小鼠巨细胞病毒感染鼠胚胎成纤维细胞对共培养调节性T细胞增殖和活化的影响

目的 研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对共培养体系中调节性T细胞(Treg)的诱导作用和Treg在抗病毒免疫中的调节作用.方法 建立小鼠T淋巴细胞与感染CMV的同系小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)体外共培养的细胞模型.蚀斑法检测共培养上清液中MCMV负荷量;细胞计数法分析体系中T淋巴细胞的扩增;流式细胞术检测共培养体系中CD4+ CD25+ Treg细胞比例,Western印迹法检测T淋巴细胞中Foxp3蛋白表达强度;RT-PCR法检测MEF中转化生长因子(TGF)-β mRNA表达水平;双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β蛋白表达水平.组间差异采用单因素方差分析.结果 T淋巴细胞与MCMV感染的MEF共培养1 d和3 d后,培养上清液中病毒负荷量较对照组显著减少;但是共培养6 d后,T淋巴细胞的免疫保护作用消失,病毒量为(5.58±0.67)×105 PFU/mL,与感染对照组的(6.05±0.34)×105 PFU/mL比较,差异无统计学意义.CMV感染3 d后,T淋巴细胞数由感染前的(2.02±0.05)×106 /mL 增至(2.25±0.13)×106 /mL (P＜0.05);但继续培养至6 d时,T淋巴细胞数为(2.08±0.14)× 106/mL,与3 d时比较,差异无统计学意义.CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞比例和Foxp3蛋白表达变化相似,均随MCMV感染时间延长而增加,在感染后6 d分别增至对照组的2倍和3倍;TGF-β在MEF中的基因转录水平(A值)由感染前的1.09±0.13增至感染3 d后的3.15±0.54,共培养上清液中的蛋白表达强度在感染后3 d增至(3.85±0.32)μg/L,与感染前的(1.74±0.14)μg/L比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论随感染时间延长,MCMV可能通过促进TGF-β表达等多种途径诱导Treg增殖活化.     

小儿肝胆性黄疸的发病机制和常见疾病

小儿肝胆性黄疸是因小儿时期肝细胞和(或)胆管系统发生各种疾病,未能将非结合胆红素充分在肝细胞内转化成结合胆红素,并将结合胆红素随同胆汁流经胆管系统排至十二指肠,引起血非结合胆红素和结合胆红素同时增多而产生的黄疸.按其发生病变的组织部位可细分为亚细胞性黄疸、肝细胞性黄疸、胆管性黄疸和混合性黄疸.除Crigler-Najjar综合征因有大量脂溶性非结合胆红素损伤脑组织外,其他各种疾病中出现的黄疸,均无明显的由非结合胆红素和(或)结合胆红素造成的组织损害.因此重点是找出引起黄疸的基础疾病,予以相应治疗.     

充分认识小儿病毒性下呼吸道疾病

病毒性下呼吸道疾病足指一组南各种病毒感染引起的疾病.包括病毒性气管炎、支气管炎、毛细支气管炎和肺炎.在美国,20%～53%的婴儿于生后第1年内发生≥1次下呼吸道感染[1].与其相比,我国每年出生1200万新生儿,估计会发生1200万例次的小儿下呼吸道感染.其中,至少半数由病毒引起,因而会有120万～318万例次以上的婴儿病毒性下呼吸道感染发生.回顾上世纪,我国华北、东北及西北地区于1958、1963年冬,曾有较大规模的小儿腺病毒肺炎流行.     

小鼠巨细胞病毒感染神经干细胞的体外研究

目的研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养的神经干细胞(NSC)增殖和分化的影响,为研究先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常的机制奠定理论基础。方法体外分离、培养和鉴定BABL/c胎鼠NSC,用含LacZ报告基因的重组小鼠巨细胞病毒RM461感染NSC,X-gal染色监测感染过程,透射电镜观察超微结构改变,PCR检测受染细胞及培养上清中病毒DNA及观察培养上清接种到小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的细胞病变效应,了解RM461对NSC的感染情况。通过绘制生长曲线、流式细胞术检测分化细胞比率,研究RM461对NSC增殖和分化的影响。结果RM461感染NSC48h后细胞出现肿胀、体积增大、神经球边缘的细胞发生脱落和死亡,细胞形态的改变随感染复数(MOI)的增加而更加明显;X-gal染色,24h受染细胞即可出现阳性改变,48h达高峰;RM461感染72h时,受染细胞及培养上清中病毒DNA呈阳性,培养上清接种到MEF后可出现明显的细胞病变效应,电镜下受染细胞胞浆中存在病毒颗粒,细胞器肿胀明显;RM461可明显抑制NSC的增殖和分化,当MOI为1时,分化培养2d,感染组胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇酶(NSE)阳性细胞的比例分别为(37.4±1.6)%和(8.9±0.8)%,远较未感染组[分别为(50.3±1.8)%和(23.4±1.3)%]低(P<0.01),且GFAP和NSE阳性细胞比率随MOI的增加降低更加明显。结论RM461可感染体外培养的NSC,并能形成产毒性感染;RM461可明显抑制NSC细胞的增殖和分化并导致干细胞死亡,这可能与先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常有关。     

十二指肠液胆红素定量测定对婴儿持续性黄疸的临床评价

早期婴儿持续性黄痘病因十分复杂，其中婴儿肝炎综合征与先天性胆道闭锁二者的早期鉴别极为重要，前者多为自限性疾病，而后者则需早期手术治疗。据Kasai报道，胆道闭锁患几年龄超过60天以后，每延迟10天手术成功率即减低一半。反之，新生儿旰炎或婴儿肝炎若接受剖腹探查，必加重病情，死亡率增加。因此，十二指肠液胆红素定量测定能了解胆道是否通畅及胆汁分泌量，从而迅速作出二者的鉴别诊断。本文报告20例持续性高胆红素血症婴儿十二指肠液胆红素定量结果。     

