人子宫内膜植入兔眼前房模型的研究

本实验成功地将人子宫内膜植入到１５只去卵巢新西兰雌兔的眼前房，并给每只兔外源补充雌二醇（Ｅ２）１００μｇ／ｄ和孕酮（Ｐ）８ｍｇ／ｄ。在内膜植入期间每只兔皮下注射总量为９ｍｇ的霉酚酸（ｍｙ－ｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃａｃｉｄ）以防免疫排斥反应。在眼前房的人子宫内膜存活了２８．４４±８．６５天，兔血清Ｅ２和Ｐ的平均值分别为１６１．７１±１５．１３和３８．８８±７．４５ｐｍｏｌ／Ｌ。前房液中Ｅ２和Ｐ浓度在植入人子宫内膜前后分别为２４．８０±１６．５３和１７０９．２５±４７５．１０ｐｍｏｌ／Ｌ，２．００±０．５３和１２．２２±３．８１ｎｍｏｌ／Ｌ。树脂切片验证人子宫内膜植入兔眼前房第５天就能与虹膜附贴并有血管发生。来自巩膜的血管分布在子宫内膜周围。扫描电镜观察人子宫内膜分化成分泌细胞和纤毛细胞。植入人子宫内膜后，前房液的蛋白浓度高于植入前。可以证明该模型可用来研究人子宫内膜对药物的反应和通过对前房液的测量研究子宫内膜的分泌功能。     

Expression of 5α-Reductase Type 2 Gene in Human Testis, Epididymis and Vas Deferens

Objectives To study the expression pattern of 5α-reductase type 2 gene in human male reproductive organsMethods The expression level of 5α-reductase type 2 gene inhuman testis, epididymis and vas deferens tissues was determined by in situ hybridization using Digoxin labeled 5α-reductase type 2 cRNA probe.Results The brown granules of hybridizing signals distributed in the cytoplasm of Sertoli and Leydig cells of the testis, the principle cells of epididymis and the epithelial cells of vas deferens, but there was no positive signal in the nuclei of above-mentioned cells. No positive signal was observed in germ cells, basement of the testis, interstium of epididymis and basement, as well as smooth muscle of vas deferens. Conclusion This study confirmed that the 5α-reductase type 2 gene expressed in Sertoli , Leydig cells of the testis, and the principle cells of epididymis. The expression pattern of the gene in these cells in human was similar to that of rat and monkey. The presence of 5α-reductase t     

大鼠精子发生过程中热休克蛋白70-2特异表达的研究

目的运用蛋白质组学方法,寻找大鼠精子发生相关蛋白质,找到目标蛋白质后,进一步用免疫组织化学方法做定位研究。方法用重力沉降法(STAPUT法)从9 d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞。分别提取这3种细胞的总蛋白质,进行双向电泳。对所得双向电泳凝胶扫描,分析并找出差异蛋白质。对挑选出的差异蛋白质做质谱分析,发现在这3种不同细胞的表达上有明显差异的蛋白。进一步做睾丸免疫组织化学组织定位、定量研究。结果双向电泳结果显示,HSP70-2在粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量较高, 在A型精原细胞则表达量极少。HSP70—2在粗线期精母细胞中表达量最大。用HSP70—2抗体对大鼠睾丸组织切片行免疫组织化学研究,发现粗线期精母细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞有阳性颗粒反应。HSP70—2主要表达于细胞质。结论 HSP70—2在精子发生过程中有明显的差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。     

Effects of Progestin and Antiprogestin on the Expression of FSH Receptor and LH Receptor mRNA in Porcine Granulosa and Thecal Cells

In order to investigate the mechanism of progestin and antiprogestin in the regula-tion of ovarian steroidogenesis, a dual-chamber culture system was prepared with the amnion membrane of human placenta. Isolated porcine granulosa and thecal cells from 4～6 mm-diameter follicles were grown on both sides of the amnion, respectively, and co-cultured with or without LNG and RU486. After 48 h incubation, the mRNAs of FSH receptor (FSH-R) and LH receptor (LH-R) of both cells were observed by in situ hybridization. The results showed that granulosa cells expressed both FSH-R mR-NA and LH-R mRNA, while thecal cells expressed LH-R mRNA only. Under the stimulation of FSH, both LNG and RU486 increased FSH-R mRNA expression of granulosa cells. Under the stimulation of LH, LNG enhanced LH-R mRNA expres-sion of thecal cells；while RU486 decreased its expression. When granulosa and thecal cells were exposed to FSH and LH both, the actions of LNG and RU 486 in thecal cells showed the same result as that stimulated by LH alone. In granulosa cells LNG de-creased LH-R mRNA expression, while RU486 increased its expression. These data suggest that； (1) granulosa cells expressed FSH-R mRNA significantly； (2) both the progestin and antiprogestin directly acted on the mRNA expression of gonadotropin re-ceptors of ovarian cells, but effects were different； (3) the response of granulosa or thecal cells to the action of LNG and RU486 was not the same. The mechanism needs to be further investigated.     

