肠道病毒中枢神经系统感染病儿免疫功能紊乱与神经元损害的相关性

目的通过检测肠道病毒（EV）中枢神经系统感染病儿脑脊液中白细胞介素-10（IL-10）、γ-干扰素（IFN-γ）及神经元特异性烯醇化酶（NSE）的水平,探讨EV引起病儿免疫功能紊乱的机制。方法收集2008年1月—2009年1月青岛大学医学院附属医院和滨州医学院附属医院临床诊断为无菌性脑膜炎、脑炎病儿的急性期脑脊液标本100例。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法,检测标本中的EV RNA;应用双抗体夹心ELISA法检测EV感染组和对照组脑脊液中IL-10、IFN-γ及NSE的表达水平。结果 100例急性期病儿脑脊液中,经RT-PCR和二次PCR共获得阳性结果78例（78.0%）;EV感染组IFN-γ的表达水平高于对照组（t=4.24,P〈0.01）,重症组高于轻症组（t=4.13,P〈0.01）;IL-10表达水平低于对照组（t=7.89,P〈0.01）,重症组低于轻症组（t=2.97,P〈0.01）;NSE表达水平高于对照组（t=7.02,P〈0.01）,重症组高于轻症组（t=2.79,P〈0.01）。EV感染组NSE与IFN-γ水平呈正相关（r=0.673,P〈0.05）,与IL-10水平呈负相关（r=-0.587,P〈0.05）。结论 IL-10和IFN-γ参与EV对中枢神经系统免疫损害的过程,并与神经元的损害程度密切相关。     

WAF1基因表达与肾母细胞瘤发生发展关系的探讨

WAF1是新近发现的抑癌基因 ,其缺失或低表达 ,可引起细胞周期失控及肿瘤的发生发展。笔者应用免疫组化技术检测 2 9例肾母细胞瘤中 WAF1基因表达 ,探讨肾母细胞瘤的发病机制及 WAF1基因表达检测的临床意义。1　资料与方法1 .1　标本收集　标本取自 1 991～ 1 997年同济医科大学     

无菌性发热新生儿肠道病毒感染46例分析

肠道病毒(EV)属于小核糖核酸病毒,是新生儿感染的常见病原体之一,可通过胎盘、围生期或生后获得感染,也可因母亲、医护人员或新生儿间交叉感染在新生儿室引起暴发流行,因为新生儿感染症状不典型,与其他感染和非感染性疾病鉴别困难.查阅文献有新生儿EV 感染的报道[1-2] .我们对2010 年7 月至10 月收治的46 例无菌性发热新生儿进行EV 检测并对其临床特点进行总结分析,以探讨无菌性发热新生儿EV 的基因表达情况.     

肠道病毒感染的实验室诊断研究进展

肠道病毒有70多个血清型,可通过血循环在多个器官中繁殖,引起一系列人类疾病。临床上对这些疾病的确诊比较困难,往往求助于实验室的方法。本文就肠道病毒感染的实验室诊断进展情况加以总结。     

白细胞介素-10基因多态性与儿童肠道病毒71型感染的相关性研究

目的 探讨白细胞介素-10（IL-10）基因位点-1082A/G、-819C/T和-592C/A多态性与IL-10水平及儿童肠道病毒71型（EV71）感染程度的关系。方法 选取EV71感染的手足口病患儿137例为研究对象,其中轻症组91例,重症组46例,另选取行健康体检儿童122例为健康对照组,采集临床数据。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清IL-10水平。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析技术检测IL-10基因位点-1082A/G、-819C/T和-592C/A的多态性。结果 与健康对照组相比,EV71感染组患儿的-1082位点AA基因型频率和A等位基因频率更高（P < 0.05）。在EV71感染组中,重症组-1082位点AA基因型频率和A等位基因频率高于轻症组（P < 0.05）。两组间IL-10基因位点-819C/T和-592C/A多态性的分布比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。重症组患儿血清IL-10水平明显高于轻症组和健康对照组（P < 0.05）。IL-10-1082 AA基因型、-819 TT基因型和-592 AA基因型与IL-10的低表达有关（P < 0.05）。在单倍型构建上,EV71感染组GCC单倍型的频率低于健康对照组（P < 0.05）。在EV71重症感染组中,ATA单倍型患儿的IL-10水平较其他单倍型显著降低,而GCC患儿的IL-10水平较其他单倍型显著升高（P < 0.05）;轻症组和健康对照组各单倍型间的IL-10水平比较差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 IL-10基因多态性与IL-10表达水平及EV71感染严重程度有关。     

