荧光定量聚合酶链反应法比较标准管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA在老年大鼠不同组织中的表达

背景:反转录聚合酶链反应用于基因表达分析越来越显示出其重要性,其中合适的内参基因选择很重要,目前并没有适合于所有体系可作为内参的管家基因.人鼠是常用动物模型,选择合适的大鼠管家基因作为内参尤其必要.目的:比较分析使用最广泛的4个标准管家摹因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA在老年大鼠肝、肾、心、肺组织和大脑皮质中的表达情况.设计、时间及地点:观察对比实验,于2007-07/08在泰山医学院生命科学研究所分子生物学实验室及泰安市疾控中心病毒检测中心实验室完成.材料:选用老年SD大鼠3只,用于检测管家基因表达情况.方法:采用反转录实时荧光聚合酶链反应技术检测老年大鼠肝、肾,心、肺组织和大脑皮质中有着不同表达丰度和功能的4个管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA的表达情况.主要观察指标:老年大鼠不同组织内4个管家基因的表达水平及不同组织间的表达差异.结果:①酸性核糖体磷蛋白P0在老年大鼠不同组织间表达差异最小.②老年大鼠肾组织中表达最稳定的管家基因是β-肌动蛋白:心脏组织和肺组织中表达最稳定的管家基因是3-磷酸甘油醛脱氢酶.结论:老年大鼠组织间信使RNA分析仅用1个内参基因是不合适的,至少应该使用两个参照基因,1个选用18S核糖体RNA:另一个基因的选择标准如下:适用于分析不同组织间基因表达情况的内参基因是酸性核糖体磷蛋白P0,而心脏和肺组织研究适用3-磷酸廿油醛脱氢酶,肾组织研究适用β-肌动蛋白.     

非遗传性阿尔茨海默病大鼠模型建立的实验研究

目的：应用喹啉酸损毁Meynert基底核建立非遗传性阿尔茨海默病大鼠模型.方法：应用喹啉酸(每侧150nmol，2μL)损毁老年大鼠双侧Meynert基底核，一次性训练被动回避跳台实验和水迷宫空间分辨能力测试，研究大鼠学习记忆的改变，并观察1，2，3，4四氢吖啶(THA)对Meynert基底核损毁大鼠学习记忆的改善作用.结果：与假损伤组相比，喹啉酸损伤Meynert基底核后13d，大鼠在跳台中出现的错误反应次数明显增多，学习中为(1．25&;#177;0.71)次比(3．75&;#177;1．28)次(q=6．83，P&;lt;0．01)，重测验中为(0．50&;#177;0．53)次比(2．00&;#177;0．76)次(q=7．42，P&;lt;0．001)。损伤后16d，大鼠学会迷宫所需的训练次数显著增加(q=22．16，P&;lt;0．001)。与喹啉酸组对比，腹腔注射THA 10mg／(kg&;#183;d)13d后，Meynert基底核损伤后大鼠在跳台中出现的错误反应次数明显减少(P&;lt;0．01)，腹腔注射THA 16d后学会迷宫所需的训练次数也显著减少(q=20．38，P&;lt;0．01)。结论：喹啉酸损毁老年大鼠双侧Meynert基底核，能够建立非遗传性阿尔茨海默病大鼠模型。     