兔眼前方子宫内膜自体移植模型的研究

将兔的子宫内膜植入到自体的眼前房中，移植块在虹膜表面生长良好。经显微镜活体录像、光镜和电镜检查，证明子宫上皮细胞分化良好，并有分泌功能。子宫内膜自体移植块对雌二醇和孕酮的刺激，在５ｍｉｎ内可发生充血、肿胀反应，２０ｍｉｎ后达高峰，１ｈ后逐渐消退。抗孕酮药物ＲＵ－４８６和ＺＫ－９８２９９可以阻断移植块对雌二醇和孕酮的反应。兔眼前房子宫内膜自体移植模型可用于抗孕激素药物及其他影响子宫功能药物的快速筛选     

棉酚对蛋白质代谢的影响

棉酚具有抗生育作用,同时对动物有些毒副作用,为了分析棉酚代谢性质和毒性作用之间的关系,本实验通过整体自显影实验方法,观察棉酚对蛋白质对代谢的影响。结果说明,棉酚对~(14)C标记氨基酸的参入有一定的影响,棉酚对动物某些器宫蛋白质代谢有一定的作用,     

大鼠睾丸发育过程基因表达的研究

本研究选取１、３ 和８（成年）周龄等不同发育阶段大鼠,应用睾丸组织树脂包埋形态学观察与ｍ ＲＮＡ 差异显示逆转录－聚合酶链反应技术（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ ＲＴ－ＰＣＲ,ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）相结合,探讨大鼠睾丸发育过程中,精子发生过程睾丸特异基因的表达。结果：对不同周龄大鼠睾丸ｍ ＲＮＡ 进行差异比较,共得到 ８２ 个ｃＤＮＡ 差异片段。又分别标记不同周龄大鼠睾丸全部 ｍ ＲＮＡ 为探针,对其中 ４０ 个ｃＤＮＡ差异片段进行斑点杂交,得到１２ 个初步鉴定的特异或表达增加的ｃＤＮＡ 差异片段,片段范围２５０～５００ ｂｐ,其中２ 个在１ 周龄睾丸组获得,４ 个在３ 周龄睾丸组获得,在８ 周龄组获得 ５ 个,一个为１ 周和３ 周龄共有而８ 周龄大鼠缺乏的ｃＤＮＡ 片段。通过形态学观察与ｍ ＲＮＡ 差异显示的结果对应分析,初步认为２ 个１ 周龄的特异基因片段属于睾丸二倍染色体生精细胞表达基因,４ 个３ 周龄睾丸特异基因片段也属二倍或四倍体生精细胞表达基因,其中Ｂ型精原细胞和初级精母细胞的表达基因占主要成分;而成年动物的５ 个特异基因片段是属单倍体的精子细胞以及减数分裂过程的精母细胞表达基因片段     

庚酸睾酮对人精浆蛋白的影响

庚酸睾酮（ＴＥ）诱导的无精子症等同于可逆性的男性不育。为了进一步研究ＴＥ对附睾精子成熟的影响，给受试者每周２００ｍｇ的ＴＥ，共注射３个月，分别对注射前，注射后１、２、３个月和恢复期的精浆蛋白质组分进行ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳动态分析。注射ＴＥ一个月后精浆中的分子量为８７．１、６７．６、５０．１、３９．８和３１．６×１０３（ｋＤ）的主要蛋白成分开始下降，分别平均下降到注射ＴＥ前的６８．０％、４０．０％、４２．５％、４２．３％和３０．５％。但注射到精浆中无精子时某些精浆蛋白成分又增加，短暂的增加后又再次降低，甚至到恢复期尚未达到正常的水平，分别平均下降到注射前的４２．８％、１６．０％、２１．８％、２９．３％和３１．０％。经转移电泳和抗人转铁蛋白免疫化学分析，注射ＴＥ后第二个月增加的蛋白成分出现转铁蛋白阳性反应，特别是分子量６７．６×１０３的蛋白成分显著的阳性反应。结果表明精子功能低下与精浆蛋白成分下降时间相吻合。而当精浆中无精子时睾丸支持细胞分泌的转铁蛋白有短暂的增加，可能ＴＥ对支持细胞有兴奋作用。     

β-肌动蛋白在大鼠精子发生过程中的特殊表达

目的:寻找大鼠精子发生相关蛋白,研究β-肌动蛋白在大鼠睾丸组织的表达和分布。方法:用牛血清白蛋白梯度沉降(STAPUT)法从9日龄雄性SD大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞;分别提取这3种细胞的总蛋白,进行双向电泳;对所得到的双向电泳图谱用Im ageM aster2D E lite图像分析软件分析,找出差异蛋白,对挑选出的差异蛋白做质谱分析。进一步用β-肌动蛋白抗体做免疫组化的睾丸组织定位研究。结果:在双向电泳图谱中,β-肌动蛋白在A型精原细胞、粗线期精母细胞中表达量较高,在圆形精子细胞中则表达量极少。免疫组化研究发现:A型精原细胞、粗线期精母细胞有阳性颗粒反应,圆形精子细胞则无阳性颗粒反应;在接近成熟的精子细胞中,呈现极强的阳性颗粒反应,并且越接近排放期的精子细胞,阳性反应越强。在接近成熟的精子头部,阳性颗粒反应最强。β-肌动蛋白主要在精原细胞和精母细胞的细胞质中表达;在接近成熟的精子细胞中主要表达在细胞核。结论:β-肌动蛋白在精子发生过程中有明显的阶段差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。     

慢性痛大鼠背根神经元基因表达的研究

目的研究与慢性痛相关基因的特异表达,比较大鼠背根神经节损伤神经元与正常神经元之间基因表达的差异,以寻找构成神经病性疼痛的内在因素。方法应用mRNA差异显示方法从损伤背根神经节中寻找特异表达的基因。结果损伤侧背根节中cDNA条带(25.75±4.7)明显多于对照侧(18.0±5.0)。反向杂交后进行亚克隆得到10个含插入片段的阳性质粒,并对其中4个进行测序。结论神经轴突损伤可导致胞体基因表达改变,其中某些可能与痛觉异常有关,也可能与细胞结构恢复及免疫功能改变有关。