microRNAs调控自噬研究进展

microRNAs是真核生物中内源性表达的非编码RNA，长约18~25个核苷酸。成熟的microRNAs通过碱基互补配对与靶基因3'UTR区域结合降解目标mRNA或抑制其翻译来调控基因的表达水平，是一种对基因表达的转录后调控方式。研究表明，microRNAs在细胞的增殖、分化及死亡等生理病理过程中均具有调控作用，本文将对其在Ⅱ型程序性细胞死亡即自噬过程中的作用进行综述。      

ERα／β蛋白表达与基因启动子甲基化在中国女性散发性乳腺癌中的相关性研究

目的：探讨雌激素受体α（Estrogen Receptorα,ERα）、雌激素受体β（EstrogenReceptorβ,ERβ）基因启动子区甲基化与ERα、ERβ蛋白失表达关系。方法：甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR,MSP）法检测138例散发性乳腺癌和14例乳腺纤维腺瘤组织中ERα基因启动子区四个CpG岛密集区域甲基化及ERβ启动子区甲基化状态,免疫组织化学方法检测ERα、ERβ蛋白的表达。结果：纤维腺瘤组织中,ERα、ERβ甲基化发生率分别为28．6％（3／14）、14．3％（2／14）：乳腺癌组织ERα、ERβ总甲基化发生率分别为60．1％（83／138）、53．6％（74／138）,ERQ启动子区ER1、ER2、ER3、ER4四个检测区域的甲基化发生率分别为34．896、35．5％、39．1％、36．996,ER1 ER4各检测区域间甲基化率未见显著性差别;乳腺癌组织ERα、ERβ甲基化发生率均显著高于纤维腺瘤组织（60．1％vs．28.6％,）（2=5．117,P=0．023;53．6％vs．14．3％,X2=11．418,P=-0．004）;分析乳腺癌中ERQ基因启动子甲基化与ERa表达相关性发现ERα阳性的乳腺癌组织中ERα基因启动子甲基化发生率为37．7％（26／69）,而在ERα阴性组织总甲基化发生率82．6％（57／69）。进一步针对四个CpG岛密集区域异常甲基化检测发生率,发现在职α阳性的乳腺癌组织中职α基因启动子甲基化发生率分别为14．5％、18．896、7．296、17．4％,在ERα阴性的乳腺癌组织中ERα基因启动子甲基化发生率明显升高,分别为55．1％、52．2％、58％、56．5％,以ERα表达水平与甲基化检出率做Spearman相关性分析,二者呈显著负相关（r=-0．469,P〈0．0001）;分析乳腺癌中ERβ基因启动子甲基化与ERβ蛋白表达的相关性发现ERβ阳性的乳腺癌组织中ERβ基因启动子甲基化发生率为35．4％（29／82）,而在ERβ阴性组织总甲基化发生率80．4％（45／56）。以ERβ表达水平与甲基化检出率做Spearman相关性分析,二者呈显著负相关（r=-0．743,P〈0．0001）。结论：中国女性散发性乳腺癌存在较高频率的ERα、ERβ基因启动子异常甲基化;乳腺癌组织中ERα、ERβ失表达与其基因启动子异常甲基化有关。     

大肠癌组织DCC基因启动子甲基化及表达水平相关性研究

目的:探讨结直肠癌缺失基因 (DCC)在大肠癌组织中的表达特征及其与启动子甲基化的相关性.方法:分别采用免疫组织化学和甲基化特异性PCR (MSP)方法检测71例大肠癌及其相应癌旁组织中DCC蛋白的表达情况及DCC基因启动子甲基化状态.结果:大肠癌组织中DCC蛋白表达水平 (35/71, 49.3%) 显著低于癌旁正常组织 (34/39, 87.2%, P<0.001),且与临床Duke分期相关,P=0.023;大肠癌组织中DCC基因启动子甲基化发生率 (54/71, 76.1%)高于癌旁正常组织 (14/39, 35.9%, P<0.001)和癌旁炎性组织 (10/22, 45.5%, P=0.007),且直肠癌患者DCC基因启动子甲基化发生率 (28/31, 90.3%)高于结肠癌患者 (27/40, 67.5%, P=0.022);大肠癌组织中DCC蛋白失表达组甲基化发生率 (34/36, 94.4%)显著高于DCC蛋白表达组 (20/35, 57.1%, P<0.001).结论:DCC基因启动子甲基化可能是大肠癌中DCC失表达的主要机制之一.     

MMP11在浆液性卵巢癌中的表达、临床意义及其表位的预测

目的 检测MMP11在正常卵巢组织与浆液性卵巢癌组织中的表达及临床意义,筛选用于设计抗肿瘤多肽疫苗的候选表位.方法 免疫组织化学和GEPIA平台分析MMP11蛋白及mRNA在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达,探讨其与浆液性卵巢癌患者的临床病理参数的关系;Kaplan Meier plotter分析MMP11 mRNA表达与患者预后的相关性;基因富集分析预测MMP11的功能;IEDB数据库及MOE分子模拟软件筛选潜在的MMP11的HLA-A*0201限制性表位.结果 MMP11 mRNA与蛋白在浆液性卵巢癌组织中表达水平显著高于正常组织(P＜0.05)且与肿瘤分期、大小及淋巴结浸润相关;MMP11 mRNA表达水平高的患者总体生存期和无病生存期较短(P＜0.05);MMP11主要富集于肿瘤相关通路与T细胞免疫功能相关基因子集;候选表位RV和LL具有与HLA-A*0201分子结合的潜力.结论 MMP11在浆液性卵巢癌的发生和发展中发挥重要作用,是一个潜在的浆液性卵巢癌的生物标志物和免疫治疗靶点.     

