新型二氢吡啶类化合物的合成及其抗乙型肝炎病毒活性研究

目的合成全新的二氢吡啶类化合物,并对其抗乙型肝炎病毒（HBV）复制活性进行研究,以获得新型的抗病毒药物先导物。方法以芳杂环取代的二氢嘧啶类化合物为模板,通过比较分子场分析,设计全新的二氢吡啶类化合物。以乙酰乙酸乙酯,芳香酸为起始原料,分别经胺化、烷基化反应,再与芳香醛缩合关环得到最终目标化合物,并对其体外抑制HBV的活性进行试验。结果合成了未见文献报道的全新二氢吡啶类化合物13个,经1HNMR和MS确定了结构,部分化合物显示了对HBV DNA复制的抑制作用。化合物6f表现出较强的抑制病毒复制活性,体外活性优于阳性对照药拉米夫定。结论二氢吡啶类化合物做为一类全新结构的抗HBV化合物,值得进行深入研究。     

以SAH水解酶为靶位的抗病毒筛选模型的建立与应用

目的　建立SAH水解酶体外抗病毒筛选模型。方法　由大鼠肝经分级硫酸铵沉淀及各种柱层析 (DEAE5 2 ,羟基磷灰石及SephadexG 10 0 )分离 ,纯化SAH水解酶。用同位素标记底物 ,以合成方向建立酶活性测定及抑制剂筛选方法。结果　纯化的SAH水解酶在SDS PAGE电泳上呈单一蛋白带 ,表现相对分子质量为 45 0 0 0 ,其底物腺苷的米式常数值为 (6 32± 0 17) μmol L。已知SAH水解酶抑制剂 S DHPA的IC50 为 7 6 μmol L。用消旋及位置异构体DHPA证实S DHPA抑制SAH水解酶活性的结构特异性很强。用此模型筛选不同结构化合物 42个 ,未发现抑制活性强于S DHPA的化合物。结论　由大鼠肝提纯SAH水解酶 ,并建立了体外模型 ,可用于抗病毒化合物筛选及酶抑制剂动力学研究     

S-9-(2,3-二羟丙基)腺嘌呤类似物的合成及其对S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶的抑制活性

为了寻找高效、低毒的抗病毒剂，本文通过用腺嘌呤及嘧啶碱基与３氯２甲基丙烯缩合合成６个ＤＨＰＡ类似物的中间体５ａ，５ｂ，６～８ａ和８ｂ。应用ＯｓＯ４催化，在Ｎ甲基吗琳Ｎ氧化物氧化下对烯键进行邻位双羟化，合成了５个ＤＨＰＡ类似物１～４ａ，ｂ。对化合物５ａ，５ｂ，６～８ａ，８ｂ的１ＨＮＭＲ数据进行了初步总结。对４个ＤＨＰＡ类似物测定了它们对Ｓ腺苷Ｌ高半胱氨酸水解酶（ＳＡＨ）的抑制活性，其中化合物１的ＩＣ５０为１１ｍｍｏｌ·Ｌ－１，其余化合物均无抑制活性。     

黄芩甙对流感病毒神经氨酸酶的抑制作用

目的：观察黄芩提取物黄芩甙对甲型流感病毒神经氨酸酶的抑制作用。方法：应用荧光测定法进行体外酶活性测定。结果：黄芩甙对我国分离的甲型流感病毒粤防72-243的神经氨酸酶有抑制作用,其半数有效抑制浓度（IC50）为（49.60±1.07）μg/mL。结论：黄芩甙对我国分离的甲型流感病毒神经氨酸酶具有抑制活性的作用。     

高通量荧光底物HIV-1蛋白酶模型的建立

目的应用荧光方法建立、优化、评价艾滋病病毒1型(HIV-1)蛋白酶抑制剂高通量筛选模型,并用于大规模样品筛选。方法将p100w表达质粒转化E.coli细菌细胞,使其表达包涵体形式的HIV-1蛋白酶融合蛋白,制备纯化自剪切后成熟的HIV-1蛋白酶。通过测定Km值及已知HIV蛋白酶抑制药的IC50对酶进行鉴定。优化酶反应体系,评价模型的可靠性。建立、比较HPLC酶切分析法及荧光底物法两种测定酶活性方法。结果建立了高通量HIV-1蛋白酶筛选模型,经优化减少酶及底物用量,降低了成本。在模型可靠性评价中,Z因子达到0.786以上。在对9000个微生物发酵产物样品的筛选中,验证了方法的可应用性,并获得阳性菌株41个。结论所建立的荧光方法高通量筛选模型稳定可靠,效率比传统的HPLC酶切分析法提高,适用于大规模筛选HIV-1蛋白酶抑制剂。     

