肝癌差异表达基因EEG1的克隆和鉴定

目的:筛选和克隆肝癌和正常肝组织差异表达的基因片段,以探讨肝癌的发病机制.方法:应用mRNA差异显示技术(mRNA-DD),比较肝癌及正常肝组织基因表达的差异,对获得的差异基因片段进行克隆、测序,测序结果提交GenBank数据库中进行同源性分析,并对其中一条有明显差异的基因用半定量RT-PCR分析该基因在正常肝组织及肝癌组织中的表达情况.结果:凝胶扫描显示在500-600 bp处有一条差异片段,差异条带经酶切图谱分析证实重组质粒是目的克隆,将片段测序结果与GenBank数据库进行同源性比较发现该片段与已知基因EEG1高度同源(99%).RT-PCR结果显示在肝癌组织中EEG1 mRNA的表达水平明显低于正常肝癌组织(P=0.001).结论:EEG1基因在肝癌组织中的表达明显低于正常肝组织,提示EEG1基因的表达下调可能与肝癌的发病有关.     

EGCG对肝纤维化大鼠TGF-β1和CTGF表达的影响

目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)的抗肝纤维化作用及其机制.方法:运用腹腔注射CCl4构建大鼠肝纤维化模型,观察EGCG对大鼠肝纤维化的影响.运用HE染色、Massion三色染色检测肝纤维化的变化;生化检测血清丙氨酸转移酶(ALT)及天冬氨酸转移酶(AST);同时检测肝组织的羟脯氨酸、还原型谷胱甘肽(GSH)和硫代巴比妥酸反应底物(TBARS)含量.免疫组织化学法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;分别运用RT-PCR和Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白质表达.结果:EGCG对CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度具有显著的抑制作用.EGcG对肝细胞具有显著的保护作用,与纤维化模型组比较,EGCG干预组血清ALT、AST水平降低(138.4±45.8vs 234.6±63.2,96.4±20.5 vs 186.2±36.6,均P<0.05).EGCG显著抑制肝组织α-SMA的表达.EGCG通过抑制TBARS的形成和提高GSH含量,显著改善CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏的氧化状态.同时EGCG显著抑制肝组织TGF-β1及CTGF的mRNA和蛋白质的表达(均P<0.05).结论:EGCG能够显著抑制肝纤维化的进展,其机制与EGCG改善大鼠肝脏的氧化状态及抑制TGF-β1和CTGF的表达有关.     

不同入肝血流阻断在原发性肝癌切除术中的应用

目的：比较分析不同入肝血流阻断方案在治疗原发性肝癌的效果。方法：选取本院肝胆外科2007年4月-2013年12月所收治肝癌切除病例58例,随机分为第一肝门阻断组（Pringle法）（A组22例）、半肝血流阻断组（B组19例）和保留半肝动脉血流阻断组（C组17例）,分别比较三组患者的手术时间、术中出血量、术后住院时间、血清谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）等肝功指标的水平以及安全性。结果：手术时间上B组较C组和A组明显延长,差异均有统计学意义（P〈0.05）;C组和A组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。术后肝功能及恢复情况B组、C组与A组比较差异均有统计学意义（P〉0.05）。结论：三种不同的入肝血流阻断均能有效地控制出血,半肝血流阻断和保留半肝动脉血流阻断更安全,安全性高;同半肝血流阻断相比,保留半肝动脉血流阻断具有操作相对简单、安全省时的优点。     

人腹膜间皮细胞的改良分离及其鉴定

背景：腹膜间皮细胞作为腹膜的重要组分,分泌多种细胞因子,在参与抗炎、免疫调节、腹膜纤维化等方面起着重要作用,如何获得优质、均一的腹膜间皮细胞成为解决这些问题的关键。 目的：拟建立改良的人腹膜间皮细胞消化培养法。 方法：0.1%胶原酶Ⅰ消化腹部大网膜组织,去除红细胞后用含体积分数为10%胎牛血清的1640培养基培养。在培养过程中以倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8观察培养液对间皮细胞生长的促进作用,透射电子显微镜观察细胞超微结构,激光共聚焦免疫荧光鉴定细胞。 结果与结论：分离培养的细胞为多角形,汇合时呈铺路石样排列,培养细胞的纯度达90%以上;生长良好,迅速,可传代至四五代。透射电子显微镜下见细胞表面大量的微绒毛,免疫荧光显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,白细胞CD45、第Ⅷ因子相关抗原阴性;所有被鉴定特征均符合间皮细胞的特点。结果提示胶原酶Ⅰ消化法是一种简单、高效、重复性高的分离腹膜间皮细胞的方法。     

肝星状细胞与肝癌的研究进展

肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是威胁着人类健康的几大杀手之一,其死亡率仅次于胃癌和食管癌,位居第三位。肝硬化是HCC发生发展的主要危险因素,大量研究表明活化的肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）是肝硬化等慢性肝病发生发展过程中的主要影响细胞。近年来的研究发现HSCs能够向HCC细胞基质浸润,通过促进肝硬化癌变等多种机制参与肝癌的发生发展,在HCC的发生发展过程中扮演着非常重要的作用。     

