丝素蛋白/壳聚糖复合纳米纤维膜心脏补片的生物相容性研究

目的 探讨丝素蛋白(SF)/壳聚糖(CS)复合纳米纤维膜对小鼠脂肪间充质干细胞（AD-MSCs）黏附和生长的影响，评估该材料用作心脏补片的可行性。 方法 通过静电纺丝技术制备纤维素纳米纤维底板，用层层自组装技术(LBL)，将SF和CS组装到纤维素纳米纤维表面，得到改性的SF/CS复合纳米纤维膜，用ζ- 电位和X射线光电子能谱(XPS)测定材料的表征。分离培养携带绿色荧光蛋白（GFP）和荧光素酶（Fluc）双重报告基因的小鼠AD-MSCs细胞，并接种于SF/CS复合纳米纤维膜上共培养，用激光共聚焦显微镜(CFM)观察细胞黏附和生长形态，扫描电子显微镜(SEM)观察超微结构，生物发光成像(BLI)及MTT比色法评估AD-MSCs细胞的数量和活性。结果 XPS测定的结果提示SF/CS复合纳米纤维膜构建成功。SEM观察可见纳米纤维直径均一，具有良好的三维多孔结构，细胞在SF/CS复合纳米纤维膜上增殖活跃，形态和生长状态良好。CFM、BLI及MTT比色法的结果提示细胞与SF/CS复合纳米纤维膜共培养后呈三维分布，增殖状态好。 结论 对纤维素纳米纤维用LBL进行改性后可明星促进AD-MSCs的三维生长，SF/CS复合纳米纤维膜是可用于组织工程心肌补片的理想材料。     

白藜芦醇通过抑制细胞凋亡延缓内皮细胞衰老

目的 探讨SIRT1在内皮细胞自然衰老过程中的变化和作用机制。方法 连续培养传代人脐静脉内皮细胞（HUVECs）38代，选取第1、5、10、15、20、25、30和35代细胞做Western blot检测内皮细胞自然衰老过程中SIRT1蛋白含量变化以及Annexin V-FITC法测定内皮细胞凋亡水平变化。选取第25代细胞，给予SIRT1激动剂白藜芦醇（30 μmol/L）干预，β-半乳糖苷酶染色法检测内皮细胞的衰老程度以及Annexin V-FITC法测定内皮细胞凋亡水平。结果 随着代数增加，内皮细胞上的SIRT1蛋白表达逐渐降低（P<0.01），内皮细胞凋亡率逐渐升高（P<0.01）；给予第25代细胞白藜芦醇干预后，内皮细胞上的SIRT1表达升高（P<0.01），β-半乳糖苷酶阳性细胞率降低（P<0.01），凋亡率也降低（P<0.05）。结论 内皮细胞自然衰老过程中，SIRT1的表达会降低；给予白藜芦醇干预后，能逆转内皮细胞的衰老，其作用机制可能与SIRT1降低了内皮细胞凋亡水平有关。     

调控线粒体钙离子摄入蛋白1表达对血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制研究

目的 探讨调控线粒体钙离子摄入蛋白1(MICU1)表达对血管内皮细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的影响及机制。方法 本研究时间为2021年12月至2022年7月。将人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分成对照组和模型组，对照组细胞正常培养，不加任何干预；模型组细胞构建H/R损伤模型，检测各组MICU1 mRNA、蛋白。将HUVECs分成对照组、siCtrl+模型组及siMICU1+模型组，对照组细胞正常培养，不加任何干预；siCtrl+模型组细胞转染对照小干扰RNA后构建H/R损伤模型；siMICU1+模型组细胞转染MICU1小干扰RNA后构建H/R损伤模型。检测各组MICU1蛋白、活性氧（ROS）、NF-κB p65蛋白、炎性因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)]。将HUVECs分成对照组、Ad-Ctrl+模型组及Ad-MICU1+模型组，对照组细胞正常培养，不加任何干预；Ad-Ctrl+模型组细胞感染对照腺病毒后构建H/R损伤模型；Ad-MICU1+模型组细胞感染MICU1腺病毒后构建H/R损伤模型，检测各组MICU1蛋白、ROS、NF-κB p65蛋白、炎性因子（TN...     

生长分化因子-11促进小鼠诱导性多能干细胞向心肌细胞定向分化的研究

目的 明确生长分化因子（GDF）-11对小鼠诱导多能干细胞（miPSCs）向心肌细胞定向分化的促进作用,为心肌再生的细胞生物学治疗提供种子细胞和实验依据。方法 常规培养小鼠miPSCs,分为对照组和GDF-11组。GDF-11组在普通分化培养基中加用10 ng/ml的GDF-11。悬滴法诱导培养形成拟胚体（EBs）,每日观察搏动拟胚体数目。采用实时荧光定量PCR检测多能干细胞标志物Oct-4、心脏中胚层标志物Flk-1、心脏祖细胞标志物Nkx2.5、和心肌特异性标志物cTnT的表达变化。用免疫荧光染色观察心肌结构蛋白cTnI的表达水平。结果 GDF-11组的Oct-4表达水平在诱导分化的第3、7天分别为同期对照组的（0.55±0.31）倍（P<0.01）和（0.41±0.57）倍（P<0.05）;诱导分化的第10天,GDF-11组的Flk-1和Nkx2.5表达相分别为对照组的（2.09±0.8）倍（P<0.05）和（2.47±0.22）倍（P<0.01）;cTnT的表达在分化后第10天和第14天分别为对照组的（1.81±0.19）倍（P<0.01）和（1.61±0.20）倍（P<0.01）;两组均出现了心肌样搏动细胞团,GDF-11组搏动EBs百分比要显著高于对照组（P<0.01）。免疫荧光染色显示,GDF-11组的cTnI阳性率要显著高于对照组（P<0.01）。结论 GDF-1能够显著促进miPSCs的心肌定向分化。