大鼠压力负荷性肥大心肌中TNF-α mRNA表达变化

目的：探讨大鼠压力负荷性肥大心肌中TNF-α mRNA表达的变化及卡托普利（captopril）对其的影响。方法：采用腹主动脉缩窄法复制压力超负荷心肌肥大模型，于术后42 d采血、摘取心脏，测定心肌肥大指数并采用酶联免疫法测定血清及左心室肌TNF-α含量；应用心肌原位杂交法结合图像分析系统检测心肌组织中TNF-α mRNA表达的变化，并观测TNF-α mRNA在心肌组织中的定位。结果：术后42 d心肌明显肥大，以左心室为主；主动脉缩窄（aorta-constriction, AC）组心室肌TNF-α含量比假手术（sham-operation, SO）组高98%（P<0.01）；卡托普利干预使心室肌TNF-α含量比AC组低64.14%（P<0.01），但未达到对照水平；心肌组织原位杂交显示TNF-α mRNA表达主要在心肌间质部位，假手术组心肌TNF-α mRNA表达水平极低，明显低于AC术后（P<0.01），captopril干预虽明显抑制AC术后心肌组织中TNF-α mRNA表达，但并未使其达到SO组水平。结论：心肌组织内源性TNF-α的表达增加在压力负荷性心肌肥大中具有重要的调控作用，其过表达可能与RAS激活促心肌间质TNF-α mRNA表达上调有关。     

替米沙坦对压力负荷过重所致心衰大鼠心肌ACE2和AT1R表达的影响

目的 探讨替米沙坦对压力负荷过重所致心衰大鼠血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、心肌血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、血管紧张素转化酶2(ACE2)及MAS蛋白表达的影响。方法 采用SD雄性大鼠通过腹主动脉缩窄术构建压力负荷性心肌肥厚致心力衰竭(HF)模型。将大鼠随机分为假手术对照组(n=12)、HF模型组(n=12)和替米沙坦干预组(n=12)。替米沙坦干预组每天给予替米沙坦连续8周,检测各组大鼠血流动力学参数、心脏指数、血浆AngⅡ含量、心肌中AT1R、ACE2和MAS蛋白的表达情况。结果 HF模型组心脏指数、血流动力学指标、血浆AngⅡ的含量及心肌AT1R、ACE2蛋白的表达明显升高(P<0.01),MAS蛋白表达明显下降(P<0.01);替米沙坦干预组心脏指数、血流动力学指标明显下降(P<0.01),血浆AngⅡ的含量及心肌AT1R蛋白的表达明显下降(P<0.01),而MAS和ACE2蛋白的表达明显升高(P<0.01)。结论 应用替米沙坦可明显改善HF大鼠心室重构,可能与AngⅡ和AT1R的下调,而MAS和ACE2的上调有关。     

用垂直转头密度梯度离心法研究硒对鼠肝核糖体合成的影响

目的 :测定多聚核糖体含量及多聚程度的分布对研究生物组织的生理生化现象和代谢过程有重要意义。方法 :我们把断奶一周的ＳＤ系大鼠 (体重 60～ 70ｇ)随机分为低硒组 ,加硒Ⅰ组和Ⅱ组 ,喂养 8周 ,禁食 1 2ｈ ,断头取出肝脏 ,离心得去线粒体上清液 ,再加入ＤＯＣ(脱氧胆酸钠 ) ,用差速和不连续梯度离心法分离得总核糖体和多聚核糖体。将制备的多聚核糖体铺放在 1 5%～ 55%的Ｓ形蔗糖密度梯度液顶部 ,采用ＲＰＶ50Ｔ垂直转头 ,1 0℃ ,40 0 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 9ｍｉｎ(日立ＳＣＰ 85Ｈ超速离心机 )。ＤＧＦ Ｕ型密度梯度仪上取法收集 ,同时检测…     

沉降分析技术在地方病实验研究中的应用

沉降分析技术是表征大分子及其相互作用的一种行之有效的实验技术,被广泛应用于地方病实验研究中.本文简要介绍了沉降分析技术的应用.通过沉降平衡实验分析大分子的流体动力学非理想性,沉降速度实验删定在强离心力场下溶液中大分子的行为,从中获得的数据经过拟合分析,包括Van Holde-weischet全分界面拟合、Stafford时间导数法等.用来分析大分子的组装、拆卸,大体构型和构型改变,大分子-大分子、大分子-小分子相互作用,缔合特性等.     

心房和心室M受体密度的种属差异性比较

目的:比较大鼠、豚鼠和家兔心房肌和心室肌M受体分布密度及与其强阻断剂氚标记二苯羟乙酸奎宁酯（3HQNB）亲和活性的种属差异性。方法:运用放射性配基受体结合法测定不同动物心房肌和心室肌M受体密度及解离常数（Kd）值。结果:①大鼠心房M受体的分布密度约为心室的3.0倍,家兔心房是心室的4.0倍,而豚鼠心房是心室的1.7倍。②M受体在不同种动物心房肌密度排序:家兔>大鼠>豚鼠。心室肌密度排序:豚鼠>大鼠>家兔。Kd值在心房、心室及种间均无统计学差异。结论:①M受体在大鼠、豚鼠和家兔心脏的分布密度不仅具有房室间差异性,而且还有种间差异性。②M受体与其阻断剂3HQNB亲和活性的种间差异性不明显。     