TLR3-1377C/T基因多态性及表达水平与儿童肠道病毒71型脑炎易感性的探讨

目的 研究Toll样受体(TLRs)基因TLR3-1377C/T位点基因多态性及TLR3表达水平与儿童肠道病毒71型(EV71)脑炎易感性之间的关系。方法 收集EV71感染患儿187例(脑炎组59例和无脑炎组128例)与同期健康体检儿童232例进行病例对照研究。采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对TLR3-1377C/T基因多态性进行检测,采用ELISA检测血清TLR3水平。结果 与EV71感染无脑炎组相比,脑炎组TLR3-1377C/T位点基因型分布及等位基因频率的差异无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,EV71感染脑炎组、无脑炎组的血清TLR3水平均显著增高(P0.05),以无脑炎组最高(P0.05)。脑炎组的EV71病毒载量高于无脑炎组(P0.01)。1岁或≥1岁的EV71感染脑炎组、无脑炎组患儿的血清TLR3水平均较相应对照组增高(P0.05),其中无脑炎组TLR3水平高于相应年龄的脑炎组(P0.05)。脑炎组≥1岁患儿的TLR3浓度高于1岁者(P0.05);无脑炎组及对照组的TLR3浓度在1岁或≥1岁患儿之间的差异无统计学意义(P0.05)。EV71感染脑炎组,1岁患儿所占比例高于≥1岁者(P0.05)。结论 TLR3-1377C/T位点的基因多态性与EV71脑炎的发生无明显相关性。TLR3的低表达可能导致对病毒复制的抑制作用减弱,促进了EV71脑炎的发生。婴儿EV71感染后血清TLR3的表达不足可能是其合并脑炎的重要因素。     

无菌性发热新生儿单个核细胞肠道病毒基因表达的研究

目的　探讨无菌性发热新生儿外周血单个核细胞 (PBMC)中肠道病毒 (EV)基因表达情况和临床表现特点。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、原位杂交和病毒分离技术检测了 2 9例发热待查组和 18例中枢感染组新生儿PBMC、脑脊液及血清中EVRNA ,并对其临床特点进行总结分析。结果　发热待查组EV感染 14例 (48 3% ) ,9例PBMC中EVRNA阳性者 ,血清中全部阳性 ,其中 4例脑脊液中同时阳性 ;中枢感染组EV感染 11例 (6 1 1% ) ,5例外周血PBMC中EVRNA阳性者 ,血清和脑脊液中也全部阳性。两组比较 ,只有RT PCR法检测中枢感染组脑脊液中EVRNA阳性数高于发热组 ,而不同方法检测PBMC和血清中EVRNA两组间差异均无显著性。EV感染的主要症状有喂养困难 (71% )、易激惹 (6 4 % )、腹泻 (6 1% )、嗜睡 (5 4 % )、肝脏肿大 (46 % )及皮疹(36 % )等。结论　EV可感染新生儿的PBMC ;新生儿感染后EV易在全身播散 ;临床表现不典型 ,早期、快速病原诊断可缩短住院天数和减少抗生素的应用 ,有较高的社会和经济效益。     

肠道病毒中枢神经系统感染患儿脑脊液中VP1序列的分子分型研究

目的 探讨肠道病毒(EV)中枢神经系统感染患儿脑脊液(CSF)中VP1序列分子分型研究的临床价值.方法 2003年1月至2005年12月青岛大学附属医院和滨州医学院附属医院采用通用引物和VP1段分子分型引物分别对63例无菌性脑膜炎和脑炎惠儿急性期和恢复期的CSF标本进行扩增,对VP1分型引物扩增阳性片段进行克隆、测序及分型研究.结果 采用通用引物经2次PCR检测急性期患儿的CSF标本共47例(47/63,74.6%)阳性,恢复期仅3例(3/57,5.3%)阳性.采用分型引物经2次PCR检测通用引物扩增阳性的47例急性期的CSF标本共3l例(62.0%)阳性,其中4例脑炎和20例脑膜炎进行了序列测定.测序结果通过BLAST软件进行同源性对比分析,发现同-型别内序列同源性在97%～99%,不同型别之间同源性只有74%～76%,其中COX B3(9例)、ECHO 12(7例)、ECHO 30(3例)、COX A7(2例)、COX A9(1例)、COX B5(1例)、COX A11(1例).所有CSF进行病毒分离,11例(11/63,17.5%)阳性,阳性率明显低于VP1段分子分型的检测结果,除1例CSF标本病毒分离为ECHO7的患儿,通用引物扩增阳性而VP1分型引物扩增失败外,其余血清型别与VP1段分子分型研究结果完全-致.结论 EV是儿童无菌性脑膜炎和脑炎最重要的病原体;采用通用引物所建的RTPCR是快速检测EV中枢神经系统感染的有效方法;分型引物扩增VP1部分序列并测序,与GENBANK中的EV标准毒株进行对比,根据基因序列的同源性进行EV分型,为EV的分型研究提供了新的方法和思路.