FANCF-shRNA质粒构建及其对卵巢癌细胞OVCAR3沉默效应的观察

目的:构建针对人FANCF基因的特异性shRNA真核表达载体,体外观察siRNA对卵巢癌OVCAR3细胞系FANCF基因的沉默效应。方法:采用基因克隆技术,将设计合成的能表达短发夹RNA的寡核苷酸序列插入真核表达质粒载体pSilencerTM4.1-CMV-neo,构建能表达FANCF-shRNA的真核表达载体;转染人卵巢癌OVCAR3细胞,提取总RNA和蛋白,RT-PCR验证mRNA表达的变化,蛋白质印迹法验证蛋白表达的变化。结果:质粒酶切和测序证实成功构建了FANCF-shRNA的真核表达载体。与野生型OVCAR3相比,脂质体法转染卵巢癌OVCAR3细胞后,FANCFmRNA 24、48和72 h的表达水平与阴性控制组比较均下调,抑制率分别为(23.91±6.58)%(、51.23±5.86)%和(47.42±7.52)%;FANCF蛋白在244、8和72 h的表达水平与阴性控制组比较亦下调,抑制率分别为(16.28±5.46)%(、24.42±6.85)%和(36.05±8.26)%。证实FANCF-shRNA具有沉默OVCAR3细胞FANCF基因表达的效应。结论:siRNA-FANCF干扰可引起卵巢癌OVCAR3细胞系FANCF基因沉默,可能为卵巢肿瘤基础和临床研究提供一种有效的方法。     

药学专业创新实践能力人才培养模式探索

如何培养适应我国医药业发展的临床药学专业创新人才,现已成为高校在专业建设、培养模式、课程体系及实践体系改革中的重点问题。本文通过对国内外创新人才培养现状的分析,结合多年来教学改革及实践探索,提出了对药学专业课程体系进行整体优化,增加实践教学的比例及形式种类,丰富考核方式及多角度提升教师的专业知识水平和实践指导能力等改革措施。从而提高学生自主学习和创新能力,培养符合社会发展需求的医药兼修的药学专业创新型人才。     

FANCF基因沉默对人乳腺癌细胞生物学特性的影响

目的研究FANCF基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞生物学特性的影响,并检测相关指标的变化,探讨FANCF基因是否参与乳腺癌的发生、发展及耐药性的形成。方法构建FANCF-shRNA质粒,转染FANCF-shRNA使乳腺癌MCF-7细胞FANCF基因沉默;MTT法检测FANCF基因沉默对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞仪PI单染法及AnnexinV-FITC/PI双染法检测FANCF基因沉默对MCF-7细胞周期及凋亡的影响;RT-PCR检测FANCF基因沉默前后耐药相关基因mRNA表达水平的变化。结果成功构建FANCF-shRNA质粒,RT-PCR验证转染FANCF-shRNA后48h出现FANCF基因沉默;与阴性对照组相比,FANCF基因沉默后,MCF-7细胞增殖明显受到抑制,转染FANCF-shRNA后48h和72h的抑制率分别为12.65%±1.24%和29.64%±0.87%(P<0.05);S期MCF-7细胞比率增加(33.38%±0.68%,P<0.05),细胞周期阻滞在S期;转染FANCF-shRNA后MCF-7细胞凋亡率明显增加,转染后48h和72h的凋亡率分别为28.95%±1.81%和49.00%±2.32%(P<0.05);P-gp、BCRPmRNA表达水平降低,MRP、LRPmRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论FANCF基因沉默可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,促进细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于S期;并可抑制BCRP等耐药相关基因的mRNA表达,参与乳腺癌细胞耐药性的调控。     

FANCF-shRNA 表达质粒的构建及MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型的建立

 目的构建针对人FANCF基因的shRNA 表达质粒（ FANCF-shRNA）,转染FANCF-shRNA 使人乳腺癌MCF-7 细胞
FANCF基因沉默,从而建立MCF-7--RNAi瞬时转染细胞模型。方法实验分两部分： FANCF-shRNA 表达质粒的构建：
根据相关文献报道,使用Ambion 公司的在线设计软件,设计并合成能够编码针对FANCF基因的小发夹RNA（ FANCF-shRNA）
的DNA 模板,将其插入到p SliencerTM 4.1-CMV neo 表达质粒中,形成pSliencerTM 4.1-CMV-FANCF-shRNA 重组质粒;将该重组
质粒转化到感受态细胞JM109 中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增;通过PCR 及FANCF基因
测序方法筛选出插入正确的FANCF-shRNA 表达质粒;MCF-7--RNAi 瞬时转染细胞模型的建立：碱裂解法提取-
shRNA 表达质粒,通过脂质体介导将该质粒转染入人乳腺癌MCF-7 细胞中,RT-PCR 法检测FANCF基因mRNA 表达水平,确
认FANCF基因沉默。结果含有重组质粒的阳性克隆菌液PCR 扩增片段约为250 bp,并且其FANCF基因测序结果显示插入片段碱
基排列顺序正确,没有突变,说明FANCF-shRNA 表达质粒构建成功;与阴性对照组相比,转染FANCF-shRNA 质粒后第2 天、
第3 天、第5 天和第7 天, FANCF基因mRNA 表达水平均明显减低,表达抑制率分别为（36.51±6.84）%、（37.03±6.61）%、
（53.03±9.33）%和（39.51±10.13）%（ 约0.05）,说明FANCF基因沉默,MCF-7--RNAi 瞬时转染成功建立。结论成功构
建了FANCF-shRNA 表达质粒并建立MCF-7--RNAi 细胞模型,为研究FANCF基因在乳腺癌发生发展及耐药产生与调控
中的作用奠定实验基础。     

HFI对卵巢癌裸鼠移植瘤的疗效

目的研究HFI对卵巢癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,当瘤体积增长到100～200mm3时,随机分成4组(n=10),然后分别给予不同浓度(0.5mg·kg-1,0.25mg·kg-1)的HFI,裸鼠移植瘤体积及裸鼠体重每隔一天监测一次。结果各组的裸鼠体重没有显著性差异(P>0.05)。HFI(0.5mg·kg-1)剂量组和(mg.kg-1)剂量组的肿瘤体积增长速度显著低于阴性对照组(P<0.05)。移植瘤体积及瘤体重量在HFI(0.5mg·kg-1)剂量组和(0.25mg·kg-1)剂量组分别为[(911±286.631)mm3,(0.495±0.115)g]和[(1291.545±827.216)mm3,(0.542±0.237)g]显著低于阴性对照组[(1410.965±341.340)mm3,(0.714±0.124)g(P<0.05)]。HFI(0.5mg·kg-1)剂量组和(0.25mg·kg-1)剂量组的移植瘤瘤体抑瘤率分别为40.04%,16.07%,显著高于阴性对照组(0%)。HFI(0.5mg·kg-1)剂量组的裸鼠移植瘤体积与裸鼠体重之比的增长速度明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论HFI能够显著抑制裸鼠移植瘤的生长。     

乳腺癌实验动物模型的制备与应用

乳腺癌实验动物模型在研究人类乳腺癌的生物学行为及治疗等方面起着非常重要的作用。根据制备方法及研究目的的不同,乳腺癌实验动物模型可分为自发性、诱发性、移植性、转基因性及乳腺癌骨转移等动物模型,每种动物模型都有各自的特点和应用条件。