HPLC法测定湖南产半夏药材中核苷成分含量的研究

目的:建立HPLC法同时测定湖南产半夏药材中尿苷、鸟苷和腺苷含量的方法。方法:采用Agilent ZORBX SBC18色谱柱,以水(A)-甲醇(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0m L/min,检测波长254nm,柱温30℃,进样量20μL。结果:尿苷、鸟苷和腺苷的线性范围分别为4.8~48μg/m L、5.2~52μg/m L、0.6~6μg/m L,加样回收率分别为99.86%、99.28%、100.09%,RSD分别为1.16%、0.54%、0.98%。3批生半夏尿苷、鸟苷和腺苷的平均含量分别为0.1162mg/g、0.1432mg/g、0.0183mg/g。结论:该方法准确性高、专属性强,能快速测定湖南产半夏中3种指标性成分的含量,为更好地控制湖南产半夏药材的质量并评价其药用价值提供依据。     

骨髓基质细胞-牙根-珊瑚羟基磷灰石复合体体内再植的初步观察

目的:评价体外构建的骨髓基质细胞(BMSCs)、珊瑚-羟磷灰石支架(CHA)、牙根复合体植入体内后牙根周组织的再生情况。方法:体外分离纯化的狗BMSCs分别与牙根及CHA支架共培养形成复合体后植入体内生长,16周后取材,组织切片观察牙根周组织的再生情况。结果:实验组较对照组所不同的是:有更趋成熟、致密的牙槽骨生成;牙根与牙槽骨之间形成了清晰的软组织间隙———类牙周膜结构,主要由纤维组织、毛细血管组成。结论:BMSC-CHA-牙根复合物植入体内后有效促进牙周组织的再生;组织工程学方法促进牙周组织再生具有可行性。     

rhTGF-β1、rhBMP-2和rhbFGF单独或者联合应用对BMSC的ALP活性和钙化能力影响

目的 :研究重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)、重组人转化生长因子 β1(rhTGF β1)和重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP 2 )单独和联合使用 ,对骨髓基质细胞 (BMSC)碱性磷酸酶 (ALP)活性和钙化能力影响。方法 :体外培养大鼠骨髓基质细胞 ,分别用一定浓度的rhTGF β1(5 μg/L)、rhBMP 2 (2 0 0 μg/L)和rhbFGF(1μg/L)单独或者联合应用 ,测定第 12、14天的碱性磷酸酶活性 ;加入矿化诱导液 ,用Vonkossa染色 ,检测 10、2 0和3 0天的钙化情况。结果 :rhBMP 2可增强BMSC的ALP活性 ,rhbFGF和rhTGF β12种因子单独或者联合使用抑制BMSC的ALP活性 ,rhTGF β1和rhBMP 2以及rhbFGF和rhBMP 2联合使用时 ,抑制BMSC的ALP活性 ;3种生长因子联合使用时 ,抑制BMSC的ALP活性 ,研究发现f b组和b组可显著促进BMSC向成骨细胞转化 ,增强细胞的矿化能力 ;其它各组对BMSC向成骨细胞转化、矿化能力无显著作用。结论 :生长因子rhBMP 2(2 0 0 μg/L)单独应用和rhbFGF(1μg/L)在此浓度下结合使用可以提高体外培养骨髓基质细胞的钙化能力。     

头颈部放疗患者的口腔黏膜脱落细胞微核计数的初步研究

目的:探讨头颈部放疗患者的口腔黏膜脱落细胞微核数。方法:随访1978～2001年接受过头颈部放疗的患者30例、2002年接受放疗的头颈部肿瘤患者30例和健康志愿者30例,对口腔黏膜脱落细胞进行微核计数。结果:正常对照组、放疗前患者和放疗后患者三者间的脱落细胞微核数差异无统计学意义(P>0.05)。放疗结束时患者的脱落细胞微核数高于放疗前患者和放疗后患者的脱落细胞微核数,且有统计学意义(P<0.01)。结论:反映微核数的改变局限于肿瘤区和放射线对口腔黏膜上皮损伤的可逆转性,并提示脱落细胞微核数可用于放疗后患者肿瘤继发的监测。     

