前列腺癌10个显著差异表达基因筛查研究

目的:筛查验证前列腺癌特异性表达基因。方法:运用基因芯片筛查出前列腺癌组织和癌旁组织中差异表达的基因,再通过PCR验证。结果:从芯片结果中发现,总共有1 444个基因(差异倍数≥1.5;P≤0.05)为差异表达基因。其中,前列腺癌与对比配对的良性组织有769个上调(53%)和675个下调(47%)。差异基因中有40%的差异倍数为1.5~2倍,包括396个上调和182个下调基因。另外308个上调基因和334个下调基因的差异倍数为2~5倍;46个上调基因和78个下调基因的差异倍数为5~10倍;19个上调基因和81个下调基因的差异倍数为10倍以上。取其中上调和下调最明显的各15个基因做进一步荧光定量PCR(qRT-PCR)鉴定,结果显示了大多数基因都有芯片结果相似的基因片段,芯片结果和qRT-PCR结果用皮尔森相关性分析结果为0.83,并获得10个差异显著的基因。结论:芯片分析出来的前列腺癌和良性组织间差异基因是可靠的,qRT-PCR验证获得的这10个差异基因可能成为新的肿瘤标记物和特征性肿瘤鉴定分子。     

微RNA-374b与前列腺癌恶性程度及生化复发的分析

目的检测前列腺癌组织及良性前列腺组织中微RNA-374b表达,探讨其与前列腺癌恶性程度及生化复发的关系。方法收集广州医科大学附属广州市第一人民医院、中山大学附属第二医院、广州市红十字会医院2000年至2010年泌尿外科103例前列腺癌手术后的样本和25例前列腺增生手术获取的前列腺良性组织样本。采用原位杂交技术检测微RNA．374b在前列腺癌组织及良性前列腺组织中表达,并对微RNA．374b表达与前列腺癌患者年龄、术前PSA、临床分期、病理分期、Gleason评分、是否生化复发、是否转移及是否死亡的关系进行统计分析。根据微RNA．374b的相对表达量,以中位数（M=4．50）将其分为低表达组及高表达组,运用Kaplan．meier方法及Log．rank检验进行总体生存率和无生化复发生存率分析。结果微RNA．374b在前列腺癌的表达低于良性组织（3．97±1．17比4．70±0．71,P〈0．05）。微RNA．374b的表达量同Gleason评分、病理分期、转移、是否生存及生化复发有关（均P〈0．05）,同年龄、PSA水平及临床分期无关（均P〉0．05）。微RNA．374b低表达组无生化复发生存率低于高表达组（P〈0．05）,高表达组的生化复发时间高于低表达组（P〈0．05）。微RNA．374b表达与总体生存率无关。结论微RNA．374b的低表达与前列腺癌恶性程度有关,有望成为评价前列腺癌恶性程度及生化复发的指标。     

硫氧还原蛋白过氧化物酶3在前列腺癌早期诊断及恶性判断中的作用

目的：探讨硫氧还原蛋白过氧化物酶3（PRDX3）在前列腺癌早期诊断及恶性判断中的作用。方法通过蛋白组学对比前列腺癌组织和癌旁组织中PRDX3基因结合蛋白差异表达程度,免疫组化验证,结合PRDX3免疫组化评分和前列腺癌患者的临床病理参数进行分析。结果通过蛋白组学结果表明,与癌旁组织相比,PRDX3在肿瘤组织中表达是上调的,上调达1.68倍（ P＝0.015）。通过免疫组化染色,我们发现PRDX3在前列腺癌组织中的表达明显强于癌旁组织（ P＝0.035）。 PRDX3的表达与患者年龄（ P＝0.028）有关;与前列腺癌患者血清PSA水平（ P＝0.641）和肿瘤转移（ P＝0.21）无明显相关;而与Gleason评分（ P＝0.040）、临床分期（ P＝0.024）和病理分期（ P＝0.041）有关。结论 PRDX3的表达与肿瘤的早期诊断和恶性程度相关,可结合ROS水平对前列腺癌疑似患者进行早期诊断及初步判断肿瘤恶性程度。     

microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

【摘要】 目的 研究microRNA-126(miR-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法 通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达miR-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证miR-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果 与对照组相比,转染miR-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达miR-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,miR-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论〓过表达miR-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。     

miR-221在前列腺癌细胞中的表达及对增殖的影响

目的研究前列腺癌细胞中miR-221的表达情况及其对癌细胞增殖的影响。方法运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-221在前列腺正常细胞株与前列腺癌细胞株中表达的差异情况,利用细胞转染构建miR-221过表达LNCa P和DU145细胞株,再通过CCK8细胞增殖实验检测细胞增殖情况的变化。结果 qRT-PCR检测细胞株发现miR-221在PC3、LNCa P和DU145三种前列腺癌细胞株中表达量均比前列腺正常细胞株Pr EC低(F=254.197,P<0.001),其中两两比较差异也均有统计学意义。细胞转染技术构建的miR-221过表达LNCa P和DU145细胞株,经qRT-PCR结果显示,miR-221在LNCa P和DU145细胞株中的表达水平明显升高(LNCa P,倍数变化=2.24,t=3.46,P<0.01;Du145,倍数变化=2.24,t=4.29,P<0.01)。细胞增殖实验结果显示,过表达了miR-221的LNCa P(P<0.001)和DU145(P<0.001)细胞生长速度慢于对照组。结论实验证明miR-221表达过度能减慢前列腺癌细胞的增殖,miR-221有可能成为前列腺肿瘤治疗的生物学标志物。     

IMPDH2蛋白与前列腺癌临床相关性分析

【摘要】〓目的〓研究IMPDH2在良性前列腺增生和前列腺癌中的表达,并分析其表达水平与临床病理特征的关系。方法〓收集临床手术切除的前列腺癌组织和前列腺增生,或者穿刺活检组织,所有组织均由病理学确诊。排除已做手术去势的前列腺组织。通过Western Blot检测IMPDH2在前列腺癌、前列腺增生组织中IMPDH2蛋白的表达情况|免疫组化检测前列腺癌、前列腺增生标本中IMPDH2的表达。分析IMPDH2基因的表达水平与临床病理特征的关系。结果〓前列腺癌患者组织中IMPDH2蛋白表达显著上调,IMPDH2蛋白表达上调与肿瘤临床分期、Gleason评分、转移相关。结论 IMPDH2在前列腺癌组织中表达上调,前列腺组织中检测IMPDH2可能有助于判断前列腺癌分化程度并评估预后。     

前列腺癌组织中TRIB1基因和蛋白异常表达与患者不良预后的相关性

目的研究Tribbles同源蛋白1(TRIB1)在良性前列腺增生和前列腺癌中的表达,并分析其表达水平与患者临床特征及预后的关系。方法在公共基因芯片数据库(GEO)中下载前列腺样本中的相关基因芯片数据,分析TRIB1在前列腺样本中mRNA的表达水平。收集临床手术切除或者穿刺活检的前列腺癌和前列腺增生组织,通过免疫组化检测前列腺癌、前列腺增生组织中TRIB1蛋白的表达。分析TRIB1蛋白和基因的表达水平与患者临床特征及预后的关系。结果前列腺癌患者组织中TRIB1蛋白表达显著上调(P0.01),TRIB1蛋白表达上调与前列腺癌Gleason评分(P0.01)、病理分期(P=0.02)相关,基因芯片数据提示TRIB1基因表达上调与前列腺癌Gleason评分(P=0.02)、病理分期(P=0.01)、无生化复发生存率(BCR-free survival)(P=0.047)相关。结论 TRIB1在前列腺癌组织中表达上调,前列腺组织中检测TRIB1可能有助于判断前列腺癌分化程度并评估预后。     

