釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞合成蛋白的影响

目的：检测釉基质蛋白作用下牙周膜成纤维细胞合成蛋白的变化，分析釉基质蛋白促进牙周组织再生的作用。方法：实验于2004—04／08在第四军医大学口腔医院组织工程实验室完成。选取11～14岁儿童因正畸需要拔除的无牙周病及龋病的健康新鲜前磨牙，锐利刀片刮除牙根颈部1／3牙龈及牙周膜，采用全牙胶原酶消化法培养获得牙周膜成纤维细胞，经免疫细胞化学检测证实为外胚间充质细胞。取第3代细胞用于实验，分为2组：对照组为含10mL／L新生牛血清的低糖DMEM培养液，实验组为100mg／L釉基质蛋白，用含10ml／L新生牛血清的低糖DMEM培养液配制。将第3代人牙周膜成纤维细胞制备成密度为1&;#215;10^4／mL的细胞悬液，接种人预先放置有细胞爬片的6孔板中，24h后按实验分组更换诱导液。逐日倒置显微镜下观察细胞形态。第3，7天利用免疫组化方法和图像分析技术检测两种细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、牙骨质附着蛋白的表达。结果：①细胞形态学观察：加入诱导因子初期细胞形态无明显变化，随时间延长，实验组细胞突起逐渐变短，与对照组相比有明显差异。②免疫细胞化学检测结果：对照组骨涎蛋白、骨桥蛋白呈弱阳性到阳性表达，实验组与对照组相比，骨涎蛋白、骨桥蛋白均呈现不同程度胞浆着色加深，与作用时间成正比。对照组细胞骨粘连蛋白基本为阴性表达，而实验组细胞第3天时即检测到了骨粘连蛋白的表达，且随时间的延长染色加深。未经釉基质蛋白处理的牙骨质附着蛋白抗体为阴性表达，经过釉基质蛋白作用第3，7天均检测到牙骨质附着蛋白抗体的弱阳性表达，胞浆着色呈淡棕黄色。设立的空白对照和阴性对照均未见着色。③釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞合成骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的影响：与对照组比较，实验组第3，7天骨涎蛋白和骨桥蛋白均明显上调（184．31&;#177;5．67，168．20&;#177;6．93；181．42&;#177;4．99，163．91&;#177;5．86；213．02&;#177;5．40．194．8l&;#177;5．06；211．12&;#177;5．59，182．06&;#177;6．66；P均〈0．01），骨粘连蛋白对照组未表达，实验组第3天时检测到表达；实验组第7天骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白上调幅度均明显高于第3天（163．91&;#177;5．86，168．20&;#177;6．93，P〈0．05；182．06&;#177;6．66，194．81&;#177;5．06，P〈0．01；196．73&;#177;5．47，204．67&;#177;5．12，P〈0．01）。结论：釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的作用，随时间延长这种促进作用愈明显；并能诱导细胞表达牙骨质附着蛋白。釉基质蛋白在一定浓度下可使人牙周膜成纤维细胞向成骨、成牙骨质样细胞分化。     

