知母皂苷A Ⅲ对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究知母皂苷AⅢ对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响。方法:体外培养HUVECs,分别以浓度为0、1、2、4、8μmol/L的知母皂苷AⅢ作用24、48、72 h,通过MTT比色法检测细胞生长程度;倒置显微镜观察细胞形态。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:8μmol/L知母皂苷AⅢ作用24、48、72 h可明显抑制HUVECs增殖,IC50分别为7.2、4.0、2.0μmol/L;随着知母皂苷AⅢ作用时间的延长和浓度的增加,HUVECs数目逐渐减少,细胞开始出现空泡、固缩现象;8μmol/L知母皂苷AⅢ作用于HUVECs,细胞凋亡率为(4.03±0.41)%。结论:知母皂苷AⅢ可明显抑制HUVECs的生长,并诱导部分细胞发生凋亡。     

实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

目的 评价实时荧光核酸恒温扩增技术（simultaneous amplification and testing, SAT）检测沙眼衣原体（CT）核酸试剂盒（RNA恒温扩增）的敏感性和特异性。 方法 对229例临床疑似患者的尿样及拭子标本同时进行SAT检测和“金标准”沙眼衣原体细胞培养检测,检测结果有差异的标本采用PCR方法对拭子标本进行复测,根据实验结果评估SAT技术在尿样及拭子标本检测中的敏感性和特异性。 结果 结合细胞培养和PCR的实验结果作为“扩大金标准”,得出SAT技术对临床拭子标本的检测敏感性为97.1%,特异性为100%;对尿样标本检测的敏感性为89.4%,特异性为99.2%。拭子和尿样标本检测结果的符合率为95.2%,经卡方检验,差异无显著性（χ^{2=3.27,P>0.05）。 结论 SAT技术检测CT试剂盒对拭子及尿样标本敏感性及特异性均较好,适用于临床实验室对CT的检测。}     

化学发光免疫分析法与梅毒螺旋体明胶凝集试验检测梅毒螺旋体特异性抗体的比较

梅毒实验室诊断目前主要依靠血清学试验,国内大部分实验室开展的梅毒螺旋体特异性试验主要以梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)为主.而近20年快速发展的化学发光免疫分析法(CLIA)已广泛应用于各领域,但在梅毒的实验室诊断中的临床应用较少.为此,我们与本市3家实验室,对CLIA法检测梅毒螺旋体抗体结果进行了比对分析,现报告如下.     

聚合酶链反应检测带状疱疹患者外周血和疱液中水痘-带状疱疹病毒

目的:分析聚合酶链反应(PCR)检测外周血在带状疱疹诊断中的临床意义。方法:收集30例初诊的带状疱疹患者的外周血和疱液标本,通过PCR的检测外周血细胞和疱液中带状疱疹病毒,并通过免疫荧光、免疫病理进行验证。结果:PCR检测结果显示,30例患者外周血和疱液中带状疱疹病毒的核酸检测均为阳性。结论:PCR能检测外周血中的水痘-带状疱疹病毒,可用于带状疱疹的实验室诊断。     

抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子单克隆抗体在冠状动脉硬化患者肺炎衣原体感染诊断中的初步应用

目的 制备抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的单克隆抗体,检测冠状动脉硬化患者的外周血单核细胞和冠状动脉瘤斑块中肺炎衣原体特异性抗原.方法 以肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白免疫小鼠,与SP2/0细胞融合后,采用间接ELISA和Western blot筛选阳性杂交瘤细胞,经亚克隆建株;小鼠体内诱生腹水法制备单克隆抗体,用硫酸铵沉淀法对腹水中的单克隆抗体进行纯化,测定其亚类和效价;检测肺炎衣原体标准株以鉴定其特异性.建立间接ELISA方法检测冠状动脉硬化患者外周血单核细胞和冠状动脉瘤斑块标本中的肺炎衣原体抗原.结果 获得4株稳定分泌抗蛋白酶样活性因子重组蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为3F8、7B9、8C4和11B5,其效价分别为1∶28000、1∶16000、1∶38000和1∶12000;经亚类鉴定,3F8和7B9杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体为IgG2b,其它2株均为IgG1.以制备的单克隆抗体建立间接ELISA检测肺炎衣原体抗原,与经典PCR方法的检测结果比较,检出率具有较高的一致性.结论 成功获得了抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的特异性单克隆抗体,能特异地识别天然肺炎衣原体蛋白酶样活性因子抗原,有望应用于冠状动脉硬化患者肺炎衣原体感染的抗原诊断.     