构建伴高血压与胰岛素抵抗的大鼠模型

目的:研究表明,长期食用以脂肪为代表的高热量饮食可导致胰岛素抵抗,而高盐饮食和高血压的发生密切相关.以高脂高盐饮食诱导Wistar大鼠建立伴高血压与胰岛素抵抗大鼠模型.方法:实验于2006-10/2007-03在泰山医学院生命科学研究所完成.①实验分组:选用SPF级雄性Wistar大鼠24只,8周龄,体质量140g左右,随机数字法将大鼠分为对照组和胰岛素抵抗组,每组12只.②实验方法:实验大鼠适应性饲养7 d后,对照组继续以普通标准大鼠饲料喂养,胰岛素抵抗组则以高脂饲料取代普通标准大鼠饲料喂养,两组均饮用大鼠专用纯净水,共16周.③实验评估:实验过程中每周测食量、水量和体质量,每4周测1次空腹血糖和尾动脉血压.实验结束前,取血测空腹血浆胰岛素并进行高胰岛素-正常血糖钳夹实验判定胰岛素敏感性.结果:24只大鼠全部进入结果分析.①实验前8周两组大鼠食量差异无显著性意义(P＞0.05),8周后胰岛素抵抗组食量较对照组有所下降(P＜0.05);实验全程中胰岛素抵抗组饮水量高于对照组(P＜0.01):两组大鼠体质量差异无显著性意义(P＞0.05).②喂饲高脂高盐饲料16周后,与对照组相比,胰岛素抵抗组尾动脉血压升高(P＜0.01);葡萄糖输注速率降低(P＜0.05);胰岛素抵抗组空腹胰岛素浓度高于对照组(P＜0.05);两组空腹血糖差异无显著性(P＞0.05).结论:长期高脂高盐饮食可成功诱导出伴高血压胰岛素抵抗大鼠模型.     

氯胺酮在点燃模型作用中的量效关系

目的：观察氯胺酮对大鼠杏仁核电刺激点燃和化学性点燃模型的作用，并了解其是否有量效关系。 方法：实验在青岛大学医学院药理学研究室进行。①果仁核电刺激点燃模型制备：用恒定电流刺激Wistar雌鼠右侧杏仁核（400μA单相方波，波宽1ms，频率60Hz，持续1s，1次／d），若动物连续3次出现Racine’s Ⅴ级发作反应（全身痉挛、强直惊厥）即被完全点燃。②取点燃大鼠24只随机分为3组（n=8），分别腹腔注射氯胺酮30，0，10．0，5．0mg／kg，30min后测定后放电阈值，记录在后放电阈值刺激下的后放电时程和Racine’s分级。③取点燃大鼠24只随机分为3组（n=8），分别腹腔注射氯胺酮5．0mg／kg，尼卡地平2mg／kg，氯胺酮5．0mg／kg合并尼卡地平2mg／kg，记录给药前后后放电时程以及Racine’s分级。④腹腔注射盐酸利多卡因40mg／kg制备大鼠利多卡因化学点燃模型，取点燃大鼠28只随机分为4组（n=7），分别腹腔注射氯胺酮5．0，10．0，20．0，30．0m以g，30min后腹腔注射利多卡因40mg／kg，测定1h内大鼠发作Racine’s分级，计算给药前后Ⅴ级发生百分率。 结果：76只大鼠进入结果分析。①氯胺酮对大鼠杏仁核点燃发作影响：氯胺酮10．0，30．0mg／kg组大鼠给药后后放电时程显著短于给药前（P〈0．05），Racine＇s发作级别显著低于给药前（P〈0．01）。②氯胺酮5．0mg／kg和尼卡地平2.0mg／kg合用能缩短点燃大鼠的后放电时程[（42．3&;#177;9．7），（60．6&;#177;10．3）s，P〈0．05]，降低Racine＇s发作级别（3．1&;#177;0．7，5．0&;#177;0,P〈0．05）。③腹腔注射氯胺酮20．0，30．0mg／kg可降低大鼠利多卡因化学点燃模型的Ⅴ级发作百分率（50．0％，100％；12．5％，100％）。 结论：氯胺酮对大鼠杏仁核点燃和利多卡因化学点燃模型具有抑制作用，与尼卡地平有协同作用，并有显著的量效关系。     

