IgG4相关性脑膜病变

目的探讨Ig G4相关性脑膜病变的临床病理学特征以及诊断与鉴别诊断要点。方法与结果男性患者,49岁,临床表现为头痛近2年并进行性加重1月余,头部MRI显示左侧顶叶占位性病变,增强扫描可见"脑膜尾征",手术完整切除病灶。组织学形态,左侧顶叶硬脑膜和脑实质大量胶原纤维增生,其间散在灶状细胞浸润,多为较成熟的浆细胞,部分浆细胞内可见匀质红染的Russell小体,其间散在淋巴细胞和少量嗜酸性粒细胞,局部可见小灶状坏死,间质纤维母细胞和小血管增生,未见包膜,病变累及周围脑组织。免疫组织化学染色,浆细胞胞质弥漫性表达Ig G和Ig G4(60%)、胞膜表达CD38和CD138,淋巴细胞胞膜表达CD3、CD4或CD20。血清Ig G4为1.05 g/L。最终病理诊断为(左侧顶叶)Ig G4相关性脑膜病变可能性大。术后予抗感染、抗癫、营养支持治疗,症状明显好转,出院后未按医嘱定期随访。结论 Ig G4相关性脑膜病变临床少见,且缺乏典型临床表现和特征性影像学改变,术前诊断与鉴别诊断困难,血清Ig G4水平升高是其诊断的重要线索,明确诊断仍需依靠特征性的组织学形态和免疫组织化学表型。     

Sox2 下游调控蛋白的筛选及其对大肠癌细胞增殖、迁移的影响

目的分析大肠癌细胞转录因子Sox2对大肠癌细胞增殖及迁移的影响。方法应用SDS-PAGE蛋白电泳,结合考马斯亮
蓝及镀胺银染色方法,筛选差异蛋白。质谱分析筛选Sox2下游调控蛋白,应用定量PCR（QPCR）及Western blotting验证和鉴定
下游调控蛋白。Cell Counting Kit-8（CCK8）观察Sox2对大肠癌细胞增殖的影响,Transwell实验观察Sox2对迁移能力的影响。
结果应用蛋白组学技术成功筛选出Sox2下调蛋白S3a、上调蛋白ENO1、Gama-actin。QPCR和Western blotting显示,Sox2过
表达后,大肠癌细胞S3a表达减少（P<0.005）,ENO1表达增加（P<0.05）,Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖及迁移能力提高
（P<0.05）;Sox2干扰后,大肠癌细胞S3a表达增加（P<0.05）,ENO1表达减少（P<0.001）,Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖
及迁移能力下降（P<0.05）。结论Sox2负向调控S3a的表达,正向调控ENO1的表达,促进大肠癌细胞增殖及迁移。
     

靶向肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定

摘要：目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞
表面标记物CD133 细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133 的特异性短
肽。应用夹心EL ISA选择出结合较强的克隆。提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序
列推导出多肽序列。通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况。结果4 轮液相筛选后,与
CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍。经ELISA 鉴定的20个噬菌体单克隆中,
有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义。经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨
基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强。结论成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和
人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子
的高亲和力多肽的方法切实可行。     

CD133+人脐血造血祖细胞的干性维持培养及鉴定

摘要：目的从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养。方法通过免疫磁珠法分选出人脐带血中
的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞。采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通
过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索最佳干性维持培养方法。结果通过免疫磁珠
法可以从人脐带血中分选出80%以上的CD133+造血祖细胞。采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得
到有效扩增。而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳。结论利用免
疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性。
     

Has-mir-335 慢病毒表达载体的构建及其靶基因初步鉴定

构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因。方法 扩增包含hsa-miR-335前体序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体;扩增包含RASA1 3’UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut;检测萤火虫荧光素值(F)和海肾荧光素值(R),以R/F表示相对荧光素酶活性。流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株,利用荧光定量PCR检测miR-335及其靶基因RASA1 的表达,Western Blot检测RASA1蛋白水平的表达。结果 质粒双酶切以及测序鉴定 PLVTHM-miR335、psiCHECK-2-RASA1、psiCHECK-2-RASA1-Mut重组质粒构建成功。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞中miR-335与 RASA1表达趋势成负相关。双荧光素酶报告基因分析证实hsa-miR-335能够作用于RASA1的3’UTR。稳定过表达miR-335的细胞中,miR-335的表达明显高于对照组和未处理组,蛋白质水平有所下降。结论 成功构建了PLVTHM-miR-335慢病毒重组质粒,构建过表达miR-335的细胞株SW620,初步证实RASA1是miR-335的靶基因。     

