Nurr1基因在大鼠体外培养骨髓基质细胞的表达

目的 :为获得高效表达孤儿核受体 (orphannuclearreceptor,Nurr1)基因的骨髓基质细胞。 方法 :采用分子克隆技术 ,构建携带Nurr1基因的重组腺相关病毒 (adeno associatedvirus,AAV)载体 ;与包装质粒 pAAV RC和辅助质粒phelper一起用磷酸钙法转染包装细胞HEK2 93制备具有感染活性的AAV Nurr1病毒粒子 ;用病毒上清液感染原代培养的大鼠骨髓基质细胞 (Marrowstromalcells,MSCs) ,并用免疫细胞化学方法检测阳性细胞。 结果 :经酶切鉴定和DNA测序 ,得到了序列正确的重组pAAV Nurr1;感染HT10 80细胞进行病毒滴度测定 ,每mL病毒贮存液可达 10 12 个阳性细胞 ;获得了Nurr1阳性的骨髓基质细胞 ,阳性率在 6 0 %以上。结论 :重组AAV携带的Nurr1基因能够在MSCs中表达 ,本文为进一步探讨将该细胞用于帕金森病基因治疗的可能性研究奠定了基础。     

家兔皮质脊髓束投射神经元的分布

家兔皮质脊髓束投射神经元的分布首都医学院解剖学教研室高秀来，徐群渊，马国胜，陈亚亮，郎晓燕［解剖学报，１９９４，２５（１）：１３～１７］将辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）分别注入家兔脊髓单侧颈、胸、腰等不同节段，以显示皮质脊髓束投射神经元的分布。结果表明，大...     

脑胶质瘤基因治疗——HSV_1-tk基因表达载体的构建

脑胶质瘤基因治疗———ＨＳＶ１ ｔｋ基因表达载体的构建首都医科大学北京神经科学研究所田竟生杨慧刘天承徐群渊近年来，应用ＨＳＶ１ ｔｋ基因／ＧＣＶ药物系统行基因脑肿瘤治疗是一种有应用前景的基因治疗方案，但是也存在不少难点。为了实现ＨＳＶ１ ｔｋ基因能在...     

α-突触核蛋白在正常大鼠脑神经元中的亚细胞定位

目的研究α-突触核蛋白（α-synuclein）在正常大鼠脑神经元中的亚细胞定位,为阐明其正常的生理功能提供线索.方法超小金标记结合银增强免疫电镜技术.结果α-突触核蛋白不仅存在于神经细胞的突触前终末,也见于神经细胞的轴突、胞浆与核中.在突触前终末,α-突触核蛋白的分布与突触小泡无明显的关系.在神经细胞核内,靠近核膜部分α-突触核蛋白的分布较为密集,细胞核中心部位α-突触核蛋白则较为稀疏.在胞浆和轴突中,α-突触核蛋白散在分布.另外,在线粒体中也有该蛋白表达.结论α-突触核蛋白广泛分布于神经元的各个部位,可能参与神经元的多种生理功能.     

大鼠脊髓边缘细胞初级传入特点的研究

将６只Ｗｉｓｔｅｒ大鼠脊髓Ｌ（１～３）段双侧后根切断，并将ＨＲＰ注入小脑内。术后分别在２、３、４天灌杀，取出Ｌ（１～３）脊髓节段，对ＨＲＰ标记的脊髓边缘细胞及其与溃变末梢的突触联系进行了电镜观察。结果表明，在脊髓边缘细胞的胞体或近侧树突表面发现有少量的溃变终末。根据溃变终末内小泡的形状，它们属于Ｓ型和Ｆ型即球形和扁平形小泡。根据溃变终末的外形又可分为圆型和细长型。按不同术后存活期，这些终末显示的溃变特点有所不同。术后２天溃变终末主要呈电子密度增高象；术后３天溃变终末中的线粒体肿胀、溶解以及部分突触小泡溶解；术后４天的溃变终末内则表现突触小泡和线粒体大部溶解消失。各类溃变末梢周围均可见到有胶质细胞突起包绕或充填。本研究进一步证明，作为脊小脑前束起始细胞的脊髓边缘细胞所接受的外周传入从性质和特点上均与脊小脑后束的起始细胞有所不同。这些结构的不同说明脊髓边缘细胞在向小脑输送信息中有其特殊功能。     

