NOD8对LPS诱导巨噬细胞释放NO、TNF-α和IL-1β的影响

 目的： 探讨NOD8对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞释放一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法： pEGFP-C2及pEGFP-NOD8重组质粒分别转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,以LPS刺激RAW264.7细胞0、6、12、24 h后,采用Griess reagent法测定观察细胞分泌的NO水平;ELISA法检测IL-1β 和 TNF-α 的含量;荧光法测定活化的caspase-1水平; Western blotting检测NOD8蛋白表达及NF-κB  p65亚基的核转位情况。结果： (1)与转染pEGFP-C2空质粒组比较,转染pEGFP-NOD8质粒组NOD8蛋白表达明显增加。(2) LPS刺激6、12、24 h后,RAW264.7细胞释放NO、IL-1β及TNF-α均明显增加;而在pEGFP-NOD8+LPS组RAW264.7细胞, NO于12、24 h 的释放显著降低,IL-1β于6、12、24 h的释放也明显降低,TNF-α的释放则无明显变化。（3）在LPS刺激6、12、24 h后, RAW264.7细胞caspase-1活化水平均明显升高,胞浆NF-κB p65亚基表达明显减少,表明p65核转位增加;而pEGFP-NOD8+LPS组可显著抑制caspase-1的活化以及NF-κB p65亚基的核转位,差异有统计学意义。结论： NOD8可抑制LPS诱导的巨噬细胞NO与IL-1β释放,其作用机制可能与NOD8抑制caspase-1及NF-κB 的活化有关。     

中国人群MEFV基因多态性研究

目的:探讨中国人群MEFV基因多态性的特点。方法:收集57份中国人外周血全血标本,运用反向杂交的方法检测MEFV基因常见的12个突变位点。结果:57份标本中正常野生型的有26份,发生突变的有31份,突变率为54.39%(31/57)。共发现9种突变类型,其中发生E148Q突变的有26例,突变率最高,为45.61%(26/57)。结论:中国人群MEFV基因有相当高的突变率,E148Q突变率最高。     

钩藤碱降低内毒素血症小鼠死亡率的机制研究

目的： 观察钩藤碱对内毒素血症小鼠死亡率及器宫损伤的影响，并探讨其作用机制。方法: 雄性小鼠随机分为对照组、脂多糖（LPS）组、钩藤碱（Rhy）防治组和Rhy对照组，分别予以生理盐水、Rhy皮下注射，1 time/d，连续3 d，第3 d皮下注射后1 h，腹腔注射生理盐水或LPS（20 mg/kg）。观察各组小鼠的死亡率，肺、小肠组织病理改变；测定注射LPS后12 h各组肺湿/干重比值 (W/D)及血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）的水平；用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）及白细胞介素-10（IL-10）的含量，用硝酸还原酶法试剂盒测定血清一氧化氮（NO）的含量。进一步复制盲肠结扎穿孔的脓毒症模型， 观察钩藤碱对脓毒症小鼠生存率的影响。结果: LPS攻击后24 h小鼠的生存率明显低于对照组，8、16 mg/kg的钩藤碱防治组小鼠生存率高于LPS组。但钩藤碱并不能降低CLP小鼠的死亡率，而且，8 mg/kg钩藤碱治疗组小鼠的死亡率反而高于CLP小鼠的死亡率。LPS攻击后12 h病理检查发现LPS组小鼠肺及小肠组织均有严重的炎症表现；肺W/D、血清ALT、AST、BUN、Cr水平显著高于对照组；LPS攻击后2 h血清TNF-α、IL-1β及IL-10含量及8 h血清NO水平显著高于对照组。LPS攻击后12 h， Rhy防治组肺及小肠组织损伤无明显改善；肺W/D、血清ALT、AST、BUN、Cr水平与LPS组比较无显著差异；LPS攻击后2 h血清TNF-α水平显著低于LPS组，但2 h血清IL-1β及IL-10含量及8 h血清NO水平与LPS组比较无显著差异。结论: 钩藤碱能降低内毒素血症小鼠的死亡率，但不能降低脓毒症小鼠的死亡率，抑制TNF-α的生成可能是钩藤碱降低内毒素血症小鼠死亡率的机制之一。     

家兔内毒素双相热各期脑脊液和血浆cAMP含量的观察

本研究用静脉注射内毒素复制家兔双相热模型,观察双相热各期颈动脉血浆和脑脊液cAMP含量的变化及其与体温变化的关系,结果如下:1.内毒素非热限剂量一次静脉注射引起典型双相热。脑脊液cAMP含量在两个热相高峰期相应出现两个上升波,间歇期体温下降时,脑脊液cAMP含量相应降低,退热后恢复正常。血浆cAMP含量仅在第一热相增高。2.相关检验表明,脑脊液cAMP含量与体温变化呈显著正相关。血浆cAMP含量仅在第一热相与脑脊液cAMP含量相关。以上结果与内生致热原双相热相似,提示内毒素可能主要通过内生致热原以某种方式影响体温调节中枢cAMP的变化,导致双相热型的出现     

