运用siRNA建立稳定低表达IGF1R基因的肝癌细胞株的实验研究

目的运用siRNA技术在肝癌细胞株中建立稳定低表达人胰岛素样生长因子1类受体(IGF1R)基因的细胞株。方法构建包含封闭IGF1R基因的真核表达载体pSUPER-IGF1R-siRNA,转染SMMC7721和Hep3B细胞,G418筛选表达稳定的细胞株。通过RT-PCR、Western-blot分析与鉴定IGF1R mRNA和蛋白及cyclin D1、cyclinB1蛋白的表达,并绘制细胞生长曲线。结果在SMMC7721和Hep3B细胞中成功建立低表达IGF1R基因的细胞株,其生长明显减慢(P<0.05),且其cyclinD1表达亦明显下降(P<0.05)。结论pSUPER-IGF1R-siRNA能抑制SMMC7721和Hep3B细胞的生长。     

114例阑尾炎的超声诊断分析

阑尾炎为外科常见的疾病，是临床最常见的急腹症之一。既往诊断多以临床表现、实验室检查及物理诊断等为主要依据，缺乏比较客观的影像学诊断方法，而阑尾炎的早期诊断，对于手术时机的选择及预后至关重要一^[1]。本文分析114例阑尾炎的超声图像特点，评价超声对该病的诊断价值。     

一种简便的大鼠肝脏星状细胞分离培养方法及鉴定

目的 探索简单经济的肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)分离培养方法,提高实验效率.方法 取SD大鼠,行肝脏门静脉插管,用链酶蛋白酶、Ⅳ型胶原酶灌注,消化.细胞悬液经Percoll密度梯度离心液分离,台盼蓝染色鉴定细胞活性,Desmin抗体免疫组化鉴定纯度.结果 HSCs得率为(2.35...     

siRNA封闭IGF1R增加人肝癌细胞对丝裂霉素敏感性的研究

目的:探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor receptor,IGF1R)的短发夹环RNA质粒(pSUPER-siRNA-IGF1R)增加人肝癌细胞株SMMC7721对丝裂霉素诱导细胞凋亡的作用及可能的机制。方法:设计并合成特异性靶向IGF1R的siRNA片段并构建pSUPER-siRNA-IGF1R表达质粒,将其转染SMMC7721细胞,通过G418筛选出稳定株。丝裂霉素处理后,通过CCK-8法检测肝癌细胞对化疗药物敏感性的影响,流式细胞术检测各组细胞凋亡指数,Western印迹检测凋亡相关基因的变化。结果:丝裂霉素诱导细胞凋亡的作用明显增强,凋亡指数明显升高(P<0.05)。实验组野生型p53蛋白,bax蛋白表达比对照组明显上调,而bcl-2蛋白表达明显下降。结论:构建的pSUPER-siRNA-IGF1R具有RNA干扰作用,并能增强丝裂霉素诱导的细胞凋亡。     

肝内门-体分流在大鼠肝缺血/再灌注损伤中的作用

目的探讨肝内门-体分流（IPSS）在大鼠肝缺St／再灌注（I／R）损伤中的作用和机制。方法健康雄性SD大鼠12只，作右侧颈动脉、颈静脉插管，开腹后，经回结肠静脉作门静脉插管，分别用以输血、输液、给药、留样、检测等。随机分为2组（每组6只）。假手术组（对照组）：术中只分离肝周围韧带，不作肝门阻断及再灌注。I／R组：进行45min的部分肝门阻断及60min的再灌注。待I／R组再灌注60min后，2组于相同时点经门静脉输注D-山梨醇（10mmol／L，0．2ml／min），同时取颈动脉、门静脉、肝静脉血各1ml待测山梨醇浓度。电磁血流量计测定门静脉血流量（PVF）、肝动脉血流量（HAF）。根据颈动脉、门静脉、肝静脉的山梨醇浓度及PVF、HAF，计算肝山梨醇摄取率、功能性肝血流量（FHBF）和肝内门-体分流量（IHSF）。结果与对照组相比，I／R组肝山梨醇摄取率和FHBF减少，IHSF增加（P〈0．01）。结论肝I／R过程中，IPSS开放、FHBF减少可能与再灌注损伤有关。     