十二指肠液胆红素定量测定对婴儿持续性黄疸的临床评价

早期婴儿持续性黄痘病因十分复杂，其中婴儿肝炎综合征与先天性胆道闭锁二者的早期鉴别极为重要，前者多为自限性疾病，而后者则需早期手术治疗。据Kasai报道，胆道闭锁患几年龄超过60天以后，每延迟10天手术成功率即减低一半。反之，新生儿旰炎或婴儿肝炎若接受剖腹探查，必加重病情，死亡率增加。因此，十二指肠液胆红素定量测定能了解胆道是否通畅及胆汁分泌量，从而迅速作出二者的鉴别诊断。本文报告20例持续性高胆红素血症婴儿十二指肠液胆红素定量结果。     

柯萨奇病毒Ｂ３感染小鼠脑组织的钙超载及Ｎ—甲基—Ｄ—天冬氨酸受体Ｉ型mR

目的：为探索肠道病毒性脑炎的发病机制，以柯萨奇病毒（ＣＶ）B3感染小鼠，观察其神经细胞内钙离子[Ca^2 ]i及脑组织Ｎ－甲基－Ｄ－天冬氨酸受体Ｉ型（ＮＭＤＡＲ１）mRNA表达的变化，方法（１）取新生Ｂalb/c小鼠大脑皮质神经细胞，培养１２d 后，于CVB3感染12h（12份）用流式细胞仪检测细胞内[Ca^2 )]i，并用原子吸收光谱法检测神经细胞培养上清液中游离钙Ca^2 含量，（2)以CVB3颅内接种小，用NMDAR1的cDNA的cDNA地高辛标记探针对感染3d 后处死的石蜡包埋脑组织切片作原位杂交检测，结果：（1）感染12h小鼠脑神经细胞内[Ca^2 ]i值较对照组明显增高（P＜0．01），感染组神经细胞培养上清液中Ca^2 含量低于对照组（P＜0．01），（2）感染组脑组织中NMDAR1mRNA表达明显高于对照组（P＜0．01），结论：CVB3感染小鼠脑神经细胞可导致细胞[Ca^2 ]i超载，且与Ca^2 内流有关。CVB3感染又可引起小鼠脑组织NMDAR1mRNA表达增高，其结果可能进一步引起Ca^2 内流和神经兴奋性毒性作用损伤脑组织。     

婴儿肝胆疾病的现状和进展

1　从肝胆的解剖生理来看婴儿肝胆疾病的多发性　　肝胆疾病是婴儿时期的常见疾病之一。然而,由于肝胆疾病除黄疸外,往往症状不明显,不易察觉。又因肝脏再生能力较强,且有两套供血系统(肝动脉和门静脉),很少发生肝功能衰竭,危重病例不多,不易引起临床重视。实际上,婴儿时期的肝胆疾病较多见,这是由于以下一些原因。1.1　肝胆在胚胎发育过程中,如果受到先天或外来的有害因素影响时,可造成肝脏和胆道的发育障碍或发生各种肿瘤。如肝实质中见到的局限性结节性增生、结节增生性增生症、血管内皮瘤、畸胎瘤、肝母细胞瘤、先天性肝纤维化;和肝内胆…     

急性中耳炎--一种需要加深认识的常见病

去过美国的同道们，一定会注意到，在那里的儿科医师们常随身携 窥耳镜，遇到发热的小儿，必对其检查双侧耳道，以发现有无生中耳炎(acute otitis media,AOM）存在。笔者认为，他们这样做到少有２个原因：（１）因为在美国，过去的２０年中，因中耳炎就诊儿科的人数从１９７５年的９９０万例次升至１９９０年的２４５０万例次，ＡＯＭ发生率很高，近乎２／３的３岁以前小儿至少患过１次ＡＯＭ，５０％的儿童患过２次或更多次，（２）ＡＯＭ可有各种不同的并发症，以丧失听力最常见，幼小儿可因此而影响认知，语言和情感的正常发育^[1]。我国儿科医师不备窥耳镜，除已具明显症状和耳道流脓的ＡＯＭ患儿可以发现外，很难知晓ＡＯＭ在我国的发病情况，是我国发病率低，还是我们重视不够？值得予以加深认识，兹就国外有关ＡＯＭ的病原和发病机制，诊断和治疗等方面资料结合我国资料的介绍如下，以供我国儿科和耳科同道们参考。     

小儿病毒感染及抗病毒治疗小儿常见病毒感染的实验室诊断及评价

1病毒感染与病毒性疾病 病毒侵入人体的组织细胞内,借助宿主的细胞环境进行复制增殖,产生子代病毒,是谓病毒感染(viral infection).从病毒学来看,病毒在宿主细胞内完成复制过程,产生子代病毒,此时病毒处于活动状态,称作产毒性感染(productiveinfection);病毒在复制过程中,中途停止,成为不完整的病毒颗粒、或仅有病毒的DNA存在于细胞内、或与宿主细胞的DNA整合在一起,称为潜伏性或非产毒性感染(latent or non-productive infection).再从临床学来看,病毒侵犯宿主组织细胞,引起病变,临床上见到相应的症状、体征和功能损害的实验室依据,称为病毒性疾病,否则只能称作病毒感染.