云南省农村人群肠道蠕虫感染现状调查

[目的]了解云南省现阶段农村人群肠道蠕虫的感染情况,为制定肠道蠕虫感染的防治策略提供依据.[方法]采用现况调查,对10个县的10个自然村的居民,使用统一调查表进行个人卫生习惯、寄生虫感染等情况的调查. [结果]共调查971名居民,查出7种肠道寄生虫感染.总感染率为42.95%,其中钩虫、蛔虫、绦虫、鞭虫、蛲虫、肠吸虫、肺吸虫感染率分别为23.69%、19.88%、2.99%、2.99%、1.85%、0.62%、0.10%;不同地区、民族、年龄人群各虫种感染率差异有统计学意义(P<0.05). [结论]该省农村人群肠道寄生虫病流行程度有所下降,仍需对不同地区农村人群采取有针对性的预防控制措施.     

Has-mir-335慢病毒表达载体的构建及其靶基因鉴定

接要：目的构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因。方法扩增包含hsa-miR-335前体
序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体;扩增包含RASA1 3’UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至
psiCHECK-2载体,并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut;检测萤火虫荧光素值(F)和海肾荧光素值(R),
以R/F表示相对荧光素酶活性。流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株,利用荧光定量PCR检测miR-335及其靶基因
RASA1的表达,Western Blot检测RASA1蛋白水平的表达。结果质粒双酶切以及测序鉴定PLVTHM-miR335、psiCHECK-2-
RASA1、psiCHECK-2-RASA1-Mut重组质粒构建成功。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞中miR-335与RASA1表达趋势成负
相关。双荧光素酶报告基因分析证实hsa-miR-335能够作用于RASA1的3’UTR。稳定过表达miR-335的细胞中,miR-335的表
达明显高于对照组和未处理组,蛋白质水平有所下降。结论成功构建了PLVTHM-miR-335 慢病毒重组质粒,构建过表达
miR-335的细胞株SW620,初步证实RASA1是miR-335的靶基因。
     

miR-101 对结直肠癌细胞SW620 生物学特性的影响

目的探讨miR-101对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用CCK8法、平板克隆形成实验、细 胞周期、细胞凋亡方法分别检测SW620、GV209-SW620、mir101-SW620 3组细胞的生物学特性。结果CCK8比色法结果显示 SW620各组细胞生长时间水平差异具有显著性（F=4152,P<0.001）,细胞增殖能力组间有显著性差异（F=10220,P<0.001）。平 板克隆实验的结果为SW620 空白对照组、GV209-SW620 对照组和mir101-SW620 组的克隆形成率分别为：44.33%、48.17%、 35.17%。SW620 3组细胞间的克隆形成能力差异具有统计学意义（F=73.015,P<0.001）。细胞周期分析发现SW620各组细胞 间其G1、S、G2/M 期存在着统计学差异（F=45.974,P=0.019;F=122.139,P=0.000;F=115.171,P=0.000）。除了SW620 和 GV209-SW620 的G2 期分布无统计学差异外（P=0.441）,其余各组G1、G2/M 期均有统计学差异（P<0.01）;与SW620 和 GV209-SW620相比,mir101-SW620组出现了明显的G1和G2/M期周期阻滞。细胞凋亡实验发现SW620细胞各组细胞凋亡率 差异有统计学意义（F=6115,P<0.001）,各组进行两两比较,均有统计学差异（P<0.01）。与SW620空白细胞组、GV209-SW620 对照组相比,miR-101过表达组细胞凋亡率增加（P<0.05）。结论miR-101能够抑制结直肠癌细胞SW620的增殖,细胞G1和G2/ M期周期阻滞及促进细胞凋亡。