FANCF-shRNA质粒构建及其对卵巢癌细胞OVCAR3沉默效应的观察

目的:构建针对人FANCF基因的特异性shRNA真核表达载体,体外观察siRNA对卵巢癌OVCAR3细胞系FANCF基因的沉默效应。方法:采用基因克隆技术,将设计合成的能表达短发夹RNA的寡核苷酸序列插入真核表达质粒载体pSilencerTM4.1-CMV-neo,构建能表达FANCF-shRNA的真核表达载体;转染人卵巢癌OVCAR3细胞,提取总RNA和蛋白,RT-PCR验证mRNA表达的变化,蛋白质印迹法验证蛋白表达的变化。结果:质粒酶切和测序证实成功构建了FANCF-shRNA的真核表达载体。与野生型OVCAR3相比,脂质体法转染卵巢癌OVCAR3细胞后,FANCFmRNA 24、48和72 h的表达水平与阴性控制组比较均下调,抑制率分别为(23.91±6.58)%(、51.23±5.86)%和(47.42±7.52)%;FANCF蛋白在244、8和72 h的表达水平与阴性控制组比较亦下调,抑制率分别为(16.28±5.46)%(、24.42±6.85)%和(36.05±8.26)%。证实FANCF-shRNA具有沉默OVCAR3细胞FANCF基因表达的效应。结论:siRNA-FANCF干扰可引起卵巢癌OVCAR3细胞系FANCF基因沉默,可能为卵巢肿瘤基础和临床研究提供一种有效的方法。     

TOPⅡ表达与乳腺癌新辅助化疗疗效的关系分析

 目的探讨乳腺癌新辅助化疗方案疗效及与化疗前后TOPⅡ表达的关系。方法采用免疫组化方法检测乳腺癌患者
（73 例）新辅助化疗前后乳腺癌组织中TOPⅡ的表达,了解其与化疗方案及疗效的关系。结果TOPⅡ的表达与疗效相关（ P=
0.015）,TOPⅡ阳性表达患者对蒽环类药物敏感（P=0.005）,多西他赛类药物疗效与TOPⅡ表达无相关性（ P= 0.495）。化疗前后
TOPⅡ表达差异具有统计学意义（ P= 0.027）,阳转阴者中获得pCR 为35.3%,阴转阳或无变化者获得pCR为9.1%,两者比较差
异具有统计学意义（ P= 0.017）。结论TOPⅡ阳性表达者对蒽环类化疗方案敏感,TOPⅡ可能成为预测疗效的指标,化疗后
TOPⅡ表达由阳转阴者获得较好的病理缓解,TOPⅡ可能成为指导术后化疗方案选择的指标之一。       

8－甲氧基补骨脂素对兔肺主动脉收缩的影响

用家兔离体肺主动脉环标本观察８－甲氧基补骨脂素（８－ＭＯＰ）对去甲肾上腺素、氯化钾及新福林收缩的影响。结果发现８－ＭＯＰ有舒张肺动脉，抑制肺动脉收缩的作用，抑制去甲肾上腺素和新福林收缩的作用较抑制氯化钾收缩的作用强，８－ＭＯＰ使去甲肾上腺素的浓度反应曲线呈浓度依赖性右移。ｐＡ＝５．１９±０．０６。     

丙泊酚抑制去甲肾上腺素诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度升高作用的机理

用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚(30-300 μmol·L^-1)影响大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内游离钙离子浓度(［Ca²⁺］_i)与肌醇-1,4,5-三磷酸(IP₃)合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理.结果表明,与丙泊酚共同培养72 h,对PASMC ［Ca²⁺］_i 基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素(NE 3 μmol·L^-1)引起的［Ca²⁺］_i升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米(30 μmol·L^-1)时,丙泊酚抑制NE升高［Ca²⁺］_i作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制NE促进 IP₃合成作用. 结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制IP₃介导的细胞内钙释放密切相关.     

丙泊酚抑制去甲肾上腺素诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度升高作用的机理

用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚（３０－３００μｍｏｌ·Ｌ－１）影响大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）与肌醇－１,４,５－三磷酸（ＩＰ３）合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理．结果表明,与丙泊酚共同培养７２ｈ,对ＰＡＳＭＣ［Ｃａ２＋］ｉ基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素（ＮＥ３μｍｏｌ·Ｌ－１）引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）时,丙泊酚抑制ＮＥ升高［Ｃａ２＋］ｉ作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制ＮＥ促进ＩＰ３合成作用．结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制ＩＰ３介导的细胞内钙释放密切相关．