用荧光强度反映Cbfa1活性成骨细胞模型的构建

目的构建稳定表达由6OSE2启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的MG63细胞株,并筛选出能反映Cbfa1活性的细胞株。方法合成6OSE2启动子的序列,并将其构建到T载体中;然后通过双酶切得到启动子片段;与去除CMV启动子的报告基因载体pEGFP-N1的酶切片段连接,构建真核表达载体;并转染到MG63细胞系,经G418筛选得到了稳定转染6OSE2-EGFP基因的MG63细胞株。用不同浓度的IGF-I和VD3处理,通过EGFP荧光强度分析,ALP活性测定,筛选出能够响应IGF-I和VD3的细胞株。结果构建了pUC-6OSE2扩增载体和p6OSE2-EGFP真核表达载体,通过稳定转染以及IGF-I、VD3筛选获得一株荧光强度随IGF-I和VD3处理而增强的细胞株-OSE-MG63。结论构建了能反应Cbfa1活性的成骨细胞模型,为进一步研究微重力对Cbfa1的转录活性及信号传导途径的影响奠定了基础。     

Neurolab任务中啮齿类动物实验概况分析

上世纪60年代以来，前苏联、俄罗斯、美国和欧盟等的科学家进行了许多空间动物实验研究工作，探讨了太空中微重力、辐射、噪声等对生物有机体的影响。Neurolab是美国在1998年4月17日至5月3日进行的一项空间飞行任务。它是在空间实验室（spacelab）进行一项生命科学任务，主要研究微重力对神经系统的作用，所以被称为Neurolab（神经实验室）。这标志着神经系统发育成为空间生命科学研究的一个新方向。     

空间飞行MG63细胞重力敏感新miRNA HN22的鉴定与功能分析

目的筛选空间飞行引起的MG63成骨细胞差异表达新miRNA并进行功能分析。方法对空间飞行后的MG63成骨细胞small RNA(sRNA)进行测序及生物信息学分析,得到空间飞行导致显著变化的新miRNA。利用地面回转模拟微重力效应实验验证其表达变化情况;采用miRNA转染分析其对成骨细胞分化的影响;采用多种miRNA靶基因预测软件综合预测其靶基因并检测其潜在靶基因的表达情况;通过GO注释和Panther pathway进行靶基因功能分析。结果新miRNA HN22在空间飞行和地面回转模拟微重力条件下均发生显著表达变化;HN22转染显著提高成骨分化相关基因表达。靶基因预测结果分析显示HN22可影响成骨细胞Wnt信号通路与钙黏蛋白信号通路。Wnt信号通路中的Wnt5a与HN22的表达趋势相反,是其潜在的靶基因。结论HN22可响应微重力变化,并靶向Wnt信号通路中的Wnt5a与钙黏蛋白信号通路影响成骨细胞分化。     

尾吊影响大鼠比目鱼肌Dystrophin表达分布以及血清乳酸脱氢酶活性

背景:抗肌萎缩蛋白Dystrophin在肌肉运动性损伤时易发生改变。目的:观察模拟失重效应对大鼠比目鱼肌抗肌萎缩蛋白Dystrophin表达、分布及血清乳酸脱氢酶活性的影响。方法:采用大鼠后肢尾吊模拟失重效应模型,分别在尾吊1,4,7,10,14d分离SD大鼠比目鱼肌并提取血清进行检测。结果与结论:随着尾吊时间的延长,大鼠肌纤维横截面积减小;肌膜上Dystrophin呈现弥散性分布的趋势,甚至出现Dystrophin断裂现象;Dystrophin mRNA表达下降。同时尾吊7d,大鼠血清乳酸脱氢酶活性升高。提示失重引起的肌萎缩,伴随着Dystrophin mRNA的表达下降和蛋白分布弥散性变化,而乳酸脱氢酶活性变化提示失重性肌萎缩可能与肌损伤的发生有关。     

体外诱导骨髓间质干细胞向心肌细胞的分化

目的研究在体外5-氮胞苷诱导骨髓间质干细胞定向心肌向分化的条件。方法取成年SD大鼠胫骨/股骨骨髓,分离并培养骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)。原代第3天用不同浓度5-氮胞苷作用不同时间。用免疫组化方法鉴定心肌肌钙蛋白(TnT)的表达,并通过RT-PCR鉴定GATA-4和β-MHC的表达。结果诱导后BMSCs细胞增生趋于停滞,10d可见细胞变成长梭状,20d细胞排列出现方向性,有TnT阳性细胞出现,并表达GATA-4和β-MHC。随着诱导药物5-氮胞苷浓度的增加,免疫细胞化学染色TnT阳性细胞增多,且表达更多的GATA-4和β-MHC,至5×10-5mol/L时基本达到峰值。5-氮胞苷对BMSCs的持续性诱导并不能明显增加免疫细胞化学染色TnT阳性细胞数量和GATA-4、β-MHC的表达。结论5-氮胞苷诱导后BMSCs可向心肌细胞分化,是临床心肌细胞成形术理想的供体细胞。     

