人结核分枝杆菌和牛结核分枝杆菌差异蛋白质组学的研究

目的 探讨人MTB标准株H37Rv与牛分枝杆菌标准株卡介苗株的亚细胞蛋白质组学差异.方法 应用密度梯度离心法分离H37Rv和卡介苗株的细胞壁、细胞膜和细胞质蛋白,利用二维液相色谱分离技术进一步获得H37Rv和卡介苗株亚细胞蛋白质组,采用酶联免疫吸附试验分别检测H37Rv和卡介苗各组分与结核病患者和健康人各5例血清的免疫学反应.组间比较采用t检验.结果 共获得26个特异性引发免疫反应的H37Rv菌株蛋白组分.细胞膜组分M3Fr18与结核病患者的血清免疫学反应的吸收光度(A450值)为(721±3)×10-3,明显高于健康人[(356±6)×10-3],也明显高于卡介苗株细胞膜相应组分与健康人的血清免疫学反应强度[(414±7)×10-3],差异均有统计学意义(t值分别为1.852和1.037,均P＜0.01).细胞膜组分MI0Fr21与结核病患者的血清免疫学反应的A450值为(954±6)×10-3,明显高于健康人[(415±6)×10-3],也明显高于卡介苗株细胞膜相应组分与健康人的血清免疫学反应强度[(315±4)×10-3],差异均有统计学意义(t值分别为2.113和2.550,均P＜0.01).结论 二维液相色谱和酶联免疫吸附试验联合应用,有助于检测人MTB感染的相关抗原蛋白.M3Fr18和M10Fr21蛋白质组分可引起结核病患者的特异性免疫反应,提示其可能是人MTB感染的特异抗原.

Abstract：

Objective To compare the proteome of Mycobacterium tuberculosis (MTB) H37 Rv strain with Bovine mycobacterium (Bacillus Calmette-Guerin, BCG) strain at the sub-cellular level. Methods Proteins of the cell wall, membrane and cytolymph of H37 Rv and BCG were extracted by density gradient centrifugation. Sub-cellular proteome of H37 Rv and BCG were analyzed using 2-dimensional liquid chromatography. The immunity reactions of H37 Rv fractions with sera from patients ( n = 5 ) and healthy controls ( n = 5 ), as well as BCG fractions with sera from healthy controls ( n = 5 ) were analyzed by ELISA.Data was analyzed by t test. Results Twenty-six fractions of H37 Rv were found to elicit specific antibody response. Fraction M3Fr18 of H37 Rv reacted with sera from patients. The A450 [ (721 ± 3 ) × 10-3] was higher than that with sera from healthy controls [ ( 356 ± 6) × 10 - 3 ] , as well as the A450 of the corresponding fractions of BCG with sera from healthy controls [ (414 ± 7) × 10-3 ]. The differences between the patient group and the 2 healthy control groups were significant ( t = 1. 852 and 1. 037, all P ＜ 0. 01 ). Moreover,fraction M10Fr21 of H37Rv reacted with sera from the patients. The A450[ (954 ±6) × 10 -3 ] was higher than that with sera from the healthy controls [ (415 ± 6 ) × 10-3 ], as well as the A450 of the corresponding fractions of BCG with sera from the healthy controls [ ( 315 ± 4 ) × 10-3 ]. The differences between the patient group and the 2 healthy control groups were significant ( t = 2. 113 and 2. 550, all P ＜ 0. 01 ).Conclusions The combination of 2-dimensional liquid chromatography and immunology technology is useful in finding antigens associated with MTB infection. Fractions M3Fr18 and M10Fr21 can elicit specific immune reaction among MTB patients, suggesting that they may be specific antigens of MTB infection.     