家兔小脑中央核向脊髓直接投射的研究

本实验将WGA-HRP分別注入家兔脊髓一侧的颈、胸、腰等不同节段,逆行追踪小脑中央各核向脊髓的直接投射。结果表明,小脑中央核的标记神经元恒定地见于颈段(C_1～C_4)注入例动物,而未见于下颈段(C_6～C_8)和胸腰段注入例动物。标记神经元仅出现于注入侧对侧的小脑顶核及间位核的尾侧部。研究结果提示,家兔小脑顶核及间位核的尾侧部,有向颈髓的直接越边投射。本结果为进一步探讨小脑对躯体运动的调节功能提供形态学基础。     

嗅球切除对成年大鼠侧脑室外侧壁神经生发活动的影响

目的研究成年大鼠嗅球切除后侧脑室外侧壁（SVZ）的形态学变化，探讨嗅球对成年大鼠SVZ神经生发活动的影响。方法建立成年SD雄性大鼠右侧嗅球切除模型，并分别存活2、4、8、12周；利用Nissl染色、多唾液酸神经细胞黏附分子（PSA—NCAM）、GFAP免疫组织化学染色的方法，分别观察成年SD大鼠嗅球切除后存活不同时间两侧SVZ的组织结构和免疫组织化学特征；计数模型动物脑两侧SVZ细胞总数及PSA-NCAM、GFAP免疫阳性细胞数，并进行统计学分析。结果嗅球切除4周后，嗅球切除侧SVZ的细胞总数增加，PSA—NCAM免疫阳性细胞数增加，但GFAP免疫阳性细胞数没有明显变化；SVZ的细胞总数及PSA-NCAM免疫阳性细胞数的增加有从SVZ嘴侧向尾侧蔓延的趋势。结论嗅球切除后在SVZ仍有新生神经元不断产生，说明SVZ的神经生发活动可能并不依赖于嗅球的存在。     

损毁单侧黑质-纹状体通路的大鼠SVZ、纹状体和黑质神经前体细胞的变化

研究成年大鼠脑室下区 (SVZ)神经前体细胞 (neural precursors)在黑质 -纹状体通路损伤后的反应 ,本研究用 6-羟多巴胺单侧纹状体注射以损毁黑质 -纹状体通路 ,损毁 10 d后腹腔注射 Brd U ,连续 4d,每日两次 ;在 SVZ、纹状体和黑质部位用免疫组化方法检测 Brd U、nestin以及 GFAP阳性细胞。结果显示 :(1) 6-羟多巴胺损毁黑质 -纹状体通路后 ,伤侧 SVZ的 Brd U阳性细胞数明显增多 ,并成簇分布 ;nestin和 GFAP阳性细胞数也增多 ,但以 GF AP阳性细胞增多明显 ;(2 )伤侧纹状体可见大量 Br-d U、GFAP以及少量 nestin阳性细胞分布 ,而健侧只有少量 GFAP阳性细胞 ;(3 )伤侧可见 Brd U阳性细胞在 SVZ和纹状体之间呈条带样分布 ;(4 )伤侧黑质除酪氨酸羟化酶阳性神经元减少外 ,未见 Brd U、GFAP和 nestin阳性细胞表达。上述结果表明 ,6-羟多巴胺损毁黑质 -纹状体通路后 ,SVZ神经前体细胞活动增强 ,有向纹状体迁移的趋势。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-4对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和神经分化的影响

目的探究胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP4)对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖和神经分化的影响。方法通过全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,免疫荧光检测IGFBP4在P1、P4、P6、P8和P10 BMSCs的表达。取第4代BMSC细胞,分为单纯培养基组和添加IGFBP4组,用CCK8试剂盒检测单纯培养基组和添加IGFBP 4组吸光度值A450 nm。再将BMSC细胞分为3组:neurocult组、EGF+b FGF组、EGF+b FGF+IGFBP4组,每组连续测定7 d,每天6个平行孔,诱导培养基Neuro Cult培养再分别添加EGF+b FGF和EGF+b FGF+IGFBP4,诱导其向神经祖细胞分化,免疫荧光染色检测Nestin和Sox-2表达,并观察神经球数量和细胞增殖活性。结果成功获得原代大鼠BMSCs,可见CD105、CD44和CD90表达,IGFBP4的表达随培养代数而增加,外源IGFBP4能明显抑制BMSCs的增殖(P0.05)。经诱导BMSCs形成的神经球样结构表达Nestin和Sox-2,细胞增殖活性升高(P0.05)。结论 IGFBP4能抑制BMSCs的增殖,促进其向神经祖细胞分化。