机械张力致小鼠增生性瘢痕形成的模型构建

目的探索机械张力在增生性瘢痕形成中的作用,构建机械张力致小鼠增生性瘢痕形成的动物模型。方法将健康C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组,于两组小鼠背部正中做2 cm长线性切口,术后第4天拆除缝合线,并安装机械牵拉装置,对照组不牵拉,实验组间断牵拉14 d。分别于牵拉14 d后(牵拉结束当天)、牵拉结束后30 d和60 d拍照并取材,HE染色分析两组瘢痕组织的病理学变化,Masson染色计数瘢痕组织的细胞数量,分析其胶原分布情况,并进行统计学分析。结果牵拉14 d后,实验组形成了类似于人体瘢痕组织的红色无毛区域,平均面积(3.92±1.24)mm~2,20倍物镜下每视野细胞数为(292±34)个,胶原面积为(0.115±0.015)mm~2;对照组瘢痕区域成线状,其瘢痕面积、细胞数目和胶原含量均小于实验组,组间差异均具有统计学意义(P0.05)。牵拉结束后30 d和60 d结果与牵拉14 d时相近。结论机械张力加载诱导形成的小鼠增生性瘢痕至少可以维持60 d,构建的增生性瘢痕实验模型有利于推动小鼠创伤后瘢痕形成机制探索。     

不同断蒂时间下肌皮瓣的血运重建情况

目的:以前期建立的兔背阔肌肌皮瓣带蒂移植模型,探索肌皮瓣移植术后不同时间点的血运重建情况,确定肌皮瓣移植后最佳断蒂时间。方法:采用新西兰大耳白兔20只,一期复制背阔肌肌皮瓣带蒂移植模型,二期行断蒂术并按断蒂时间不同分为2w组、3w组、4w组和5w组,每组5只。术后7d进行取材,观察各组肌皮瓣的大体存活情况、肌纤维及微血管密度的改变。结果:各组间皮瓣平均存活率5w4w3w2w,结果有统计学意义(P0.05);肌纤维的形态及微血管计数结果与肌皮瓣存活率相符。结论:肌皮瓣带蒂移植血运重建直至完全建立可能需要5w,推断其最佳断蒂时间是移植术后5w。     

精子顶体小泡蛋白-1(ACRV1)在小鼠睾丸组织中的表达与定位

目的:研究精子顶体小泡蛋白-1(ACRV1)在小鼠睾丸组织发育过程中的表达特征。方法:将4 d、9 d、18 d、35 d、54 d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的ACRV1基因。采用RT-PCR方法检测ACRV1基因在小鼠不同日龄和不同组织中的表达情况,采用免疫组织化学方法检测ACRV1蛋白在小鼠睾丸组织中的定位。结果:对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后,筛选得到1个差异表达杂交点,通过在NCBI网站与小鼠全基因组序列Blast分析可知该差异表达基因是ACRV1基因。RT-PCR结果表明ACRV1 mRNA呈小鼠睾丸特异性表达,在出生31 d小鼠睾丸开始高表达,在成年前达到高峰。ACRV1蛋白主要定位在睾丸圆形精子和长形精子细胞。结论:ACRV1基因存在发育的表达调控,为小鼠年龄依赖性表达基因,其表达与小鼠精子发生的过程有很强的一致性,且具有睾丸特异性表达的特征,因此推测该基因可能在精子发生中具有关键作用。     

应用改良扩张器构建大鼠皮肤软组织扩张模型

目的应用改良设计的短注射导管枕形扩张器构建大鼠皮肤软组织扩张模型，并探讨其产生的扩张应力对大鼠皮肤细胞增殖分化的影响，验证扩张模型的扩张效果，为研究扩张皮肤新生机制提供一个稳定的动物模型。方法SD大鼠随机分为A、B两组（每组各30只），A组大鼠采用改良设计的扩张器，B组大鼠采用上海威宁公司生产的普通扩张器；选择SD大鼠近颈部切口，以注射壶外置的方式埋置扩张器，制作皮肤软组织扩张模型。分别采集A组在不同扩张时间点（1、2、3、4、5周）的扩张中心区域皮肤和正常皮肤组织作为标本；利用HE染色方法观察扩张后皮肤结构的变化；根据增殖细胞表达增殖细胞核抗原，采用免疫组织化学染色方法观察扩张皮肤中细胞增殖的情况。结果A组应用自行改良设计的扩张器，选择大鼠近颈部切口构建的皮肤软组织扩张模型，术后外置的注射壶不易被大鼠咬掉，且术后注水及护理更简单，模型稳定性显著高于B组。HE染色结果表明，扩张后皮肤的表皮层明显增厚，真皮层变薄；免疫组织化学染色结果显示，增殖细胞呈点状分布，主要集中于表皮基底层和毛囊鞘。结论自行改良设计的短注射导管枕形扩张器，是构建大鼠皮肤软组织扩张模型的良好实验材料；扩张应力对大鼠的皮肤结构和增殖产生了影响。     