心肌成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ作用中活性氧水平及p22~(phox)的表达

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预心肌成纤维细胞时活性氧的改变及可能的产生途径,为防治心室重塑发展提供思路.方法 培养出生2～3 d大鼠心肌成纤维细胞,分为正常对照组,Ang Ⅱ(10-7mol/L)组,APO(100 μmol/L)组,APo+AngⅡ(APO 100 μmol/L培养1 h后加入终浓度10-7mol/L AngⅡ)组.干预48 h后应用荧光显微镜观测活性氧水平;免疫组织化学法检测p22phox蛋白表达.结果 AngⅡ组活性氧荧光最强,APO+AngⅡ组明显减弱,对照组和APO组最弱.组化染色结果显示对照组和APO组几乎未见p22phox蛋白阳性表达;AngⅡ组细胞普遍阳性表达,显著高于其他3组;APO+AngⅡ组稍强于对照组和APO组,但无显著性差异.结论 AngU可能通过增强p22phox蛋白表达,导致NADPH氧化酶途径产生活性氧增多.     

脱氢表雄酮对抗LDL和OX-LDL所致ECV304细胞的损伤

目的：观察脱氢表雄酮（DHEA）对抗LDL及OX-LDL所致ECV304细胞的损伤作用，探讨DHEA可能的抗AS作用机制。 方法: 采用培养的ECV304细胞, 应用硝酸还原酶、放免及SABC免疫组化等方法观察经DHEA预处理及与LDL或OX-LDL混合作用后的细胞培养液中NO2-/NO3-、ET-1水平及细胞表面ICAM-1的表达。 结果: LDL可明显地减少培养液中NO2-/NO3-的含量，增加细胞ICAM-1的表达，但不影响ET-1的分泌；OX-LDL可明显减少培养液中NO2-/NO3-的含量、升高ET-1的水平，同时上调细胞表面ICAM-1的表达； 在预处理条件下，DHEA可升高LDL作用后细胞培养液中NO2-/NO3-的含量、下调ICAM-1的表达，但在混合培养条件下无此作用；在预处理及混合培养条件下，DHEA均可升高OX-LDL作用后细胞培养液中NO2-/NO3-的含量、减少细胞ET-1分泌以及下调ICAM-1的表达。 结论: LDL和OX-LDL对ECV304细胞具有明显的毒性作用，两者作用机制不尽相同。DHEA可能通过对ECV304细胞内部结构和功能的调节或通过其对OX-LDL分子的直接作用而发挥保护作用。     

Ang Ⅱ对成年大鼠心肌成纤维细胞分泌ET-1、NO功能的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）对成年大鼠心肌成纤维细胞（MFs）分泌内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）的影响。方法：采用酶消化法和差速贴壁分离法获取MFs，应用放射免疫分析法、硝酸还原酶法分别测定不同条件下培养的第二代心肌MFs培养液中的ET-1、NO水平。结果：一定浓度范围内的Ang Ⅱ可按剂量依赖方式促MFs分泌ET-1, 血管紧张素Ⅱ1型受体（AT₁R）拮抗剂losartan可阻断Ang Ⅱ的上述作用；Ang Ⅱ可抑制心肌MFs分泌NO，加losartan后再加Ang Ⅱ培养发现，MFs分泌NO能力不但不降低，而且还高于对照组（P<0.01）。结论：Ang Ⅱ可通过AT₁R促成年大鼠心肌MFs分泌ET-1，主要通过AT₁R影响MFs分泌NO，从而改变ET-1/NO比值。Ang Ⅱ可能通过影响MFs分泌的生物活性物质网络平衡关系改变，发挥其促心肌肥厚及心力衰竭效应。     

在地方病研究中用等密度法分离DNA实验条件的优化选择

地方病的病因、发病机理研究中，分子生物学已经成为研究的重要手段。分离得到纯净的DNA是其中的关键步骤之一。通过研究认为在相对短的时间内要达到理想的分离效果，应该对以下实验条件进行优化选择并严格控制：包括实验中影响分离本领的转头、梯度介质选择；为获得满意分离度应严格选择梯度的密度范围、梯度形状以及梯度的斜率；为了缩短分离时间，可采用重定向梯度、二次变速及Gmax等方法。并对形成DNA区带所需要的时问进行了讨论。     

AT2参与调控肥大心肌细胞炎症因子的合成和分泌

目的 观察血管紧张素Ⅱ二型受体(AT2)对压力超负荷性肥大心肌细胞炎症因子合成和分泌的影响.方法 采用腹主动脉缩窄法构建成年SD大鼠压力超负荷性心肌肥大模型,选用缩窄术后8周的肥大心肌细胞,经Ang Ⅱ及losartan或PDl23319处理36 h后.放免法检测培养上清液中IL-1β、TNF-α及IL-6的表达水平.结果 随着浓度增大,AngⅡ可以诱导肥大心肌细胞TNF-α和IL-1β分泌.PDl23319,而不是losartan,预处理可使TNF-α和IL-1β表达下调.实验中未能检测出培养液中IL-6含量.结论 AngⅡ诱导压力超负荷性肥大心肌细胞炎症因子TNF-a和IL-1β的合成与释放主要受AT2的调控.