miR-30c对前列腺癌的功能调控作用

目的研究mi R-30c在前列腺癌中的功能调控作用,获得其调控前列腺癌侵袭及转移的可靠证据,进而揭示其在前列腺癌中可能的调控机制。方法从mi RNA芯片检测结果中获得前列腺癌相关的差异表达的mi R-30c分子,进一步通过mi R-30c过表达质粒转染前列腺癌细胞,运用Transwell检测细胞侵袭变化,划痕实验检测细胞转移变化。结果 LNCa P/DU145转染质粒后,mi R-30c的表达水平显著高于阴性对照组(LNCa P:倍数=3.87,P<0.001;Du145:倍数=4.32,P<0.001)。Transwell侵袭实验表明,mi R-30c转染组的LNCa P/DU145细胞侵袭的数量显著低于对照组(LNCa P:67 vs.120个/视野,P<0.001;DU145:130 vs.220个/视野,P<0.001)。划痕实验结果发现mi R-30c转染后,LNCa P/DU145细胞实验组转移的数量显著低于对照组(LNCa P:241 vs.520个/视野,P<0.001;DU145:490 vs.660个/视野,P<0.001)。结论 mi R-30c可抑制前列腺癌细胞的侵袭及转移,这说明mi R-30c在前列腺中确实起着抑癌的作用,其可能通过KRAS-MAPK信号通路抑制前列腺癌的侵袭及转移。     

趋化因子CCL18对前列腺癌细胞迁移力、侵袭力和细胞增殖影响的研究

目的研究趋化因子CCL18对前列腺肿瘤细胞侵袭力、迁移力和细胞增殖的影响。方法通过培养前列腺肿瘤细胞LNCa P、DU145,并加入趋化因子蛋白CCL18,利用Transwell实验、Wound Healing实验和CCK8试剂盒来分别检测CCL18对前列腺肿瘤细胞侵袭力、迁移力及对细胞增殖的影响。结果经过趋化因子蛋白CCL18处理的前列腺肿瘤细胞,在Transwell实验中,肿瘤细胞跨膜细胞数显著增加(LNCa P:对照vs.CCL18=202.0±18.5 vs.279.7±27.6;DU145:对照vs.CCL18=60.3±6.5 vs.91.0±9.5);Wound Healing实验中,肿瘤细胞发生迁移的数量明显增加(LNCa P:对照vs.CCL18=127.3±14.3 vs.214.4±30.9;DU145:对照vs.CCL18=68.6±15.8 vs.129.4±12.0);细胞生长实验结果揭示肿瘤细胞增殖速度也显著加快。结论趋化因子蛋白CCL18能促进前列腺肿瘤细胞LNCa P、DU145的侵袭力、转移力,并加快前列腺肿瘤细胞的生长速度。     

NEK2与前列腺癌预后的相关研究

目的 研究NEK2(中心体相关激酶2)在前列腺癌和良性组织中的表达情况及其与前列腺癌预后的相关性.方法 运用qRT-PCR检测NEK2在前列腺癌和癌旁组织的表达差异,通过组织芯片免疫组化染色检测的方法检验NEK2在前列腺癌和癌旁组织的表达情况,最后使用Taylor的数据对NEK2进行生物信息学分析. 结果 qRT-PCR检测NEK2在前列腺癌组织的表达显著高于癌旁组织(6.93±0.15 vs 5.38±0.4,t=6.25,P=0.003),组织芯片免疫组化结果显示NEK2在前列腺癌组织的表达显著高于癌旁组织(5.84±0.56 vs 4.27±0.49,t=5.38, P<0.001),结合Taylor公用数据库分析,NEK2高表达组患者术后的生化复发生存率减少(x2=4.33,P=0.037),NEK2高表达组和低表达组在前列腺癌总体生存率上没有明显区别(x2=0.27,P=0.605).结论 NEK2参与前列腺癌的发生、发展进程,同前列腺癌发病进程密切相关,通过检测前列腺癌患者NEK2的表达情况,可早期预测生化复发的概率,能够作为判断前列腺癌预后的潜在生物学标志物.