凝胶迁移阻滞法分析人类端粒酶的DNA结合特性

目的 采用凝胶迁移阻滞法分析研究人类端粒酶DNA结合特性。方法 以地高辛标记的人端粒序列寡核苷酸与人端粒酶提取物进行结合反应，以未参与结合反应的单纯标记寡核苷酸作为参照。实验所设的3组样品中，第一组和第二组标记寡核苷酸加端粒酶，第一组显示一条阻滞性条带，第二组显示两条条带，前方的一条与第一组条带平行，为单纯探针条带，后方的一条迁移率被阻滞，应为探针与纯化的蛋白复合体相结合的结果；第三组为标记寡核苷酸加端粒酶阴性洗涤液，只显示单一探针条带。结果 只有人端粒序列寡核苷酸与人端粒酶提取物结合反应管显示特异的凝胶迁移阻滞性电泳条带。结论 人端粒酶具有和端粒DNA片段结合的特性。     

人端粒酶hTERT可诱导RNAi系统的建立及其对TREx-HeLa细胞生长的影响

目的：建立可诱导性沉默hTERT的 RNA干扰系统，并初步探讨端粒酶与细胞增殖调控之间的关系。方法: 构建沉默端粒酶催化亚基hTERT的Tet-on可诱导性RNAi载体psiRNA-hH1/TO-hTERTshRNA，并稳定转染表达TR的TREx-HeLa细胞，用半定量RT-PCR检测hTERT的转录后水平，TRAP法检测端粒酶活性。MTT法检测细胞的增殖，流式细胞仪和Hoechst33342染色法观察细胞凋亡。结果: 构建了可诱导性沉默端粒酶催化亚基hTERT的重组体psiRNA-hH1/TO-hTERTshRNA，并建立了可诱导性沉默hTERT的TREx-HeLa细胞株。短期内的端粒酶活性降低后TREx-HeLa细胞生长增殖有下降趋势，而其凋亡情况则未见明显变化。结论: 本研究建立了可诱导沉默hTERT的RNAi系统，为研究端粒酶活性与细胞增殖和衰老的关系提供了实验基础。     

建立专题学习网站促进学生科研活动

分子生物学学科是医学和生物学学科学生的必修课程,分子生物学技术又是从事生命科学领域的科研活动最常用的一项基本技能.结合现代化多媒体技术的应用和电脑网络的普及,建立一个"分子生物学技术"专题学习网站,一方面有利于学生对所学过的生物化学与分子生物学的基本理论和技术的巩固和深化,更重要的是能够给学生的科研活动提供一个快捷、方便、现代化的技术资源库,以启发学生,培养其创新能力和科研能力.     

人类端粒酶RNA组分的研究进展

人类端粒酶RNA(hTR)是端粒酶的必需组分之一。它除了作为端粒酶重复序列合成的模板外,还有许多其它功能,如介导端粒酶组装、与其它相关蛋白相互作用等。对hTR的研究将有助于揭示端粒酶的详细作用机制,从而为以端粒酶为靶点的肿瘤治疗提供科学依据。本文对近年来有关hTR结构、功能的研究作一综述,并探讨其与一种称为先天性角化不良的遗传疾病的关系,同时提出hTR在端粒酶组装过程中的可能作用机制。     

建立专题学习网站 促进学生科研活动

分子生物学学科是医学和生物学学科学生的必修课程,分子生物学技术又是从事生命科学领域的科研活动最常用的一项基本技能。结合现代化多媒体技术的应用和电脑网络的普及,建立一个"分子生物学技术"专题学习网站,一方面有利于学生对所学过的生物化学与分子生物学的基本理论和技术的巩固和深化,更重要的是能够给学生的科研活动提供一个快捷、方便、现代化的技术资源库,以启发学生,培养其创新能力和科研能力。     

分子医学实验室网站建设及其应用

建设一个兼备分子医学实验室全貌和实验教学网络化资源的综合型网站。主要目的，一是为广大学生的自主学习、科研探索和学术交流提供一个方便快捷的网络平台；二是进一步促进分子医学实验室这一现代化实验平台的开放推广和信息流通，使其更好地服务于学校的教学和科研活动，并推动实验教学改革的不断深入。     

外源性端粒酶催化亚单位对人视网膜血管内皮细胞的影响

目的探讨外源性人端粒酶催化亚单位(hTERT)对人视网膜血管内皮细胞(hRCEC)端粒酶活性、相关基因表达和体外生存时间的影响。方法阳离子脂质体介导hRCEC转染;RT-PCR法检测人类端粒酶RNA组份(hTR)、端粒酶相关蛋白1(TEP1)及hTERT基因的表达;TRAP法检测端粒酶活性;细胞计数法绘制生长曲线。结果hTR、TEP1基因在hTERT转染hRCEC前后都表达,hTERT基因在转染前不表达,转染后24h及稳定转染克隆形成时表达,细胞停止分裂时又失去表达;转染前无端粒酶活性,转染后24h及稳定转染克隆形成时可检测到端粒酶活性,细胞停止分裂时端粒酶活性消失;稳定转染了hTERT基因后hRCEC的生存时间没有延长。结论hTERT转染可显著提高hRCEC中hTERT基因表达水平,hTERT基因表达与端粒酶活性一致,但只用hTERT转染的方法不能使hRCEC细胞生存时间延长。     

分子医学及其技术

分子医学是涵盖医学分子生物学基础理论、医学分子生物学常用实验技术及其在医学研究中的应用等的综合性学科。分子医学与传统医学最根本的区别在于前者可在基因水平上对疾病进行操作 ,所以分子医学技术已成为推动分子医学发展的重要工具。本文较全面阐述分子医学和分子医学技术的主体内容 ,并指出其在医学发展中的重要性。分子医学的发展将逐渐改变目前以经验医学为主导的局面 ,分子医学技术将成医学工作者必须掌握的基本技能 ,使基础研究和临床应用更紧密地相互联系 ,使科研成果更快速地向临床转化 ,使实验医学和经验医学有机地融合起来 ,这将是未来医学发展的方向。     

端粒酶活性及其hTERT基因在增生性组织中的表达

目的:探讨端粒酶在增生性组织中的表达状况。方法:采用Kim的TRAP法和RT-PCR技术检测增生性肉芽组织、子宫内膜组织以及部分生长旺盛的癌旁组织的端粒酶活性及其催化亚基hTERT基因的表达。结果:以Hela细胞对照作为阳性对照,3类组织可部分检测到低水平的端粒酶活性及hTERT基因的表达。结论:端粒酶在生长旺盛的增生性组织中呈低水平表达,与细胞的生长状态有关。