基于蛋白芯片的慢性肾衰舌苔上清液中蛋白研究

目的：通过比较慢性肾衰（CRF）患者与正常对照组人群舌苔上清液中蛋白表达谱的差异,筛选慢性肾衰舌苔蛋白标志物并建立预测模型,探讨其在慢性肾衰诊断中的意义。方法：对67例慢性肾衰患者和38 例正常对照组人群舌苔上清液样本,运用SELDI-TOF-MS 蛋白芯片技术筛选慢性肾衰舌苔蛋白标志物,经生物信息学分析建立预测模型并进行验证。结果：淤慢性肾衰组67 例和正常对照组38 例舌苔样本经SELDI-TOF-MS 技术测定,质荷比1000耀20000 范围内共检测到242个蛋白峰,经生物信息学统计分析,有13 个差异质谱峰有统计学意义（P<0.01）,其中m/z 1092.68、m/z 1508.26 等7 个差异质谱峰在慢性肾衰组中呈高表达;m/z 13302.5、m/z 14330.7 等6 个差异质谱峰在慢性肾衰组中呈低表达。于利用层次聚类算法进行层次聚类分析和主成分分析（PCA）,结果显示,慢性肾衰组与正常对照组样本之间区分较明显,但均存在部分重叠。盂经生物信息学分析建立慢性肾衰预测模型,最终得到m/z 1049.61、m/z 1076.94、m/z 15295.7 等7 个差异质谱峰组成的生物标记物可以将慢性肾衰组和正常对照组样品较好的分类（最终预测模型的灵敏度为61.4%,特异度为57.3%,预测正确率为64.4%）。结论：该研究运用SELDI-TOF-MS 蛋白芯片技术,初步筛选出了慢性肾衰舌苔蛋白标志物并建立了预测模型,为慢性肾衰的诊断研究提供客观依据。     

基于血清蛋白组学的慢性肾衰预测模型探讨

 目的 通过比较慢性肾衰（CRF）患者与正常人血清蛋白表达谱的差异,筛选血清蛋白标志物并建立诊断模型,探讨其在慢性肾衰血清学诊断中的意义。方法 收集62例CRF患者和28例正常人的血清,经表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检验并筛选血清蛋白标志物。经生物信息学分析建立预测模型并进行验证。结果 在质荷比(m/z)1500～30000范围内,检测到51个有效蛋白峰,发现有19个峰有显著差异 (P<0.001),其中18个峰呈低表达,1个峰呈高表达;且CRF组和正常组的聚类性质明显不同;组内样本彼此靠近,组间样本彼此分开。构建的"慢性肾衰组－正常组"诊断决策树模型,预测正确率为87.8%,灵敏度为87.1%,特异度为89.3%。结论 该决策树模型能对慢性肾衰做出较为准确的预测判断,为慢性肾衰的临床早期发现提供一定的实验依据     

中西医结合治疗复发性口腔溃疡80例的临床观察

目的：探讨中西医结合治疗复发性口腔溃疡的疗效。方法：收集本科室2010年10月至2012年10月治疗的复发性口腔溃疡患者80例,按随机数字表分为对照组（ n＝40）与治疗组（ n＝40）。对照组进行常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上进行辨证论治,采用中西医结合的方法进行治疗。治疗结束后1年进行疗效评价,进行两组患者的疗效比较。结果：疗效评价显示,对照组有效率为57.50％（23/40）,治疗组有效率为92.50％（37/40）,治疗组疗效显著优于对照组（χ^2＝27.17,P〈0.01）。结论：中西医结合治疗复发性口腔溃疡的疗效较好。     

舌苔上清液中蛋白提取方法的建立及优化

目的:建立舌苔上清液中蛋白的提取及优化方法。方法:采用不同的离心条件、不同过滤器孔径及不同样本溶剂或芯片的选取等方法,对30例正常人、30例慢性肾衰竭(CRF)患者舌苔样本进行分组处理。对舌苔上清液采用紫外分光光度计检测各组样本的OD值,并计算各组样本的蛋白浓度;通过SPSS11.5软件统计分析,筛选出蛋白浓度相对稳定的处理条件;基于SELD I-TOF-MS技术,使用不同类型的蛋白芯片点样,根据图谱中蛋白波谱峰分布情况,确定最为优化的样本处理条件。结果:在选用不锈钢金属小匙取样溶于0.9%生理盐水,经过1 500 r/m in,离心2 m in的条件后取上清液,NP20蛋白芯片点样结果显示的蛋白波峰数最多,波峰相对高度最高且最为稳定。结论:该实验为舌苔蛋白质组学的理论研究提供一定的科研思路与方法。     

家族聚集癌1例并文献复习

目的:探讨家族聚集癌的发病机制.方法:报告1例家族聚集癌,通过对近年文献回顾总结,分析家族聚集癌的发病原因.结果:显示家族聚集癌与遗传因素、环境因素、易感性密切相关.结论:家族聚集癌是多种因素共同作用产生的一个总效应.     