腹腔镜脾切除治疗特发性血小板减少性紫癜疗效及观测指标

目的：探讨腹腔镜脾切除(LS)治疗特发血小板减少性紫癜（ITP）的疗效。
方法：回顾分析采用腹腔境行脾切除治疗25例ITP患者的临床资料。
结果：所有ITP患者顺利施行LS,包括2例辅助小切口LS,无手术死亡、感染等严重并发症。平均随访3.5年（1～7年）,脾切除术后有效率80.0%（20/25例）,2年有效率72.0%（18/25例）,其中包括2例激素治疗出现胃溃疡大出血导致重度贫血及激素副作用的ITP患者。分析显示脾切除效果与患者年龄有关,≤50岁脾切效果明显优于>50岁的患者(P＜0.05)。术后随访发现脾切术后第7天血小板计数与术后2年复查血小板计数相一致,术后第7天平均血小板计数在脾切除有效者为307×109/L,明显高于脾切除无效的103×109/L（P＜0.05）。患者病程、激素治疗是否敏感、术前血小板计数均与脾切除疗效无关（P>0.05）。
结论：腹腔镜脾切除治疗特发性血小板减少性紫癜安全、可行并且有效,对年龄小于50岁、激素治疗无效或需大剂量激素治疗ITP患者宜积极行腹腔境脾切除术;脾切除时患者年龄、术后第7天血小板计数可能是判断脾切除效疗的有用指标。     

18β-甘草次酸抑制肝癌细胞生长的实验研究

目的:探讨18β-甘草次酸(GA)对肝癌细胞生长的影响。方法:用不同浓度的GA或阿霉素(ADM)处理肝癌细胞(Hepa1-6)及正常肝细胞(AML-12)不同时间后,分析细胞的抑制情况及半数抑制浓度(IC_(50));根据IC_(50),选择合适浓度的GA处理Hepa1-6细胞一定时间后,检测细胞的凋亡情况。结果:低浓度GA对两种细胞增殖均无明显影响,当GA浓度8μg/m L时,对两种细胞的增殖均有明显的抑制作用,且抑制作用随药物浓度升高、作用时间延长而增加;ADM所有浓度对两种细胞的增殖均有抑制作用,且抑制作用随浓度升高而增加,但随时间延长而减弱。GA对Hepa1-6细胞的IC_(50)低于对AML-12细胞的IC_(50),当药物作用48 h时,GA对两种细胞的IC_(50)的差值最大,而ADM对Hepa1-6细胞的IC_(50)在任何时间都高于对AML-12细胞的IC_(50);选择25μg/m L的GA处理Hepa1-6细胞48 h(该条件下,Hepa1-6细胞的增殖抑制率为50%,而AML-12细胞的增殖抑制率为3.8%),Hepa1-6细胞的明显增加,且主要是早期凋亡(P0.05)。结论:GA能够抑制肝癌的生长,其机制可能与诱导肝癌细胞凋亡有关;在治疗肝癌方面,GA可能较ADM更为安全,毒副作用更小。     

心内直视术后患儿的营养护理

合理营养是护理先心病术后患儿的主要措施之一。患儿由ＩＣＵ搬至普通病房后,由于部分患儿家长参与营养护理,常发生由于进食不当而导致或加重体内电解质代谢紊乱、心力衰竭等,患儿常有肝肿大、四肢水肿、胸水、心悸、气短、咳嗽、紫绀等症状。１９９９年我们对４６例行复杂先心病手术的患儿进行规范化营养护理与２４ｈ出入量监控,对患儿术后康复期的体重、每日出入量、伤口愈合情况、术后住院     

小儿先天性心脏病术后疼痛的评估及护理

回顾性分析2002年1月至2004年12月我科116例小儿先天性心脏病术后疼痛的临床护理资料，结合护士CRIES疼痛评价方法和家长疼痛问卷调查，正确评估患儿疼痛，及时观察病情变化，创造好的休养环境，用药物及安抚法、注意力转移和催眠术减少患儿疼痛，为小儿术后顺利康复创造条件。     

小鼠原位肝癌移植模型中髓系来源抑制性细胞的表达

目的 观察小鼠原位肝癌移植模型中髓系来源抑制性细胞(MDSCs)的表达.方法 将10只BALB/c小鼠随机分为两组:正常组和荷瘤组,后组是将H22肝癌细胞注射到肝左外叶,制作小鼠原位肝癌移植模型.10d后处死小鼠.流式细胞术检测两组小鼠外周血、骨髓、脾脏及肝脏组织中MDSCs的表达.结果 荷瘤组小鼠外周血、骨髓和脾脏中的MDSCs比例为[(47.73±6.00)、(71.90±4.30)、(11.21±1.19)％],均明显高于正常组小鼠[(18.33±2.31)、(59.03±4.50)、(5.82±0.58)％];正常小鼠肝组织中MDSCs占肝内白细胞6.5％,荷瘤小鼠肝癌组织、癌旁组织中MDSCs占肝内白细胞分别为43.8％和12.8％.结论 在小鼠原位肝癌移植模型中,MDSCs表达明显上调,为研究MDSCs在肝癌发生发展中的作用提供了良好的动物模型.