山东泰安地区两个自然村人群血脂状况调查

目的:调查了解山东泰安地区农村人群的血脂水平,为该地区农民心脑血管疾病的预防提供基础数据。方法:实验于2006-06随机选取泰安市两个自然村650人进行健康检查,男270人,女380人,年龄2～88岁。①650人均于早晨空腹采集静脉血3mL,静置凝固后,2h内分离血清,采用全自动生化分析仪常规测定患者血脂指标总胆固醇、三酰甘油水平。②总胆固醇>5.2mmol/L判定为高胆固醇血症,三酰甘油>1.7mmol/L判定为高三酰甘油血症。结果:650人全部完成血样采集与血脂指标检测。①不同性别血脂水平比较:被检人群男性三酰甘油水平显著高于女性[(1.16±1.47),(0.95±0.84)mmol/L,P<0.05];男女总胆固醇水平基本相似(P>0.05)。②不同年龄段血脂水平比较:8人因具体年龄段不祥被排除,剩余642人分为3个年龄段:2～30岁、31～50岁、51～88岁。结果31～50岁人群三酰甘油水平显著高于2～30岁人群[(1.14±1.47),(0.88±0.70)mmol/L,P<0.05],略高于51～88岁人群(P>0.05);51～88岁人群总胆固醇水平>31～50岁人群>2～30岁人群,相邻年龄段间比较差异均有显著性意义(P<0.001)。③各年龄段男女间血脂水平比较:2～30岁人群和51～88岁人群三酰甘油水平性别间差异均无显著性意义(P>0.05),但总胆固醇水平女性均显著高于男性[(2.38±1.47),(1.85±1.26)mmol/L,P<0.05;(4.48±0.92),(4.18±0.76)mmol/L,P0.01]。31～50岁人群男性三酰甘油水平显著高于女性[(1.51±2.06),(0.90±0.80)mmol/L,P<0.01],总胆固醇水平基本相似(P>0.05)。④各年龄段男女高血脂症构成比:31～50岁人群高三酰甘油血症构成比显著高于2～30岁、51～88岁人群(23.1%,5.5%,9.3%,P<0.01);随着年龄增高,各年龄段高胆固醇血症构成比逐渐升高,相邻年龄段间差异均有显著性意义(2.7%,8.6%,15.6%,P<0.01)。31～50岁人群男性高三酰甘油血症、高胆固醇血症的构成比显著高于女性(P<0.01);2～30岁、51～88岁人群男女间高血脂症的构成比基本相似(P>0.05)。结论:①山东泰安地区农村人群高三酰甘油血症,31～50岁年龄段患病率最高;高胆固醇血症患病率随年龄增长逐步上升,提示中年人健康体检尤为重要。②高脂血症应从青少年开始加大预防和保健力度,进行广泛和反复的健康教育,倡导健康的生活方式和生活行为。     

阿齐霉素对胃排空及胃平滑肌条收缩活动的影响

阿齐霉素 (ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ ,ＡＭ )是近年用于临床的新型大环内酯类抗生素。国外有文献报道 ,口服 5 0 0ｍｇＡＭ可明显增加胃动力[1] 。本文以小鼠和大鼠为实验对象 ,分别观察ＡＭ对胃排空和胃平滑肌条收缩活动的影响 ,进一步探讨ＡＭ对胃动力的影响。一、材料和方法1.动物 :昆明种小鼠 12 0只 ,体重 18～ 2 2 ｇ ,雌雄各半 ;Ｗｉｓｔａｒ大鼠 12只 ,体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ ,雌雄不拘。以上动物均由山东大学医学院动物实验中心提供。2 .主要试剂 :阿齐霉素分散片 (南京第三制药厂 ) ,多潘立酮 (ｄｏｍｐｅｒｉｄｏｎｅ ,ＤＰ ,西…     

氧化应激模型的建立及其评价

目的:总结并评价各类氧化应激模型的建立及优缺点,探讨建立最佳的氧化应激模型,以进一步深入研究氧化损伤的机制以及开发新的抗氧化应激药物。资料来源:应用计算机检索Pubmed1994-01/2005-12关于氧化应激的文章。检索词“oxidativestress”并限定文章的语种类为English。同时利用计算机检索中国期刊全文数据库1994-01/2005-12的相关文章,限定文章语言种类为中文,检索词“氧化损伤”。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①关于氧化应激模型的成因及其建立的方法。②氧化应激模型的应用研究。排除标准:排除重复性研究。资料提炼:共收集到符合上述要求的文献40篇,排除23篇重复性研究,纳入17篇。资料综合:实验表明,氧化应激在一些疾病的发生发展中起着非常重要的作用,建立氧化应激模型有着非常重要的实际意义。现有氧化应激模型主要有动物模型和细胞培养模型两种形式(也可称为在体模型和离体模型),其中前者又可分为特异性和非特异性两类模型。动物模型中以D-半乳糖模型应用最广泛,而细胞模型中以过氧化氢氧化损伤模型为著。结论:在活体和离体培养细胞上建立多种氧化应激模型,各种模型均有其优缺点,为建立稳定、确切的氧化应激模型,进一步研究开发新的抗氧化应激药物,应将多种模型有效结合。     