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞合成蛋白的影响

目的:检测釉基质蛋白作用下牙周膜成纤维细胞合成蛋白的变化,分析釉基质蛋白促进牙周组织再生的作用。方法:实验于2004-04/08在第四军医大学口腔医院组织工程实验室完成。选取11～14岁儿童因正畸需要拔除的无牙周病及龋病的健康新鲜前磨牙,锐利刀片刮除牙根颈部1/3牙龈及牙周膜,采用全牙胶原酶消化法培养获得牙周膜成纤维细胞,经免疫细胞化学检测证实为外胚间充质细胞。取第3代细胞用于实验,分为2组:对照组为含10mL/L新生牛血清的低糖DMEM培养液,实验组为100mg/L釉基质蛋白,用含10ml/L新生牛血清的低糖DMEM培养液配制。将第3代人牙周膜成纤维细胞制备成密度为1×104/mL的细胞悬液,接种入预先放置有细胞爬片的6孔板中,24h后按实验分组更换诱导液。逐日倒置显微镜下观察细胞形态。第3,7天利用免疫组化方法和图像分析技术检测两种细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、牙骨质附着蛋白的表达。结果:①细胞形态学观察:加入诱导因子初期细胞形态无明显变化,随时间延长,实验组细胞突起逐渐变短,与对照组相比有明显差异。②免疫细胞化学检测结果:对照组骨涎蛋白、骨桥蛋白呈弱阳性到阳性表达,实验组与对照组相比,骨涎蛋白、骨桥蛋白均呈现不同程度胞浆着色加深,与作用时间成正比。对照组细胞骨粘连蛋白基本为阴性表达,而实验组细胞第3天时即检测到了骨粘连蛋白的表达,且随时间的延长染色加深。未经釉基质蛋白处理的牙骨质附着蛋白抗体为阴性表达,经过釉基质蛋白作用第3,7天均检测到牙骨质附着蛋白抗体的弱阳性表达,胞浆着色呈淡棕黄色。设立的空白对照和阴性对照均未见着色。③釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞合成骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的影响:与对照组比较,实验组第3,7天骨涎蛋白和骨桥蛋白均明显上调(184.31±5.67,168.20±6.93;181.42±4.99,163.91±5.86;213.02±5.40,194.81±5.06;211.12±5.59,182.06±6.66;P均<0.01),骨粘连蛋白对照组未表达,实验组第3天时检测到表达;实验组第7天骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白上调幅度均明显高于第3天(163.91±5.86,168.20±6.93,P<0.05;182.06±6.66,194.81±5.06,P<0.01;196.73±5.47,204.67±5.12,P<0.01)。结论:釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的作用,随时间延长这种促进作用愈明显;并能诱导细胞表达牙骨质附着蛋白。釉基质蛋白在一定浓度下可使人牙周膜成纤维细胞向成骨、成牙骨质样细胞分化。     

体外培养的人牙囊细胞矿化相关标志物的表达

目的 体外培养人牙囊细胞,探讨牙囊细胞是否具成骨、成牙骨质细胞表型特征,是否可作为牙骨质再生的种子细胞。方法 酶消化联合组织块法获得人牙囊细胞,免疫酶细胞化学染色技术检测其Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的表达,RT-PCR技术检测细胞的骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶的表达。矿化诱导并连续培养牙囊细胞,行Von kossa染色检测体外矿化形成情况。结果 免疫组化结果:牙囊细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白呈不同程度的阳性表达;RT-PCR结果显示骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶表达。经矿化诱导后的牙囊细胞在20d时可形成矿化结节,von Kossa染色阳性。结论 牙囊细胞具有成骨细胞、成牙骨质细胞的部分特性,体外培养的人牙囊细胞具有分泌合成矿化组织的能力,可试将其作为牙周组织再生的种子细胞。     

釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞矿化相关蛋白的影响

目的通过检测釉基质蛋白（Enamel matrix proteins,EMPs）作用于体外培养牙周膜成纤维细胞,对细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素、牙骨质附着蛋白（Cementum attachment protein,CAP）表达及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性的影响,探讨EMPs促进牙周组织再生的作用机制。方法酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞（Human periodontal ligament fibroblast,hPDLF）用100mg/L的EMPs诱导,镜下逐日观察细胞形态变化,在3天、7天两个时间点利用免疫组化方法和图像分析技术检测和分析诱导条件作用后细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素表达的影响,检测细胞牙骨质附着蛋白的表达。利用ALP法检测诱导后细胞成骨活性的变化。结果 100mg/L的EMPs对hPDLF具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素的作用,随时间延长这种促进作用愈明显;EMPs作用hPDLF 3天即表达牙骨质附着蛋白;EMPs可促进hPDLF碱性磷酸酶活性的增强。结论 EMPs在一定浓度下可促使hPDLF向成骨、成牙骨质样细胞分化。     

