织因子(tissue factor,TF)及凝血系统的变化,探讨枯否细胞(kupffer cells,KCs)通过组织因子对大鼠AP凝血系统的作用。方法:108只SD大鼠完全随机分为假手术(sham operation,SO)组、轻症胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)组、重症胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)组、SO+氯化钆(Gd Cl3)组、MAP+Gd Cl3组、SAP+Gd Cl3组。Gd Cl3预处理组在诱发AP模型前24 h予尾静脉注射Gd Cl3(10 mg/kg,0.1 ml),分别用1.5%和5%的牛黄胆酸钠胰胆管逆行注射诱导MAP和SAP模型。建模后或假手术组分别于术后6、12、24 h处死大鼠,检测其血清中淀粉酶及凝血项的变化;ELISA法检测血清中TF的含量;分离并培养KCs,采用Western blot法检测其TF的蛋白含量;免疫组化检测肝脏中TF蛋白的表达;HE染色检测胰腺组织病理损伤情况。结果:MAP和SAP组大鼠血清中淀粉酶含量明显高于SO组(P<0.01),与MAP+Gd Cl3组、SAP+Gd Cl3组各相应时间点比较无明显差异。同时间点MAP组和SAP组较SO组血清中TF含量明显升高,MAP+Gd Cl3组和SAP+Gd Cl3组较MAP组和SAP组明显降低(P<0.05)。MAP和SAP组大鼠肝脏中TF蛋白表达较SO组表达明显增加。MAP+Gd Cl3和SAP+Gd Cl3组KCs中TF蛋白含量较MAP组和SAP组明显降低(P<0.05)。SAP组较MAP和SO组大鼠血清凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、纤维蛋白原浓度(fibrinogen,FIB)明显升高,SAP+Gd Cl3组较SAP明显降低(P<0.05)。大鼠胰腺病理切片显示,MAP组胰腺间质水肿,SAP组胰腺呈凝固性坏死,伴有大量炎症细胞浸润,MAP+Gd Cl3和SAP+Gd Cl3组分别较MAP和SAP组病理损伤明显减轻。结论:AP时KCs中TF表达明显增加,并能导致凝血象的改变,抑制KCs功能可有效降低AP时TF的表达,减少凝血象的改变,从一定程度上可降低AP的发生和发展。     

125I放射性粒子植入联合CIK细胞对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的：观察125I放射性粒子组织间植入联合细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制效应。方法：取健康人外周血单个核细胞,加入不同的细胞因子促进CIK细胞成熟,流式细胞仪检测CIK细胞表型,CD3+CD56+双阳性细胞达20%以上为达标;用人肝癌细胞株SMMC-7721建立裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为125I放射性粒子组（A组）、CIK细胞组（B组）、125I粒子+CIK细胞组（C组）,空白对照组（D组）,分别加处理因素,每4 d测量各组移植瘤体积,观察它们对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。HE染色检测各组移植瘤病理变化,免疫组织化学技术检测各组Ki-67蛋白表达,TUNEL试剂盒检测各组移植瘤原位凋亡。结果：125I粒子放射性粒子植入联合CIK细胞静脉输入可明显抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,C组瘤体积为（0.42±0.17） cm3,显著小于A组（1.23±0.83） cm3、B组（3.77±1.42） cm3和D组（6.62±0.53） cm3,各组瘤体积有显著性差异（F=155.706,P<0.001）;C组抑瘤率为93.71%,显著高于A组（81.33%）和B组（43.06%）。免疫组化染色发现各组移植瘤Ki-67蛋白表达的平均吸光度值分别为：C组（0.481±0.063）、A组（0.592±0.104）、B组（0.669±0.120）、D组（0.797±0.113）,差异有统计学意义（F=24.334,P<0.001）。TUNEL法发现：C组凋亡的平均光吸光度值（0.859±0.067）,显著高于A组（0.756±0.055）和B组（0.517±0.051）,差异有显著统计学意义（F=318.373,P<0.001）,联合治疗明显抑制细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。结论：125I放射性粒子永久植入联合CIK细胞免疫治疗在体内可显著抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,抑制癌细胞增殖,诱导其凋亡,其疗效优于单一治疗方式,局部内放疗联合细胞免疫治疗可能有协同增效作用,有可能成为肝癌综合治疗的方法之一。