人牙周膜细胞克隆与牙骨质瘤细胞克隆体外钙化的比较

目的：研究瘤性成牙骨质细胞和牙周膜细胞克隆体外不同的生物学特性。方法：对瘤性成牙骨质（CTM）细胞和牙周膜（PDL）细胞进行克隆化培养，分别观察细胞的钙化形态并检测培养液中骨钙素（OC）的含量。结果：其钙化的形式有两种，一种为弥散型钙化，一种为结节状钙化。PDL组结节状钙化为细胞钙化总数的16％，而CTM组结节样钙化为钙化总数的62％（P＜0.01)。两种钙化形式的克隆细胞16d时的OC含量有明显的不同。结论：结节状钙化形式可能是成牙骨质细胞钙化的特有形式之一，这对今后牙周细胞的移植和牙周组织工程的研究有一定的指导意义。     

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获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)简称艾滋病,是一种由病毒引起的传染性疾病,1981年首次被正式命名。我国已将其列入乙类法定传染病,并成为国境卫生监测传染病之一。艾滋病的特征是后天经感染人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)而发生免疫缺陷,有多种症状,具有传播速度快、波及地区广、病死率高的特点。     

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞合成蛋白的影响

目的：检测釉基质蛋白作用下牙周膜成纤维细胞合成蛋白的变化，分析釉基质蛋白促进牙周组织再生的作用。方法：实验于2004—04／08在第四军医大学口腔医院组织工程实验室完成。选取11～14岁儿童因正畸需要拔除的无牙周病及龋病的健康新鲜前磨牙，锐利刀片刮除牙根颈部1／3牙龈及牙周膜，采用全牙胶原酶消化法培养获得牙周膜成纤维细胞，经免疫细胞化学检测证实为外胚间充质细胞。取第3代细胞用于实验，分为2组：对照组为含10mL／L新生牛血清的低糖DMEM培养液，实验组为100mg／L釉基质蛋白，用含10ml／L新生牛血清的低糖DMEM培养液配制。将第3代人牙周膜成纤维细胞制备成密度为1&;#215;10^4／mL的细胞悬液，接种人预先放置有细胞爬片的6孔板中，24h后按实验分组更换诱导液。逐日倒置显微镜下观察细胞形态。第3，7天利用免疫组化方法和图像分析技术检测两种细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、牙骨质附着蛋白的表达。结果：①细胞形态学观察：加入诱导因子初期细胞形态无明显变化，随时间延长，实验组细胞突起逐渐变短，与对照组相比有明显差异。②免疫细胞化学检测结果：对照组骨涎蛋白、骨桥蛋白呈弱阳性到阳性表达，实验组与对照组相比，骨涎蛋白、骨桥蛋白均呈现不同程度胞浆着色加深，与作用时间成正比。对照组细胞骨粘连蛋白基本为阴性表达，而实验组细胞第3天时即检测到了骨粘连蛋白的表达，且随时间的延长染色加深。未经釉基质蛋白处理的牙骨质附着蛋白抗体为阴性表达，经过釉基质蛋白作用第3，7天均检测到牙骨质附着蛋白抗体的弱阳性表达，胞浆着色呈淡棕黄色。设立的空白对照和阴性对照均未见着色。③釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞合成骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的影响：与对照组比较，实验组第3，7天骨涎蛋白和骨桥蛋白均明显上调（184．31&;#177;5．67，168．20&;#177;6．93；181．42&;#177;4．99，163．91&;#177;5．86；213．02&;#177;5．40．194．8l&;#177;5．06；211．12&;#177;5．59，182．06&;#177;6．66；P均〈0．01），骨粘连蛋白对照组未表达，实验组第3天时检测到表达；实验组第7天骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白上调幅度均明显高于第3天（163．91&;#177;5．86，168．20&;#177;6．93，P〈0．05；182．06&;#177;6．66，194．81&;#177;5．06，P〈0．01；196．73&;#177;5．47，204．67&;#177;5．12，P〈0．01）。结论：釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的作用，随时间延长这种促进作用愈明显；并能诱导细胞表达牙骨质附着蛋白。釉基质蛋白在一定浓度下可使人牙周膜成纤维细胞向成骨、成牙骨质样细胞分化。     