龙珠软膏的临床应用

龙珠软膏系外用皮肤疮疡类疾病的理想药物.是在马应龙传世四百年古方的基础上,加减筛选药方研制而成,具有清热解毒、消肿止痛、活血化瘀、祛腐生肌之功效.该方中含有麝香、牛黄、冰片等名贵药材,组方严密,配伍巧妙.用于疖、痈、下肢溃疡、脉管炎、口疮、湿疹、外伤感染、冻疮、小面积烫伤、痔疮等,取得了较好的效果.现代药理学试验证实:该药对常见的一些具有耐药性的致病菌,如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌具有较强的抑制作用;在兔皮肤溃疡实验中,该药具有抗炎、促进伤口愈合、消肿、止痛、活血化瘀功效.     

獐牙菜属药用植物叶片表皮细胞的计算机图像分析

目的研究獐牙菜属药用植物叶上表皮细胞的形态差异，为本类药材的鉴别提供新的方法。方法采用常规技术制片，用计算机细胞分析系统HPIAS-1000对表皮细胞形态进行二值化处理，测定其上表皮细胞垂周壁弯曲程度即形态因子（SFC）和细胞排列方式即Feret’s直径比（SLF）。分别对12种獐牙菜属药用植物含不同产地的21种材料进行了测定，并进行了方法学考察。结果显微镜放大倍数组合20×10下，软件系统精密度和重现性良好，不同植株茎上第3节叶片中段主脉与第1侧脉（弧行脉序）之间上表皮细胞形态在种内最为稳定，不同种植物的SFC、SLF值有显著差异，每种都有其相对恒定值。结论计算机细胞分析系统HPIAS-1000用于药用植物叶片表皮细胞的形态分析鉴定具有简便、快速、准确、实用的特点，为全草和叶类药材的鉴定提供了一种新途径。     

虎奶多糖的含量测定

1　仪器与试剂紫外分光光度计;麝香草酚(分析纯,上海化学试剂采购供应站);供试药材:云南腾冲产菌核侧耳;所用试剂均为分析纯;虎奶多糖对照品,自制。2　实验条件2.1　实验方法取供试液1ｍｌ于25ｍｌ比色管中加77%硫酸7ｍｌ,放置10分钟,放入冰水中15分钟,取出加10%麝香草酚无水乙醇溶液0.1ｍｌ、水0.9ｍｌ充分振摇混合,于沸水中放置25分钟,再放入冰水中5分钟后,取出,振摇,放置2分钟,同时用0.1ＮＮａＯＨ-鹿香草酚-硫酸,按上述操作做空白试验。紫外分光光度计进行测定。2.2　实验条件选择取浓度为40μｇ/ｍｌ的虎奶多糖对照品溶液(溶剂为0.5Ｎ…     

基于血清蛋白组学的慢性肾衰中医不同证型的研究

目的:探讨慢性肾功能衰竭中医不同证型的血清蛋白质谱的变化及生物学基础。方法:收集慢性肾功能衰竭患者83例及正常人36例并辨证分型,采用SELDI-TOF蛋白芯片技术对不同证型的血清蛋白质表达谱进行研究。结果:在慢性肾衰中医各证型的整体研究中,17个蛋白峰有显著差异(P0.001),通过层次聚类分析显示中医各证型之间聚类性质差异较小;通过对中医不同证型作两两比较发现,脾肾气虚组与脾肾阳虚组之间得到2个差异蛋白峰(P0.01),脾肾气虚组与阴阳两虚组得到4个差异蛋白峰(P0.01),脾肾气虚组与脾肾气阴两虚组之间得到5个差异蛋白峰(P0.01),脾肾阳虚组与阴阳两虚组之间得到4个差异蛋白峰(P0.01),脾肾阳虚组与脾肾气阴两虚组之间得到4个差异蛋白峰(P0.01),阴阳两虚组与脾肾气阴两虚组之间得到2个差异蛋白峰(P0.01);运用PCA分析显示,各证型组之间的差异蛋白峰能较好把各组相区分。结论:采用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术分析慢性肾功能衰竭中医不同证型血清蛋白质谱变化对探讨中医证型的生物学基础具有一定的意义。