回转模拟失重对心肌成纤维细胞生长因子及ERK信号传导的影响

目的研究回转模拟失重条件下,心肌成纤维细胞中某些生长因子表达与分泌的变化,以及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路的活化状态.方法通过新生大鼠原代培养获取心肌成纤维细胞,利用水平回转器模拟失重效应,对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子β1(TGFβ1)的表达进行蛋白质印迹(western blotting)分析,以放射免疫检测方法测定细胞培养上清液中血管紧张素II(Ang II)浓度的变化;利用western blotting对ERK1/2及磷酸化ERK1/2分别进行检测并分析其活化状态. 结果与对照组比较,回转后心肌成纤维细胞的bFGF表达增加,TGFβ1表达没有明显变化,Ang II分泌增加;ERK1/2表达总量增加,但其磷酸化水平下降.结论不同的生长因子对回转模拟失重有不同的响应;作为生长因子的重要下游信号通路,ERK1/2的活化受到抑制.     

稳定转染COL1A1-EGFP基因的ROS17/2.8细胞株的建立

目的 构建稳定表达由COL1A1启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的ROS17／2．8细胞株。方法 用PCR方法从大鼠基因组DNA中扩增出长为3．6Kb的COL1A1(Ⅰ型胶原α1链基因)启动子，并克隆到T载体；然后将COL1A1启动子分段酶切，获得不同长度的启动子片段；与报告基因EG—FP相连接，构建成真核表达载体；随后转染ROS17／2．8细胞系，再用G418筛选。结果 得到了稳定转染COL1A1-EGFP基因的ROS17／2．8细胞株。结论 这些细胞株的建立为研究微重力对COL1A1启动子活性及成骨相关基因表达的影响奠定基础。     

失重对IGF-I及整合素信号通路影响的研究进展

胰岛素样生长因子-I(IGF-I)是属于胰岛素家族的一类多肽.整合素是一类普遍存在于细胞表面的跨膜糖蛋白,参与细胞与细胞、细胞与细胞外基质的相互作用.研究证实整合素在IGF-I信号通路中具有重要作用.重力影响IGF-I信号级联和整合素的表达,但详细机制还不是很清楚.重力与整合素、IGF-I关系十分密切.在不同的重力条件...     

失重对IGF-I及整合素信号通路影响的研究进展

胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)是属于胰岛素家族的一类多肽。整合素是一类普遍存在于细胞表面的跨膜糖蛋白,参与细胞与细胞、细胞与细胞外基质的相互作用。研究证实整合素在IGF-Ⅰ信号通路中具有重要作用。重力影响IGF-Ⅰ信号级联和整合素的表达,但详细机制还不是很清楚。重力与整合素、IGF-Ⅰ关系十分密切。在不同的重力条件下,它们的关系正在成为重点和热门的研究对象。本文就IGF-Ⅰ的信号通路、整合素信号通路以及失重对整合素以及IGF-Ⅰ信号通路的影响进行综述。     

骨髓来源成体干细胞在体内外向心肌细胞分化的特性

目的：概述骨髓来源的成体干细胞在体内外心肌向分化的研究进展。 资料来源：应用计算机检索Medline1980-01／2005-10相关骨髓来源的干细胞心肌向分化方面的文献，检索词“bonemarrow，stemcells,cardiomyoeyte，differentiation”，并限定文献语言种类为English。 资料选择：对资料进行初审，选取包括骨髓来源的干细胞心肌向分化的文献，开始查找全文。纳入标准：①骨髓来源的干细胞在体内外分化为心肌细胞的潜能。②骨髓来源的干细胞心肌向分化的影响因素、可能机制和临床实验进展。排除标准：重复研究和综述类文献。 资料提炼：共纳入20篇符合标准的关于骨髓来源的干细胞心肌向分化的文献。 资料综合：骨髓来源的成体干细胞在体内外分化为心肌细胞的潜能及其影响因素、改善心脏功能的可能机制、临床实验进展以及种子细胞筛选等为当前热点问题。目前主要采用5-氮胞苷、共培养技术和含有胰岛素、地塞米松和抗坏血酸的条件诱导培养基诱导骨髓间质干细胞心肌向分化。骨髓干细胞向心肌细胞分化调节包括基因和环境两大调控因素。新近空间生命科学研究结果发现。力学因素也影响骨髓干细胞心肌向分化。 结论：骨髓间质干细胞在体内外都显示出向心肌细胞分化的特性，并能改善心脏功能，具有治疗心肌疾病的更大潜力。