缺血再灌注肝一氧化氮合酶活性变化的观察

目的探讨大鼠缺血再灌注肝一氧化氮合酶的变化及其意义。方法健康雄性SD大鼠24只，门静脉插管、肝静脉插管、胆道插管，切取肝，建立大鼠离体肝灌注（IPRL）模型。大鼠随机分为4组（每组6只）：①热缺血对照组，肝切取后，不作冷保存，立即进行灌注；②冷保存6h组，肝切取后作冷保存，保存6h后进行灌注；③冷保存12h组，肝切取后作冷保存，保存12h后进行灌注；④冷保存24h组，肝切取后作冷保存，保存24h后进行灌注。IPRL采用恒温灌注，经门静脉插管灌注pH7．4、38℃的Krebs—Bttlbring buffer液30min。观察胆汁分泌，检测肝静脉流出液中自蛋白（ALB）含量，测定肝组织内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、ATP酶（ATPaSe）、超氧化物歧化酶（SOD）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、丙二醛（MDA）等指标。结果大鼠肝NOS发生了明显的变化，但肝组织NO、ET-1没有显著变化，ATPase、SOD、XOD、MDA的代偿也是有限的。再灌注过程中，各组大鼠肝均有胆汁分泌。肝静脉引流液中ALB含量无差异。结论NOS的变化是反映缺血再灌注损伤的敏感指标。     

小儿发热的辨证治疗(陈芝圃医生儿科临床经验)

一、小儿发热的一般特点小儿脏腑娇嫩,卫外机能不足,对环境适应和抗病的能力均较成人为差,故发热以表、热、实证多见。小儿气血未充,表邪易于内传、恶化;较易出现表里同病,夹痰、夹食、夹惊以及肺热痰盛,呕吐腹泻,甚至惊厥昏迷等兼证或变证。“温邪上受,首先犯肺,逆传心包”的逆传趋向更较明显。由于脾胃运化弱,易致宿食停滞,退热康复过程中,因饮食不当也易使发热复燃,称为“食复”。但小儿生机蓬勃,康复能力较强,诊断及时,治疗、护理得当,恢复也常较快。故临诊应善于应变,因势利导,始易收功。二、辨证要点辨证应结合不同疾病,发展阶段、年龄体质、兼证、季节及临证变化,运用辨证基本原则、方法,综合分析。以八纲辨证为指导,借助卫气营     

骨髓间充质干细胞对异种T淋巴细胞增殖的影响及其机制

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对异种混合T淋巴细胞增殖的影响及其机制.方法 采用密度梯度离心法分离豚鼠MSCs;免疫组织化学法检测MSCs膜表面CD45和CD44的表达;流式细胞术检测MSCs周期;CCK-8法检测和绘制MSCs的生长曲线;观察MSCs和其培养上清对体外异种淋巴细胞混合培养的影响.结果 MSCs膜表面CD45表达阴性、CD44表达阳性;分析MSCs周期显示,MSCs中20%左右处于S期、G2期和M期,其余80%左右均处于G0期和G1期.MSCs和其培养上清均能明显抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应(P<0.05),加入白细胞介素2(IL-2)能逆转MSCs的抑制作用(P<0.05).结论 MSCS的鉴定可根据细胞形态.膜表面标志物来确定.MSCS及其培养上清对异种淋巴细胞混合培养的增殖反应有显著的抑制作用.     

经阴道彩色多普勒超声诊断子宫腺肌瘤

目的：探讨经阴道彩色多普勒超声技术（TVCDS）对子宫腺肌瘤的诊断与鉴别诊断价值。方法：对46例患者进行术前经腹超声和TVCDS检查，并与术后病理结果对比分析。结果：46例术前TVCDS与术后对照，超声诊断符合率93%，超声特点子宫腺肌瘤无包膜，内部回声多呈粗大颗粒状，后方常伴有放射状细淡声影；其内多见星点闪烁状彩色 血流信号，频谱显示低速高阻动脉或静脉低速血流。结论：TVCDS能清晰地反映子宫腺肌瘤的超声特征，在同子宫肌瘤的鉴别上有较好的可比性。     

B超诊断肝硬化继发肝癌、肋骨转移伴病理性骨折1例

患者,男,55岁。主因发现右胸壁包块1月余,近日增大伴疼痛就诊。无外伤史,查右肋缘上方可触及一中等硬度包块,表面无红肿,触之轻压痛。应用B超该部位高频扫查:可探及6.5 cm×4.5 cm×2.2 cm的