整形外科学硕士研究生基础研究相关实验教学调查

目的：通过调查整形外科学硕士研究生对基础研究相关实验教学的培训需求，明确理论教学和实操教学的培训形式、培训内容和培训方法。方法：通过自主设计调查问卷，调查整形外科学硕士研究生21名，探明学生基本情况，明确其对实验教学培训形式、培训内容和培训效果评价的态度。结果：在理论教学中，71.4%的同学认为理论教学和实操教学应同时开展，理论教学以实验室安排集中讲解为宜，66.7%的同学选择一次讲解一大类原理或操作相近的实验；在实操教学中，90.5%的学生选择实验室老师进行实操教学，61.9%的学生选择一次培训一大类原理或操作相近的实验，76.2%的学生认为一种实验应培训2～3次。就培训内容而言，同学们最希望掌握的动物实验、动物手术和动物模型分别为实验动物选择（30.8%）、手术剥离（21.7%）和皮瓣转移模型（22.5%）；而最希望掌握的细胞实验、病理学实验、显微镜技术、免疫学实验、分子生物学实验和整形外科特殊实验则依次是细胞转染（21.6%）、Masson染色（23.6%）、激光共聚焦显微镜（31.0%）、免疫荧光（31.0%）、qPCR(22.0%)和皮瓣转移（28.3%）；而在未来可能开展的...     

Tesmin基因在小鼠睾丸中的表达分析

目的 研究Tesmin基因的表达特点值.方法 将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织提取RNA,通过RT-PCR分析差异表达基因Tesmin在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达.结果 基因芯片结果显示4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸中分别是31.4(A)、34(A),1292(P)、865.6(P)、977.2(P) 和830.7(P),代表Tesmin基因在4d,9d小鼠中无表达,18d龄后开始高表达,RT-PCR结果表明小鼠Tesmin基因在小鼠9d龄及之前的睾丸中没有表达,在18d龄后睾丸中开始高表达,与基因芯片分析结果相一致.结论 Tesmin基因为小鼠年龄依赖性表达基因,小鼠Tesmin基因的表达与小鼠精子发生有很强的一致性,推测该基因可能在精子发生中起重要作用.     

外周致密纤维1在人精子中的表达差异及其意义

目的:比较外周致密纤维1(ODF1)在健康男性和弱精子症患者精子中的表达差异。方法:根据WHO标准,收集正常男性和弱精子症患者的精液标本各20份,Percoll非连续梯度离心法分离精子,收集95%Percoll以下和57%与76%Percoll层之间的精子,以排除生精细胞和白细胞的污染;采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹方法,从mRNA和蛋白水平检测ODF1的表达。结果:RT-PCR结果表明,与正常男性组相比,ODF1在弱精子症患者精子中的mRNA表达水平显著降低(2.79±0.28vs1.35±0.25,P<0.05);免疫印迹与RT-PCR结果一致,与正常男性组相比,弱精子症患者精子中的ODF1蛋白的表达亦显著降低(3.64±0.34vs1.44±0.26,P<0.05)。结论:ODF1在弱精子症患者精子中的表达显著降低,提示其可能与精子活动力低下有关。     