梅毒非特异性类脂质反应素抗体试验操作的改进及应用评价

Objective To estimate the application value of a standard operating procedure (SOP) in the detection of syphilitic anticardiolipin reagin. Methods Clinical laboratories from 9 local hospitals in Shanghai participated the program. Quality control samples with unknown target value were qualitatively and quantitatively examined according to the uniform SOP in these laboratories with the same reagent and facility of horizontal reaction. External quality assessment (EQA) was carried out by using seven serum samples with no, or low (1∶ 128 dilution) to high (1∶1 dilution) concentrations of target before and after the implementation of SOP. The test results were statistically analyzed and the reasons for the detecting error were assessed. Results A total of 388 tests were performed in the 9 clinical laboratories. The total accuracy rate was 93.0%, including 40.2% in the detection of samples with 1 ∶ 8 dilution of target, 49.2% in the detection of samples with 1 ∶ 16 dilution of target, and 3.6% in the detection of samples with 1 ∶ 32 dilution of target. No forward bias was observed in these tests. There was a significant difference in the accuracy rate between the two times of EQA before and after the implementation of SOP (x2 = 4.17, P < 0.05). Conclusions The improved standard procedure for nontreponemal antigen test is beneficial to the decrease of testing error, and may provide a basis for the establishment of SOP and implementation of internal quality assessment.     

白藜芦醇对苯并芘诱导的人皮脂腺细胞炎症因子及相关基因表达的影响

【摘要】 目的 研究白藜芦醇对苯并芘诱导的SZ95人皮脂腺细胞炎症因子及相关基因表达的影响。方法 SZ95人皮脂腺细胞分为对照组、1 × 10-5 mol/L白藜芦醇组、1 × 10-5 mol/L苯并芘组及白藜芦醇 + 苯并芘组。实时荧光定量PCR检测各组SZ95人皮脂腺细胞中白细胞介素1α（IL-1α）、IL-6、芳香烃受体（AhR）、细胞色素酶P450（CYP）1A1、CYP1B1 mRNA表达;Western印迹检测各组p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化水平（磷酸化p38水平/p38水平）和AhR蛋白相对水平;酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中IL-1α、IL-6蛋白表达。多组间均数比较用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 对照组、白藜芦醇组、苯并芘组及白藜芦醇 + 苯并芘组SZ95人皮脂腺细胞IL-1α的mRNA（2.045 ± 0.272、2.058 ± 0.154、3.124 ± 0.094、2.185 ± 0.337）和蛋白（9.132 ± 1.181、9.429 ± 0.771、20.361 ± 0.907、9.917 ± 0.897）表达水平差异均有统计学意义（F值分别为14.662、101.705,P值分别 < 0.01、 < 0.001）,其中白藜芦醇 + 苯并芘组IL-1α mRNA和蛋白相对水平低于苯并芘组（均P < 0.01）。此外,苯并芘组p38磷酸化水平显著高于对照组、白藜芦醇组及白藜芦醇 + 苯并芘组（F = 303.129,均P < 0.000 1）。白藜芦醇 + 苯并芘组AhR、CYP1A1和CYP1B1的mRNA表达较苯并芘组显著下调（t值分别为10.640、33.599、18.327,均P < 0.001）。苯并芘组细胞AhR蛋白表达低于白藜芦醇 + 苯并芘组（P < 0.001）。结论 白藜芦醇可抑制环境污染物苯并芘诱导的SZ95人皮脂腺细胞炎症因子IL-1α表达,该作用可能通过AhR和p38MAPK通路所介导。