丹参素对氧化低密度脂蛋白致血管平滑肌细胞增殖的影响和机制

目的： 探讨丹参素(DSS)对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响和机制。方法： 采用反复贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养成功后,采用第3-10代细胞应用于实验。分4组：对照组,ox-LDL(50 mg/L)组,ox-LDL(50 mg/L)+DSS（50 mg/L）组,ox-LDL(50 mg/L)+DSS（100 mg/L）组;用单个核细胞直接细胞毒性测定(MTT)法检测吸光度(A值),观察DSS对ox-LDL致VSMCs增殖的影响;RT-PCR法观察丹参素对血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）表达的影响。结果：丹参素可明显降低ox-LDL 引起的A值升高,丹参素可降低ox-LDL引起的PDGF-BB表达水平的升高。结论：丹参素可对抗ox-LDL致血管平滑肌细胞的增殖,其可能通过降低ox-LDL引起的PDGF-BB表达水平升高而发挥作用。     

CD40/CD40L系统在动脉粥样硬化发生发展中的作用

从上世纪末开始,慢性炎症反应在动脉粥样硬化发生中的作用被明确〔1〕。CD40/CD40L是炎症免疫反应的枢纽,参与动脉粥样硬化的发生、发展乃至斑块破裂的全过程。多项干预实验已经证实了CD40/CD40L信号的促动脉粥样硬化作用。     

急性冠脉综合征患者血清sCD40L、NF-κB的变化及其相关性

目的探讨急性冠脉综合征（ACS）患者外周血清可溶性CD40配体（sCD40L）水平与单个核细胞核因子kappa B（NF-κB）活性变化及其相关性。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定ACS组32例、稳定性心绞痛组20例及正常对照组20例外周血清sCD40L的浓度及外周血单个核细胞NF-κB的活性。结果 ACS组外周血清sCD40L的浓度及外周血单个核细胞NF-κB的活性均高于SAP组和正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;ACS组血清sCD40L水平与外周血单个核细胞NF-κB的活性呈显著正相关（P〈0.01）。结论 CD40L可能通过促进NF-κB的活化而导致各种促动脉粥样硬化的细胞因子和趋化因子的生成,最终促使ACS的发生。     

反复贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞

目的：原代培养鼠主动脉平滑肌细胞，传统贴块法往往由于血管片成功贴壁数少而导致失败或存在培养周期长的缺点。反复血管片贴壁法能够克服以上弊端，本实验拟进一步验证。 方法：实验于2007—03/06在南昌大学第二附属医院江西省分子中心重点实验室完成。①实验方法：健康Wistar大鼠2只，断颈法处死，分离胸主动脉，清除结缔组织，纵向剖开血管去除内皮细胞，继续用力刮可见血管片分为两层，去掉外层，剩下即为所需的中膜组织，剪细置于无菌培养瓶底，组织块间距不超过0．5cm，瓶底朝上，向培养瓶内加入5．0～6．0mL含体积分数为0．15胎牛血清的培养液后，放在大平皿上使瓶口稍朝上，置于37℃孵箱，一次性培养瓶放置1h（普通培养瓶2～3h）后将其缓慢翻转平放，使组织块完全浸入培养液中。当一些组织块周围细胞生长相当密集以致失去特有的梭形形态时，即可按1：1或1：2进行传代。②实验评估：采用相差显微镜观察细胞的生长形态及生长规律。免疫化学法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达。 结果：①细胞生长形态：原代培养第3天，贴附良好的血管片周围细胞呈辐射状生长，形态多样。4～10d细胞数量增多，细胞生长至融汇后相互平行排列成束或放射状，血管平滑肌细胞特征性“峰”、“谷”状生长特点尤为明显。细胞生长相当密集而传代。②α-平滑肌肌动蛋白免疫组织化学检测：胞浆内出现肌丝，纵向平行排列有密区，α-平滑肌肌动蛋白免疫化学染色呈阳性（棕色）。 结论：利用反复血管片贴壁法成功进行大鼠主动脉平滑肌细胞的原代培养，具有简便易行、细胞损失小、培养周期短等优点。     

氧化低密度脂蛋白在血管平滑肌细胞增殖过程中对血小板源性生长因子的作用

低密度脂蛋白是动脉粥样硬化的危险因子,而低密度脂蛋白氧化修饰成氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)则增加了它的致动脉粥样硬化性。ox-LDL能诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖,是致动脉粥样硬化的重要因素。近年来,从细胞信号、内含增殖活性成分、生长因子、及氧化效应等方面深入探讨了其作用机制。众所周知,血小板源性生长因子(PDGF)是强有力的促有丝分裂剂,在VSMC增殖及动脉粥样硬化发展过程中发挥重大作用,现就ox-LDL在致血管平滑肌细胞增殖过程中对PDGF的影响进行综述,揭示ox-LDL致动脉粥样硬化的机制,从而帮助了解临床药物治疗可能的途径。