多重PCR和间隔区寡核苷酸分型技术应用于不同流行地区的牛结核病研究

目的 在牛结核病监测中联合应用菌株的多重PCR鉴定和间隔区寡核苷酸分型(spoligotyping),快速鉴定分离菌株并分析不同地区流行菌株的特点。方法 分别在牛结核病清净地区和流行地区进行牛型PPD变态反应试验,扑杀阳性牛后进行病理检查,并采集病料分离细菌。获取分离菌株,进行多重PCR鉴定和spoligotyping分型,分析不同地区的菌株特征。结果 结核病清净地区监测到16头牛型PPD阳性牛,扑杀后未见有病变,采集病料分离到4株分枝杆菌,经多重PCR鉴定均为非典型分枝杆菌。流行地区监测牛型PPD阳性23头,扑杀后发现14头有病变,采集病料后共有11头分离到疑似菌,经多重PCR鉴定均为牛型分枝杆菌。用spoligotyping分析共分为4个型,其中2个为未见报道的新型,报英国AHVLA牛结核spoligotyping数据库后获取通用编号SB1903和SB1904。结论 分离菌株中的优势菌株为首次报道的SB1903,但也检出有国际流行菌株SB0140,证实该地区牛结核病的流行是以“独特菌型地域内相互传播为主、输入性感染为辅”为特征。本次监测发现国内有SB0140菌株分布,提示应调查该型菌是否已经传染至我国人间。     

新疆某牛场牛结核病的综合诊断与病原分离鉴定

目的 用多种方法检测新疆某牛场的结核病并分离病原。方法 选择皮内变态反应、牛型PPD点眼试验、IFN-γ试验及ELISA抗体检测试验4种免疫学诊断方法对新疆某牛场进行牛结核病的综合诊断,锁定疑似阳性牛后进行扑杀、剖检并采集病料进行病原的分离,用已建立的PCR方法对培养的细菌进行分型鉴定。结果 共检测了奶牛755头,其中4种方法综合锁定结核疑似阳性牛26头(3.4%)。从中随机选择5头牛进行剖检均发现有明显的结核病变,采样后在罗氏培养基上进行培养,结果均为阳性。挑取菌落经PCR鉴定结果均为牛分枝杆菌。结论 牛结核病的诊断存在其他分枝杆菌的干扰,单一诊断方法因特异性不足导致结果存在误差。合理选择诊断方法的组合有利于牛结核病的确诊。     

我国结核病防治主要成就回眸及亟待解决的问题与建议

结核病是我国乃至全球关注的重大公共卫生问题。本文作者回顾和总结了我国结核病防治工作主要进展和成效,系统梳理了当前我国结核病防控存在的问题和挑战,特别是多部门合作、人畜共患和中医药防治结核病等领域存在的短板,提出了我国下一步结核病防治工作的对策和建议。     

组学方法筛选结核病生物标志物的应用进展

结核病目前仍然是世界范围内最严重的传染病之一。现有结核病诊断方法不能有效区分潜伏感染和活动性结核病例,延误后续的干预治疗。生物标志物含量在结核病潜伏感染、活动性结核等不同阶段存在差异,有望在感染早期做出预警。因此,筛选新的潜在结核病生物标志物,建立有效、快速、灵敏的诊断方法,有助于更早发现并及时采取结核病防治干预措施。随着基因组、转录组、蛋白组、代谢组等组学方法的发展,高通量筛选结核病生物标志物成为可能。交叉组学的应用还能够进一步提高生物标志物筛选的可靠性。本文就组学方法筛选结核病生物标志物的应用进行介绍,以期为新型结核病诊断方法研发提供线索。     

发达国家牛结核的防控措施及对我国的启示

据世界卫生组织统计,全世界现有结核病人2000万,每年新发生约900万例,每年死亡300万人,约1／3人群有潜伏性结核分枝杆菌感染。我国现有结核病人600万,其中150万是传染源,每年因结核病死亡25．6万人,占各类传染病死亡人数之首^[1]。牛结核病（bovine tuberculosis）主要是由牛分枝杆菌引起的一种牛的慢性消耗性传染病,     

