胎肝滤液诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化

目的 探讨胚胎肝组织滤液定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为肝细胞的诱导条件,为肝组织工程提供新的种子细胞来源。 方法 在体外培养体系中加入胎肝滤液,模拟体内肝脏微环境,诱导BMSCs向肝细胞定向分化,以免疫细胞化学检测肝细胞标志物;PAS检测糖原表达;靛青绿染色检测转化细胞的分化程度;测定细胞培养上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的含量以检测其功能状态。 结果 BMSCs经胎肝滤液诱导14d时细胞呈现多角形、卵圆形或圆形细胞的特征性改变;甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)免疫反应、PAS反应和吲哚靛青绿(ICG)摄入实验及上清液中ALT、AST、ALP等酶均在诱导的第7天开始出现,AFP和ALB免疫反应在21d时达高峰;PAS反应和ICG摄入实验随着时间的延长而增强;上清液中的各个酶在14d达高峰,之后呈下降趋势。 结论 胎肝滤液可诱导BMSCs形成具有肝细胞形态和功能特点的细胞。     

益气养阴汤对胆石症患者胆汁成分的影响

应用复方益气养阴汤口服,对41例胆道术后出现气阴两亏患者的胆汁某些生化指标进行观察。在胆色素结石组19例中,10例服药前后与对照组9例相比,总胆红素、游离胆红素、钙离子浓度及β-葡萄糖醛酸苷酶活性明显降低(P<0.05～0.01),而胆汁酸明显升高(P<0.05);胆固醇结石的服药组与对照组各11例相比,上述指标除结合胆红素明显降低(P<0.05)、游离胆红素无明显变化(P>0.05)外,其它指标的变化与胆色素结石组相同。另外,两组胆汁四种成分比值显示游离胆红素和胆固醇下降,胆汁酸增高。说明本方对成石性胆汁成分有较明显的影响。     

粘连性肠梗阻的中西医结合治疗和有关中转手术问题的探讨——附165例小结

从1970年10月至1980年12月,我组共收治各类肠梗阻病人222例,其中粘连性肠梗阻165例,为74.32％。现就粘连性肠梗阻中西医结合治疗及有关中转手术问题进行探讨。粘连原因 165例粘连性肠梗阻中,明确记录粘连原因者129例,统计如下:胃手术56例,阑尾手术20例,妇科手术12例,肠道手术10例,胆手术8例,脾切除术7例,胰引流术6倒,肠套叠手术5例,其它腹部手术4例,腹膜结核1例。其中以胃的手术占首位,为43.41％,阑尾炎手术次之,为15.50％。近年来,胃次全切除手术各地     

连接蛋白26在肝细胞癌中的表达及意义

目的:研究Cx26在肝细胞癌及正常肝组织中的表达情况.方法:免疫组化和RT-PCR检测Cx26和PCNA 的表达.结果:①Cx26 mRNA在正常肝组织组和肝癌组的表达水平分别为0.82±0.37和0.38±0.10:Cx26mRNA在HCC高分化组中的表达高于其在低分化组中的表达水平,分别为0.48±0.12和0.21±0.05.②Cx26在所有正常肝组织中均高表达,其在肝癌组织中的阳性率为64.71%,Cx26的表达随着肝癌分化程度的增加而增强.③在肝癌组织中.PCNA-LI在Cx26蛋白阳性表达组和阴性表达组分别为32.72%±4.21%和56.67%±7.21%,Cx26蛋白阳性者的PCNA-LI明显低于阴性者,PCNA表达水平与Cx26蛋白表达呈负相关.结论:①在肝癌组织中,Cx26的表达随着组织分化程度的降低而降低.②Cx26可作为评价肝癌预后的指标之一.     

ABC 转运蛋白在肝细胞癌中的表达及意义*

目的:探讨P-gp、MRP1、BCRP 等ABC 转运蛋白在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:应用RT-PCR 和免疫组织化学方法检测P-gp/MDR1、MRP1、BCRP等mRNA 及蛋白在34例的肝细胞癌、19例癌旁肝组织中的表达。结果:MDR1、MRP1、BCRP等mRNA 在肝癌组的相对表达水平分别为1.15± 0.24、0.64± 0.33、1.07± 0.32,在癌旁肝组织组的相对表达水平分别为0.36± 0.14、0.19± 0.06、0.31± 0.09。MDR1、MRP1、BCRP 在肝细胞癌中低分化组（Ⅲ、Ⅳ级）为1.38± 0.26、0.73± 0.35、1.34± 0.21,在高分化组（Ⅰ、Ⅱ级）分别为0.74± 0.32、0.30± 0.11、0.45± 0.13。P-gp、MRP1、BCRP等的阳性反应产物主要分布于细胞膜和胞浆内;在肝癌组和癌旁肝组织组的阳性表达率分别为82.35% 、58.82% 、79.41% 和42.11% 、26.32% 、36.84% 。P-gp、MRP1、BCRP在肝细胞癌中低分化组（Ⅲ、Ⅳ级）的阳性表达率分别为100% 、81.25% 、100% ,在高分化组（Ⅰ、Ⅱ级）的阳性表达率分别为66.67% 、38.89% 、61.11% 。RT-PCR 及免疫组织化学均显示,P-gp、MDR1、MRP1、BCRP mRNA和蛋白在肝癌组的表达均高于癌旁肝组织组,且在低分化（Ⅲ、Ⅳ级）肝癌组织的表达高于高分化者（Ⅰ、Ⅱ级）,差异有统计学意义（P<0.05）。 MDR1、MRP1、BCRP之间的表达无线性相关。结论:在肝细胞癌中存在原发性多药耐药现象,且多种耐药机制并存。P-gp、MDR1、MRP1、BCRP等与肝细胞癌的耐药有关,在肝癌组的表达高于癌旁肝组织组,且在肝细胞癌中的表达随着肿瘤分化程度的增高而降低,可作为肝细胞癌多药耐药性作用的靶点。      