DSA治疗颈动脉体瘤的临床应用研究

目的 探讨数字减影血管造影（DSA）在颈动脉体瘤治疗中的作用。方法 总结经病理证实的颈动脉体瘤13例，研究DSA在其中的表现。结果 颈动脉体瘤为富血供型；DSA能清楚显示肿瘤血管细节及肿瘤与相邻血管的整体关系；术前行超选择性动脉插管栓塞治疗有助于减少术中出血及术后并发症。结论 颈动脉体瘤的DSA表现特征明显，影象直观，与血管关系明确，对诊断制订治疗方案及外科手术具有不可替代的价值。     

富血小板血浆PRP对骨髓基质细胞BMSCs碱性磷酸酶活性和总蛋白含量的影响

目的 :体外观察富血小板血浆 (Platelet -RichPlasma ,PRP)对自体骨髓基质细胞 (BoneMarrowStro malCells ,BMSCs)碱性磷酸酶活性和总蛋白含量的影响。方法 :利用免疫组化染色 ,酶动力学法和考马斯亮蓝法探讨PRP对BMSCs碱性磷酸酶活性和总蛋白含量的影响。结果 :PRP组和矿化诱导组碱性磷酸酶染色强阳性 ,对照组为阴性 ;碱性磷酸酶活性测定 ,PRP组明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,但与矿化诱导组比较 ,无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;细胞总蛋白含量PRP组也明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,但略低于矿化诱导组 ,两实验组比较无统计学差别 (P>0 .0 5 )。结论 :PRP能促进骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性 ,并提高细胞总蛋白含量。     

釉基质蛋白和骨形成蛋白对牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的:通过检测釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)、骨形成蛋白-2(BMP-2)作用下对促进牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响,探讨EMPs、BMP-2促进牙周组织再生的作用机制及其之间的相互影响.方法:酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Haman periodontal ligament cells,HPDLC)用不同浓度的因子进行诱导,在3d、7d两个时间点,利用MTT法检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化.结果:BMP-2、EMPs单独应用均可促进人PDLCs增殖,BMP-2作用强于EMPs.而联合组与100～200μg/L BMP-2、200 mg/L EMPs无明显差异,与100 mg/L EMPs差异显著.结论:BMP-2、EMPs单独或联合应用均可促进人PDLCs增殖,BMP-2作用强于EMPs.联合组中起主要作用的是BMP-2,EMPs未能增加BMP-2的作用.     

釉基质蛋白影响人牙囊细胞生物学特性的实验研究

目的:观察釉基质蛋白(EMPs)对牙囊细胞(HDFC)增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:利用酶消化联合组织块培养法获得HDFC。以一定浓度的EMPs作用于牙囊细胞,通过四唑盐比色法和酶动力学方法检测对细胞增殖及ALP活性的变化。结果:EMPs对HDFC具有促增殖作用,其中100mg/L的EMPs的促增殖作用最显著,其促增殖作用可持续至第7天;100mg/L的EMPs可上调ALP活性。结论:EMPs可促进HDFC增殖,影响其ALP活性,可能在牙囊细胞的诱导分化中起重要作用。     

人牙囊细胞的分离培养和生物学特性

目的：应用酶消化法体外培养人牙囊细胞并研究其生物学特性。方法：分离合法引产人胚胎乳牙胚的牙囊组织，消化法获得人牙囊细胞，HE染色观察细胞形态、免疫组织化学染色技术检测波形丝蛋白、Ⅰ型胶原表达，RT—PCR检测细胞的骨钙素、骨涎蛋白、碱性磷酸酶的表达。结果：原代培养的人牙囊细胞呈成纤维细胞形态，有部分一上皮成分混杂，经纯化后可排除；在牙囊细胞中Ⅰ型胶原和波形丝蛋白的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中；RT—PCR结果显示骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶表达。结论：体外培养的人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性，具有合成Ⅰ型胶原的能力；不同程度表达Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、碱性磷酸酶等矿化相关蛋白。