基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立

目的 本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法。方法 以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参,针对布鲁氏菌属特异性基因IS711,建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及稳定性,绘制标准曲线。将该方法用于哺乳动物样品检测,并与细菌分离培养检测结果比较。结果 荧光定量PCR方法对布鲁氏菌检测有良好的特异性,3对引物对阴性对照菌均无非特异性扩增;该方法用于样品检测的最低检测限为17拷贝;内外源内参同时存在条件下,布鲁氏菌荧光定量PCR的标准曲线相关系数为R²=0.997(Y=-3.12X+40.9)。将该方法直接用于181份动物样本的检测,并与分离培养结果相比,荧光定量PCR检测阳性率为11.4%,细菌分离培养检测阳性率为9.9%,且细菌分离培养阳性样品与荧光定量PCR阳性样品中编号基本一致。结论 本文建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性高、特异性及稳定性好,可直接应用于样品的检测,检测结果受内参基因质控。     

FPA与ELISA方法在我国部分地区牛布鲁菌病诊断应用中的比较研究

目的 评价荧光偏振试验(FPA)在我国部分地区临床牛血清样品检测中的应用。方法 荧光偏振试验(FPA)检测1 286份牛血清样本,其中布病感染阳性血清309份,阴性血清977份,ROC曲线分析FPA临界值;荧光偏振试验(FPA)、间接ELISA(IELISA)及竞争ELISA(CELISA)同时检测1 160份牛血清样本,其中布病感染阳性血清231份,阴性血清929份,Kappa分析检测方法一致性。结果 ROC曲线分析FPA最优临界值(cutoff)为95 mP,此时敏感性为100%,特异性为99.6%;比较FPA、IELISA、CELISA 3种方法,敏感性分别为97%、99.56%和98.27%,特异性分别为100%、98.06%和99.56%,同时3种方法一致性均≥0.75。结论 FPA检测技术可以用于动物布病诊断,在田间条件下,快速、准确诊断布病,避免动物二次抓捕,适于推广应用。     

3个猪链球菌2型四川分离株4个毒力因子基因序列测定与分析

目的设计了特异性引物对3个致病性猪链球菌2型(Ss2)四川分离株4个主要毒力因子基因mrp、epf、sly和orf2分别进行了扩增,序列测定与分析结果表明3个Ss2四川分离株均存在4个毒力因子基因mrp、epf、sly和orf2,其核苷酸序列与1998年江苏分离株9801及国外参考菌株的同源性均大于99.5%,提示3个四川分离菌株与1998年江苏流行的高毒力菌株可能具有共同的来源。     

四川资阳猪源猪链球菌病病原的分离与鉴定

目的四川省部分地区发生的不明原因的猪源人畜共患病病原菌的分离与鉴定。方法采用普通RT-PCR和实时荧光PCR相结合的方法对流感和尼帕病毒的RNA进行检测，在Vero细胞和SPF鸡胚同时进行病毒分离，用血清平板对病料进行细菌分离，同时用革兰染色、生化试验、血清凝集试验和PCR进行鉴定，并对分离到的细菌进行药敏试验。结果排除了流感病毒和尼帕病毒感染的可能性。从病料组织中成功分离到3株链球菌，证实为猪链球菌Ⅱ型。通过对其毒力因子进行鉴定，结果发现溶菌酶释放蛋白（MRP）和细胞外蛋白因子（EF）均为阳性。进一步的药敏试验证实：分离菌株对氨苄青霉素、先锋霉素Ⅵ、羧苄青霉素、复方新诺明、头孢呋肟等抗菌药高度敏感。结论病原为猪链球菌Ⅱ型。     

我国犬布鲁杆菌病流行现状及相关研究

布鲁杆菌病(简称布病)是一种由布鲁杆菌(brucella)引起的世界范围内的人畜共患传染病.我国政府长期致力于牛、羊、猪的布病检疫和扑灭工作,但未予犬布病以足够的重视.本文就犬布病疫情、血清学、病原学诊断、布鲁杆菌宿主转移现象及种间干扰现象、种型鉴定分子生物学技术等方面作一综述.