三种方法矫正中重度上睑皮肤松弛效果的比较分析

目的比较分析3种不同的手术方法矫正中、重度上睑皮肤松弛的临床效果。方法回顾分析2017年1月至2019年3月空军军医大学西京医院整形外科采用眉下切口提眉术(subbrow blepharoplasty,SBB),重睑成形术(double eyelid surgery,DES)和眉下切口提眉术联合重睑成形术(combination of subbrow blepharoplasty and double eyelid surgery,CSD)3种方法矫正中、重度上睑皮肤松弛的患者资料。根据手术方式的不同及纳入和排除标准将患者分为SBB组、DES组和CSD组。评价患者术后6个月上睑皮肤松弛改善效果,包括睑缘-角膜映光点距离(MRD1)、角膜内侧睑缘与重睑褶皱距离(MCMFD)、瞳孔中点睑缘与重睑褶皱距离(MPMFD)、外眦处睑缘与重睑褶皱距离(LCMFD),以及上睑皱纹改善效果,并由患者和第三方医师进行视觉模拟评分(VAS)评价。计量资料用均值±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果90例女性患者被纳入研究,每组30例,患者年龄35~62岁,3组患者年龄及上睑皮肤松弛程度差异无统计学意义(P>0.05)。术后随访6~24个月,所有患者术后上睑皮肤松弛和上睑皱纹均得到改善。CSD组2例患者出现呕吐,1例患者出现额部皮肤麻木。SBB组、DES组和CSD组MRD1改善量分别为(0.14±0.09)mm、(0.34±0.11)mm、(0.43±0.15)mm,3组组间比较差异有统计学意义(F=34.537,P<0.001),SBB组与DES组、DES组与CSD组、SBB组与CSD组比较,差异均有统计学意义(t值分别为6.418、2.824、9.236,P值分别为<0.001、0.008、<0.001);MCMFD改善量分别为(0.32±0.15)mm、(0.92±0.21)mm、(0.97±0.24)mm,3组组间比较差异有统计学意义(F=94.082,P<0.001),SBB组与DES组、SBB组与CSD组比较,差异均有统计学意义(t值分别为11.273、12.404,P值均<0.001),DES组与CSD组比较差异无统计学意义(t=1.132,P=0.261);MPMFD改善量分别为(0.34±0.13)mm、(1.07±0.24)mm、(1.37±0.23)mm,3组组间比较差异有统计学意义(F=193.935,P<0.001),SBB组与DES组、DES组与CSD组、SBB组与CSD组比较,差异均有统计学意义(t值分别为13.531、5.628、19.159,P值均<0.001);LCMFD改善量分别为(0.54±0.17)mm、(1.58±0.37)mm、(1.97±0.48)mm,3组组间比较差异有统计学意义(F=121.405,P<0.001),SBB组与DES组、DES组与CSD组、SBB组与CSD组比较,差异均有统计学意义(t值分别为10.971、4.097、15.068,P值均<0.001)。上睑皱纹评分改善量:SBB组、DES组、CSD组分别为(0.70±0.47)分、(0.50±0.51)分、(1.20±0.48)分,3组组间比较差异有统计学意义(F=16.471,P<0.001);SBB组与DES组比较,差异无统计学意义(t=1.592,P=0.115),DES组与CSD组、SBB组与CSD组比较,差异均有统计学意义(t值分别为5.571、3.979,P值均<0.001)。SBB组、DES组和CSD组VAS患者评分分别为(2.77±0.57)分、(2.17±0.38)分、(3.90±0.31)分,3组组间比较差异有统计学意义(F=124.575,P<0.001),SBB组与DES组、DES组与CSD组、SBB组与CSD组比较,差异均有统计学意义(t值分别为5.379、15.541、10.161,P值均<0.001)。VAS医师评分分别为(2.80±0.61)分、(2.27±0.58)分、(4.07±0.45)分,3组组间比较差异有统计学意义(F=84.085,P<0.001),SBB组与DES组、DES组与CSD组、SBB组与CSD组比较,差异均有统计学意义(t值分别为3.740、12.624、8.883,P值均<0.001)。结论相较于眉下切口提眉术和重睑成形术,眉下切口提眉术联合重睑成形术能够充分切除上睑松弛皮肤,明显减少上睑皱纹,调整和重塑重睑形态,恢复良好的眉眼部美学关系,是矫正中、重度上睑皮肤松弛的更好方法。     

Tpap基因在小鼠睾丸中的表达

背景:精子发生过程受许多特异分子及细胞间作用的严格调节,包括染色体结构变化及一系列特定基因程序性表达调控.长期以来由于缺乏合适的体内和体外研究模型,精子发生分子机制的研究进展较慢,尤其缺乏对关键调节基因的认识.目的:筛选与精子发生相关的基因,并分析其表达特点.方法:将4,9,18,35,54 d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因.然后通过反转录-聚合酶链反应分析差异表达基因在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达.结果与结论:对Affymetrix全基冈组芯片杂交结果分析后,筛选得到1个差异表达杂交点.通过在NCBI与小鼠全基因组序列Blast分析可知该差异表达基因是Tpap基因.该基因在4,9,18,35,54d和6月龄小鼠睾丸中杂交信号校正值分别是4.4(A)、12.9(A),262.4(P)、1 136.7(P)、1 617.5(P)和1 128(P),表明4,9 d小鼠睾丸中该基因无表达,18 d小鼠开始表达,RT-PCR结果表明小鼠Tpap基因在小鼠9 d及之前的睾丸中没有表达,在18 d睾丸后开始表达,与基因芯片分析相一致.结果表明,Tp印基因为小鼠年龄依赖性表达基因,小鼠Tpap的表达与小鼠精子发生的过程有很强的一致性,推测该基因在哺乳动物精子发生中起重要作用.     

Rfx2基因在小鼠睾丸中的表达研究

目的利用基因芯片筛选与精子发生相关的基因,并研究其表达特征。方法将4 d、9 d、18 d、35 d、54 d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因。通过RT-PCR分析差异表达基因在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达。结果分析Affymetrix全基因组芯片杂交结果后,筛选得到1个差异表达杂交点,通过在NCBI网站与小鼠全基因组序列Blast分析可知该差异表达基因是Rfx2基因。该基因在4 d、9 d、18 d、35d、54 d和6月龄小鼠睾丸中的芯片信号校正值分别是22.9(A)、1.5(A),130.3(P)、65.6(P)、112.7(P)和71.7(P),表明Rfx2基因在4日、9日龄小鼠睾丸中不表达,从18日龄后开始表达,而且在18日龄-6月龄小鼠睾丸中持续表达;RT-PCR结果表明Rfx2基因在4 d、9 d小鼠睾丸中不表达,在18日龄小鼠睾丸中开始表达,其实验结果与芯片分析结果一致。结论 Rfx2基因为小鼠年龄依赖性表达基因,推测Rfx2基因在小鼠精子发生过程中起重要作用。