环肽a-amanitin对人肝癌细胞SMMC-7721的体外毒性作用研究

目的 研究毒蕈环肽a-amanitin对人肝癌细胞SMMC-7721的体外毒性作用.方法 运用MTT法研究α-amanitin不同浓度和不同作用时间对体外传代培养的人肝癌细胞SMMC-7721的抑制增殖作用,再进行环肽α-amanitin对细胞毒性作用的数学模型拟合. 结果研究发现,α-amanitin的使用剂量与细胞存活率存在负相关.7.12×10~(-4) mmol/L 和7.12×10~(-10) mmol/L α-amanitin对SMMC-7721作用24 h后,细胞存活率分别为71.25%和87.47%,作用效果分别与10 mmol/L和2.5 mmol/L 环磷酰胺相似.SMMC-7721细胞存活率平方根的反正弦值与α-amanitin浓度的对数变换值的相关和回归分析结果显示二者显著性相关,曲线拟合结果显示三次曲线模型拟合最好,回归方程为Y=31.257 7-12.902X-1.5117X~2-0.0616X~3.对SMMC-7721细胞存活率平方根的反正弦值与α-amanitin作用时间进行相关和回归分析,二者显著性相关,三次曲线模型拟合最好,对应回归方程为Y=89.668 5-8.616 6X+1.791X~2-0.1271X~3.结论 环肽a-amanitin对人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖有显著抑制作用,且单位摩尔数的α-amanitin抑制作用远强于单位摩尔数的环磷酰胺.     

中性粒细胞抑制吞噬细胞U937生成TNF-α

目的：观察免疫活性细胞的相互作用及其对FNF－α生成的影响。方法：分离人中性粒细胞（polymorphonuclearleukocytes，PMN）并与PMA刺激分化为单核细胞样细胞的U937细胞在不同条件下共同培养。结果：在LPS作用下U937细胞可产生大量TNF－α。PMN在相同条件下并不产生INF－α。将PMN与U937细胞共同培养可抑制U937细胞TNF－α的生成。PMN的抑制作用呈数量依赖性。将两种细胞共处于同一培养体系中并用0．4μm的滤网分开使其不能直接接触，U937细胞产生TNF－α的能力恢复至无PMN时的85％以上。一氧化氮供体硝普钠可轻微提高U937细胞产生TNF－α的能力。但提高的幅度在有或无PMN存在的条件下均相同，与无硝普钢的对照组比较无明显差异（P＞0．05）。经鼠诱导型一氧化氮合酶基因转染的U937对细胞表达一氧化氮合酶的活性，所产生的内源性一氧化氮对PMN的抑制作用无影响。结论：提示PMN并非TNF－α生成细胞。PMN对单核细胞TNF－α的生成有抑制性调节作用。这种抑制作用的机制可能与一氧化氮信息传导通路无关。     

卡介苗接种对高盐及肾动脉狭窄术诱导的高血压大鼠血压的影响

目的:观察卡介苗接种对高盐负荷及肾动脉狭窄所致高血压的影响,为寻找防治人类高血压的新方法提供实验依据。方法:以高盐食物喂饲及肾动脉狭窄术分别制作高盐性高血压(SH)及肾性高血压(RH)模型。高盐喂饲或肾动脉狭窄术后4周,选择高血压大鼠及正常对照大鼠进行实验。所有大鼠腹部皮下接种卡介苗一次,接种前及接种后每周测定血压变化情况,同时每时段收集24 h尿样并以Greiss反应法进行一氧化氮终产物NO₂^-及NO₃^-(UNOx)的测定。3周后大鼠分别取主动脉组织并用Western blot法检测iNOS蛋白水平。结果:卡介苗接种对正常大鼠血压无明显影响。但接种1周时,能使高血压大鼠的血压明显下降。其中尤以卡介苗接种+L-精氨酸作用明显。NO测定表明,卡介苗接种后体内NO生成明显增加。Western blot结果证明卡介苗接种后,高血压大鼠主动脉血管组织中iNOS蛋白明显高于正常大鼠。结论:卡介苗接种能通过激活iNOS/NO途径降低某些类型高血压大鼠的血压。     

甘氨酸和多粘菌素B拮抗内毒素活性及机制的研究

目的和方法：通过ＬＡＬ改良基质显色法和紫外光谱法观察了甘氨酸多粘菌素Ｂ合剂体外拮抗内毒素的机制。结果：测定了各拮抗剂与内毒素中和后剩余内毒素的浓度（活性）,结果表明甘氨酸多粘菌素Ｂ合剂组、多粘菌素Ｂ组和甘氨酸组均显著低于内毒素组（Ｐ＜０－０１）,并且甘氨酸多粘菌素Ｂ合剂组显著低于单独使用多粘菌素Ｂ组和甘氨酸组（Ｐ＜０－０１）。从紫外光谱图上可看到两种拮抗剂中和内毒素的作用是明显不同的。多粘菌素Ｂ可以降低内毒素的吸收峰值（２０６ｎｍ和２５７ｎｍ处）,而甘氨酸与内毒素的吸收峰值则相加（２１２ｎ…     

电刺激VSA对致热原作用下兔POAH温敏神经元放电的影响

本实验采用微电极细胞外记录及脑内电刺激技术,在３２只新西兰兔下丘脑视前区（ｐｒｅｏｐｏｔｉｃａｎｔｅｒｉｏｒｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ,ＰＯＡＨ）记录了温敏神经元单位放电,观察电刺激腹中膈区（ｖｅｎｔｒａｌｓｅｐｔａｌａｒｅａ,ＶＳＡ）对致热原作用下兔ＰＯＡＨ温敏神经元放电的影响。（一）　致热原对ＰＯＡＨ热敏神经元放电的影响：在９例热敏神经元中,观察到侧脑室注射ＩＬ－１β后１、３和５ｍｉｎ,热敏神经元放电频率由６－３２±４－７９分别减少到３－７５±３－４６（Ｐ＜０－０５）、１－６８±１－９８（Ｐ＜…