非遗传性阿尔茨海默病大鼠模型建立的实验研究

目的:应用喹啉酸损毁Meynert基底核建立非遗传性阿尔茨海默病大鼠模型。方法:应用喹啉酸(每侧150nmol,2μL)损毁老年大鼠双侧Meynert基底核,一次性训练被动回避跳台实验和水迷宫空间分辨能力测试,研究大鼠学习记忆的改变,并观察1,2,3,4四氢吖啶(THA)对Meynert基底核损毁大鼠学习记忆的改善作用。结果:与假损伤组相比,喹啉酸损伤Meynert基底核后13d,大鼠在跳台中出现的错误反应次数明显增多,学习中为(1.25±0.71)次比(3.75±1.28)次(q=6.83,P<0.01),重测验中为(0.50±0.53)次比(2.00±0.76)次(q=7.42,P<0.001)。损伤后16d,大鼠学会迷宫所需的训练次数显著增加(q=22.16,P<0.001)。与喹啉酸组对比,腹腔注射THA10mg/(kg·d)13d后,Meynert基底核损伤后大鼠在跳台中出现的错误反应次数明显减少(P<0.01),腹腔注射THA16d后学会迷宫所需的训练次数也显著减少(q=20.38,P<0.01)。结论:喹啉酸损毁老年大鼠双侧Meynert基底核,能够建立非遗传性阿尔茨海默病大鼠模型。目的:应用喹啉酸损毁Meynert基底核建立非遗传性阿尔茨海默病大鼠模型。方法:应用喹啉酸(每侧150nmol,2μL)损毁老年大鼠双侧Meynert基底核,一次性训练被动回避跳台实验和水迷宫空间分辨能力测试,研究大鼠学习记忆的改变,并观察1,2,3,4四氢吖啶(THA)对Me     

长期冻存和新鲜胃癌组织总RNA提取方法的比较

背景：目前两种最可靠、应用最广的高通量RNA分离技术是基于异硫氰酸胍-酚︰氯仿的RNA分离技术和基于硅胶柱的RNA分离技术。在临床应用非常有限的组织材料时,有必要对RNA分离技术的可重复性和可靠性分别进行先期评价。 目的：系统比较采用硅胶柱法和Trizol法从冻存、新鲜胃癌组织中分离总RNA的效果。 方法：硅胶柱法和Trizol法分别提取长期-80 ℃冻存的(2年以上)和新鲜胃癌组织总RNA,紫外分光光度法比较RNA纯度,琼脂糖凝胶电泳分析28 S和18 S吸光度比值,进一步通过实时反转录-聚合酶链反应对扩增距mRNA polyA尾端不同大小片段的Ct值进行比较,间接判断不同大小mRNA的拷贝数及完整性。 结果与结论：硅胶柱技术和Trizol方法在总RNA提取的纯度方面都表现很好。然而在RNA完整性方面,基于硅胶柱技术的提取方法要好于Trizol法,因为其核糖体RNA形式完好而且更好地保持了不仅短的及中等大小片段,对于较大的mRNA片段也保持更好。另外,与新鲜组织相比,长时间冻存对胃癌组织总RNA提取的影响很小。     

中药材祈州漏芦几种有效成分的高效毛细管电泳法测定

目的 建立一种高效毛细管区带电泳快速分离和测定祈州漏芦中的有效成分.方法 pH 8.0,30mmol·L-1磷酸-硼砂缓冲液;毛细管柱75 μm(i.d)×50.2 cm,有效长度40 cm, 压力进样(3.45 kPa)3 s, 25 kV恒压分离;214 nm检测,柱温25℃.结果 6 min内将祈州漏芦样品中的芦丁、槲皮素、甘草苷完全基线分离,线性范围10～500.0 μg·ml-1.结论 该法具有良好的精密度、回收率及线性关系,可以用来快速定量测定祈州漏芦中3种有效成分的含量.