重组人成骨蛋白-1的纯化及其生物学活性研究

目的 获得高纯度的重组人成骨蛋白-1（rhOP-1），探讨大肠杆菌表达rhOP-1的生物学活性。方法 表达rhOP-1工程菌经发酵后，裂菌、提取包涵体，层析法纯化蛋白并逐步降低尿素浓度透析复性。采用改良MTT法检测rhOP-1对NIH3T3细胞增殖和对硝基苯酚法（PNPP）检测rhOP-1对细胞碱性磷酸酶（ALP）活性的影响，同时在体内通过小鼠肌袋埋植实验测定rhOP-1活性。结果 经纯化的rhOP-1纯度可达98％。体外rhOP-1浓度在0．06～6μg／ml可明显促进细胞生长和ALP活性；体内rhOP-1埋植剂植入小鼠肌间隙2周后，可明显提高体内钙含量，且成骨趋势明显。结论 原核表达的rhOP-1具有良好的生物学活性。     

促进包涵体蛋白复性的几种有效添加剂

利用大肠杆菌高水平表达重组蛋白时,由于缺乏翻译后加工过程,目的蛋白通常以无活性的包涵体的形式产生。在包涵体蛋白复性过程中,溶解的蛋白质容易相互聚集生成沉淀,成为复性技术中最难以克服的问题。目前通常的做法是在复性过程中加入适当的添加剂,使其在最佳反应条件下促进蛋白质重折叠为活性形式。本文旨在介绍几种有效的促进复性的添加剂及其最佳使用条件,为研究者提供一定的借鉴。     

蛋白质复性的分子排阻色谱法的研究进展

包涵体蛋白质复性是生物工程下游技术中的一个重要问题。利用传统的方法复性复性率低和步骤繁琐，无法用于大规模生产。最近出现的层析复性方法，具有较强的优势。其原理是将层析技术应用于蛋白质复性和纯化，使变性蛋白质在层析柱上折叠为正确的空间构象，在洗脱的同时实现部分纯化。在层析技术中分子排阻色谱法由于操作简便，复性效率高，成为研究的重点。文章就分子排阻色谱法的研究情况作一综述。     

重组人成骨蛋白-1在大肠杆菌中的高效表达及复性

 目的研究重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)的发酵、纯化和复性。方法将构建好的重组质粒pBV221转化Escherichia coliBL21,迅速升温至42℃诱导rhOP-1以包涵体的形式高效表达。裂菌后利用6mol·L^-1尿素溶解目的蛋白,经SP-FastFlow离子交换色谱纯化后,利用cysteine/cystine对单体rhOP-1透析复性。结果rhOP-1的表达量占菌体总蛋白质量的33%,纯化后纯度可达98%,活性得到有效恢复。结论建立了rhOP-1发酵、纯化与复性的方法,获得高表达、高纯度、有活性的rhOP-1。