"17997"对无环鸟苷耐药毒株致兔单纯疱疹性角膜炎疗效的观察

目的 :17997为由云南省土壤中分离的一株放线菌产生的广谱抗病毒抗生素 ,在细胞培养内对HSV1、HSV2、HIV1、VZV及CoxB3均有显著抑制活性 ,其体内外抗HSV活性优于无环鸟苷〔1〕。方法 :本实验采用经ACV选择 2 5代产生的ACV耐药株感染兔角膜 ,观察 17997对此毒株致兔角膜炎的疗效 ,行病毒分离 ,计算病毒滴度 ,并与 0 1?V组及赋形剂组比较。结果 :17997对由ACV耐药的HSV1致兔角膜炎有明显疗效 ,减轻角膜病变程度 ,减少排毒数量 ,缩短平均治愈时间。结论 :与ACV相比 ,统计学上有显著性差异 (P <0 0 5 )。     

儿茶素衍生物对人免疫缺陷病毒逆转录酶及DNA聚合酶的抑制作用

在体外观察绿茶提取物(GTE)及其中3种成份──没食子酰表没食子儿茶素(EG-CG)、没食子酰表儿茶素(ECG)及表没食子儿茶素(EGC)对克隆的人免疫缺陷病毒1型逆转录酶(HIV-1 RT)、鸭乙型肝炎病毒复制复合体逆转录酶(DHBV RCs RT),单纯疱疹病毒1型DNA聚合酶(HSV-1 DNAP)及牛胸腺DNA聚合酶α(CT DNAPα)活性的抑制作用,结果4种化合物的IC_(50)浓度分别为EGCG0.0066μmol/L,ECG0.084μmol/L、GTE0.1μg/ml和EGC7.2μmol/L。动力学研究发现EGCG对HIV-1 RT的外源性模板(rA)·(dT)_(12-18)为混合型抑制,对底物dTTP为非竞争性抑制。牛血清白蛋白可显著降低儿茶素衍生物对HIV-1RT的抑制作用。     

S-9-(2,3-二羟丙基)腺嘌呤类似物的合成及其对S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶的抑制活性

为了寻找高效、低毒的抗病毒剂,本文通过用腺嘌呤及嘧啶碱基与3-氯-2-甲基丙烯缩合合成6个DHPA类似物的中间体5a,5b,6～8a和8b。应用OsO₄催化,在N-甲基吗琳-N-氧化物氧化下对烯键进行邻位双羟化,合成了5个DHPA类似物1～4a,b。对化合物5a,5b,6～8a,8b的¹HNMR数据进行了初步总结。对4个DHPA类似物测定了它们对S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶(SAH)的抑制活性,其中化合物1的IC₅₀为1.1mmol·L^-1,其余化合物均无抑制活性。     

新型核苷衍生物十八烷氧乙基替诺福韦酯的体内外抗乙型肝炎病毒作用研究

目的 评价新型核苷衍生物十八烷氧乙基替诺福韦酯(ODE-TFV)在体外及体内的抗乙型肝炎病毒的活性并研究其改善肝脏病理的作用.方法 分别以乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌2.2.15细胞和DHBV感染的1日龄北京鸭为体外和体内模型,评价ODE-TFV抑制乙型肝炎病毒复制的活性.结果 2.2.15细胞培养法实验结果显示,ODE-TFV抑制HBV DNA复制的IC50值为(0.38±0.18)μmol/L,抑制活性较阳性药TFV-DF和3TC分别强约18倍和13倍;ODE-TFV 100 mg/kg和200 mg/kg组,在给药7d和停药3d显示有显著性的DHBV-DNA抑制活性(P＜ 0.01、P＜0.05);在鸭体内模型中,ODE-TFV 100 mg/kg和200 mg/kg能够明显改善DHBV引起的肝细胞坏死和炎细胞浸润,有一定量效关系.结论 ODE-TFV不仅在2.2.15细胞内对HBV-DNA有抑制活性,而且能有效地抑制鸭体内DHBV-DNA的复制,并具有改善肝脏病理的作用.     

单纯疱疹病毒1型对抗生素17997的耐药及交叉耐药研究

目的 体外训练单纯疱疹病毒1型（HSV－1）对抗生素17997的耐药突变及体内、外研究抗生素17997与阿昔洛韦（ACV）的交叉耐药。方法 HSV－1在抗生素17997或ACV的存在下连续传代，选择一定代数测定HSV－1野株及训练株的IC50。用HSV－1的ACV耐药株感染兔用膜造模，分别用抗生素17997或ACV局部给药治疗，以局部病损及病毒分离判断疗效。结果 HSV－1在抗生素17997存在下连传41代仍保持对抗生素17997的敏感性，未产生耐药变株；但HSV－1在ACV存在下，仅传一代，就发生耐药变株。抗生素17997与ACV无交叉耐药。抗生素17997对HSV－1 ACV耐药株实验感染角膜炎有明显治疗效果，可减轻病损，降低病毒排出量；阳性对照药ACV无任何疗效。结论 体外HSV－1对抗生素17997不易产生耐药。抗生素17997与ACV体内、外均无交叉耐药。