纳米壳聚糖-胶原纤维支架的生物相容性

背景:新型仿生纳米壳聚糖-胶原支架在纳米水平上与细胞外基质结构相似,其是否可促进骨髓间充质干细胞的黏附及生长,并显示良好的相容性?目的:评价新型纳米壳聚糖-胶原支架与SD大鼠骨髓基质干细胞的体外相容性.设计:单一样本观察.单位:暨南大学附属第一医院骨科.材料:实验于2007-03/2007-07在暨南大学附属第一医院实验中心完成.选取10只4周龄雌性SD大鼠,SPF级,体质量200 g,由广东省实验动物中心提供(许可证号为SCXK(粤)2003-0002).实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.纳米壳聚糖-胶原纤维支架由理工学院生物材料研究室提供.方法:①分离培养SD大鼠骨髓基质干细胞,流式细胞分析法对细胞表面抗原进行检测.②聚电解质共凝聚技术制作纳米壳聚糖-胶原纤维支架.③取生长良好的P3代,与纳米壳聚糖-胶原纤维支架体外联合诱导培养,以单纯纳米壳聚糖支架材料为对照,通过细胞贴壁率、生长曲线、细胞活力及周期、扫描电镜观察综合评价材料与细胞的相容性. 主要观察指标:①骨髓间充质干细胞分离培养后进行流式细胞表面抗原标志鉴定.②纳米材料及细胞复合2,4,8 d后扫描电镜观察细胞与材料相容情况.③细胞对材料黏附率的测定.④细胞与材料复合5 d检测细胞周期及活力.结果:①细胞表面抗原标志检测结果:CD29表达为90.86%,CD106表达为73.38%,CD44表达为82.61%,CD34表达为0.76%,CD45表达为0.60%.②细胞与材料相容情况:扫描电镜可见纳米壳聚糖-胶原纤维支架为多孔的三维立体结构,材料内部形成大小不一的大孔和互连的小孔,彼此相互交通.应用质量法测得的孔隙率为85%～90%,孔径为50～300 μm,平均150 μm.骨髓基质干细胞复合到纳米壳聚糖-胶原纤维支架后2 d,细胞呈球形散在分布;4 d后细胞呈梭形,延展爬行且有伪足与材料表面锚靠;8 d时细胞增殖,相互间融合,并有大量的细胞外基质分泌,大部分材料颗粒被覆盖.③细胞对材料黏附率:细胞-支架复合物共培养2及6 h,骨髓基质干细胞在纳米壳聚糖-胶原纤维支架的黏附率均高于单纯纳米壳聚糖支架.④纳米壳聚糖-胶原纤维支架与单纯纳米壳聚糖支架的细胞、细胞周期特点比较:纳米壳聚糖-胶原纤维支架细胞活力为96.67%,细胞周期G0-G1为90.81%,G2-M为0.52%,S为8.66%,G2/G1为1.81.单纯纳米壳聚糖支架细胞活力为95.27%,细胞周期G0-G1为87.14%,G2-M为9.69%,S为4.16%,G2/G1为1.80.结论:纳米壳聚糖-胶原支架与骨髓基质干细胞有良好的组织相容性,可用来做组织工程生物材料.     

手掌尺动脉畸形切除术后足背静脉移植修复血管缺损一例报道

动静脉畸形是人体最常见的先天性血管病变之一,以面颊部、四肢为好发部位[1],手掌部血管畸形极其少见,好发于男性患者[2],多为先天性,长期剧烈运动或过重体力劳动则为后天血管畸形增大诱发因素。血管畸形增大后,易突发出血,