LRP、GST-π在肝细胞癌中的表达及意义

目的：探讨LRP、GST-π在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：应用RT—PCR和免疫组织化学方法检测LRP和GST-π mRNA及蛋白在34例的肝细胞癌、19例正常肝组织中的表达。结果：LRP和GST-π mRNA的表达在肝癌组为0．53±0．28、0．75±0．19,正常肝组织组为0．22±0．10、0．26±0．12,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组化结果显示,LRP和GST-π的阳性表达率在肝癌组为55．88％、67．65％,在正常肝组织组为21．05％、31．58％,差异有统计学意义（P〈0．05）。LRP、GST-π mRNA和蛋白在肝癌组的表达高于正常肝组织组,且低分化（Ⅲ、Ⅳ级）肝癌组织的表达高于高分化者（Ⅰ、Ⅱ级）（P〈0．05）,LRP与GST-π之间的表达无线性相关。结论：在肝细胞癌中存在原发性多药耐药现象,且多种耐药机制并存。LRP、GST-π在肝细胞癌中高表达,且随着肿瘤分化程度的增高而降低。     

三种因子联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化**

背景：间充质干细胞的生物学特性及影响分化调控因子的研究认为,体外原代培养的间充质干细胞自然分化为肝细胞的比例较低,选择一种合适的诱导剂提高其分化为肝细胞的比例尤为必要。 目的：以肝细胞生长因子、表皮生长因子及成纤维生长因子体外联合,验证其诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2007-08在潍坊医学院实验中心完成。 材料：Sprague-Dawley大鼠40只,由潍坊医学院实验动物中心提供。 方法：采用贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,取传至第3代细胞,设立2组：空白对照组加入含体积分数为10%胎牛血清的L-DMEM培养基;联合诱导组在此基础上,另加入10 µg/L成纤维生长因子、8 µg/L肝细胞生长因子、8 µg/L表皮生长因子。 主要观察指标：倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,免疫荧光染色观察甲胎蛋白及白蛋白的表达,PAS检测糖原的表达,靛青绿摄入情况,酶学检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶的水平。 结果：联合诱导组细胞呈多角形、卵圆形或圆形细胞的特征性改变,空白对照组骨髓间充质干细胞仍保持梭形或纺锤形。联合诱导组培养14 d可见白蛋白和甲胎蛋白免疫反应阳性细胞;诱导7 d时偶见PAS阳性细胞与靛青绿阳性细胞,随诱导时间延长,阳性细胞逐渐增多;诱导14 d时开始检测到谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶的合成,21 d达高峰,之后下降。上述各指标空白对照组细胞均呈阴性。 结论：成纤维生长因子、肝细胞生长因子与表皮生长因子体外联合应用,能够成功诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝样细胞的分化。     

Cx26和Cx43在大鼠胚胎肝发育过程中的时空表达

目的：观察Cx26和Cx43在大鼠胚胎肝发育过程中的时空表达，以了解其在肝脏发育过程中的作用。方法：用E8d-E20d及P1d的SD大鼠，石蜡切片，免疫组化染色，光镜下观察Cx26和Cx43在大鼠发育E1d～P1d过程中的表达。结果：①Cx26在E15d开始表达，此时只有少数体积大、核大的肝细胞呈Cx26阳性反应，阳性反应产物见于肝细胞浆及细胞核。②E16d开始出现少量Cx26呈弱阳性的造血细胞，E17d和E18d反应阳性强度增加。至E20d时反应消失。③E14d开始出现Cx43呈弱阳性的肝实质细胞，E15d～P1d多数肝细胞浆呈Cx43强阳性，P1d少数肝细胞核呈Cx43阳性反应。④E18d～P1d肝内可见呈Cx43阳性的造血细胞。结论：①Cx26与肝细胞的生长分化关系不大。而与肝细胞的技能分化密切相关；Cx43与肝的结构发育和成熟分化相关；Cx26和Cx43均可能与肝内造血细胞与肝实质细胞之间的信息传递有关。②胚胎肝组织中Cx26和Cx43呈不同表达状态，推测可能是由于胚胎肝细胞间、间质细胞间、肝细胞和间质细胞间以及胚胎肝细胞与造血细胞间装配的缝隙连接通讯通道结构有所不同所致。     

两类成石性胆汁生化成分分析

本文通过对20例胆红素与22例胆固醇类结石病人的十二项胆汁生化成分分析和比较,结果胆红素组中的结合胆红素、胆汁酸、钙离子、胆固醇、卵磷脂和总固体均显著和非常显著性地低于胆固醇组(P<0.05～0.001);而β-G活性显著性地高于胆固醇组。其结果可供临床诊治方面参考。     

Wnt信号通路在HepG2细胞株及其克隆形成细胞中表达的异质性

目的:研究Wnt信号传导通路的关键因子β-catenin和COX-2在肝癌细胞株HepG2及其克隆形成细胞中的表达,探讨Wnt信号传导通路在不同增殖能力细胞中表达的异质性.方法:以HepG2细胞为研究对象,采用软琼脂克隆形成实验筛选克隆形成细胞,应用RTPCR、免疫化学和Western blot等技术,检测Wnt信号传...